ད་ལྟོའི་ཁ་བྱང་། OX11 0DE, UK, ཌའི་མོན་སྒྲིང་ཁྱིམ་, ཧར་ཝེལ་ཚན་རིག་དང་གསར་གཏོད་གླིང་ག, ཌིཊ་ཀོཊ, Oxfordshire, UK, ཌའི་མོན་འོད་འབྱུང་ཁུངས་ཀུང་སི།, ལས་འཛིན་, གློག་རིག་སྐྱེ་ལྡན་པར་རིས་ལྟེ་བ།
འགྱུར་ལྡོག་ལྟེ་བའི་འོད་བསྡུ་ལེན་གྱི་སྣ་མང་༡(RC-LH1)འདི་ ཕྲ་འབུཔ་གི་འོད་བསྡུ་སྦྱོར་གྱི་ཆ་ཤེས་གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ Rhodopseudomonas palustris ལས་ RC-LH1 མགུ་རྙོག་དྲགས་ཀྱི་ གློག་རྫས་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་གྱི་ བཟོ་བཀོད་གཉིས་ འགོ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH114-Wགི་ 2.65-Å resolution གི་བཀོད་རིས་ནང་ལུ་ RCགི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ཡོད་པའི་ LH1གི་ཆ་ཤེས་༡༤ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཇུ་རྩི་Wགིས་ བར་ཆད་རྐྱབ་དོ་ཡོདཔ་ད་ ཇུ་རྩི་མེད་པའི་སྣ་མང་འདི་ RCགིས་བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཁ་བསྡམས་ཡོདཔ། 16 ཡན་ལག་ LH1 བསྐྱར་ལོག། འ་ནི་བཀོད་རིས་ཚུ་ག་བསྡུར་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ RC-LH1ནང་ལུ་ quinoneགི་གནས་སྟངས་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་བྱུང་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ RCQBགི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ quinoneམཐུད་པའི་སྐབས་ལུ་ ཧེ་མ་ལས་ འགྱུར་བ་འགྱོ་མི་དང་ ལྷན་ཐབས་ཀྱི་ quinoneམཐུད་སའི་ས་སྒོ་ཚུ་རྩིས་ཏེ་ RCལུ་བཏང་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། Wཟས་བཅུད་ཀྱི་ཁྱད་པར་ཅན་གྱི་བཟོ་བཀོད་འདི་གིས་ LH1གི་བསྐྱར་ལོག་འདི་ བཀག་བཞག་སྟེ་ quinone/quinoloneབརྗེ་སོར་འདི་ མགྱོགས་དྲགས་བཟོ་ནི་གི་རྒྱུན་ལམ་ཅིག་བཟོཝ་ཨིན་མས།
འོད་ཀྱི་སྦྱོར་སྡེབ་ཀྱི་སྦེ་བྱིན་མི་ ནུས་ཤུགས་འདི་གིས་ འཛམ་གླིང་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་སྲོག་ལྡན་ཚུ་ག་ར་ ཡུན་བརྟན་གནས་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་དང་ འདི་ལུ་ ཉི་མའི་སྐྱེ་ལྡན་འཕྲུལ་རིག་གི་དོན་ལས་ འོས་འབབ་སྦོམ་སྦེ་ར་ཡོདཔ་ཨིན། འཛམ་གླིང་ནང་ལུ་ འོད་ཀྱི་སྦྱོར་སྡེབ་འདི་ ཡར་དྲག་བཏང་པའི་སྐབས་ལུ་ ཕྲ་འབུཔ་འདི་གིས་ ནུས་ཤུགས་དང་ བཅུད་བསྒྱུར་གྱི་ནུས་པ་མ་འདྲཝ་ཚུ་ བཏོནམ་ཨིན་མས། ཁོང་གིས་ འོད་ཀྱི་སྦྱོར་སྡེབ་ལས་ བཀག་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ གནག་དུང་དུ་སྦེ་ ཕྲ་འབུཔ་སྦེ་སྐྱེས་ཏེ་ ནཱའི་ཊོ་ཇེན་དང་ ནག་རླུང་ཚུ་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་མ་ཚད་ ཆུ་རླུང་བཏོན་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། བྱ་རིམ་འདི་ཚུ་གི་དོན་ལུ་ ནུས་ཤུགས་བྱིན་ནིའི་དོན་ལུ་ འོད་འདི་ མགྱོགས་དྲགས་དང་ འཇོན་ཐངས་ཅན་སྦེ་ རྫས་ཁམས་ནུས་ཤུགས་ལུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དགོཔ་ཨིན། འ་ནི་བྱ་རིམ་འདི་ འོད་བཀག་མི་ ཨེན་ཊི་ན་མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་གིས་ འོད་འདི་ བསྡུ་ལེན་འབད་དེ་ བཀག་བཞག་མི་ནུས་ཤུགས་འདི་ འགྱུར་ལྡོག་ལྟེ་བ་ (RC) ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་བའི་སྐབས་ འགོ་བཙུགསཔ་ཨིན། ཕྲ་འབུཔ་ནང་ལུ་ འོད་ཀྱི་སྦྱོར་སྡེབ་ཀྱི་གཞི་རྟེན་འདི་ RCདབྱེ་བ་༢པ་ལས་གྲུབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ འོད་བསྡུ་ལེན་གྱི་སྣ་མང་༡(LH1)གིས་ བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ RC-LH1གི་སྣ་མང་འདི་བཟོཝ་ཨིན་མས། LH1འདི་ αβ heterodimersགིས་ བཟོཝ་ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ ཕྲ་འབུཔ་གི་སྔོ་རྫས་(BChl)དང་ རྡུལ་རྟེན་གཉིས་དང་ carotenoids(8-12)གཅིག་གིས་ མཐུད་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འཇམ་ཏོང་ཏོ་ཡོད་མི་ LH1 antenna འདི་ RC(9-13) གི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ αβ heterodimers ༡༦ ཡང་ན་ ༡༧ ཡོདཔ་ད་ གཞན་མི་ལྟེ་བ་ཚུ་ནང་ transmembrane peptides གིས་ LH1 གི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ འཕྲོ་མཐུད་དེ་རང་ བར་ཆད་རྐྱབ་ཨིན། ༡༣-༡༥)། མེ་ཏོག་མདོག་ཅན་གྱི་ཤིང་སྣ་ Rhodopseudomonas(Rps.)འདི་ འོད་ཀྱི་སྦྱོར་སྡེབ་ལུ་རྒྱབ་སྐྱོར་འབད་མི་ ནུས་ཤུགས་དང་གློག་རྫས་ཚུ་ ཧ་གོ་ཚུགས་པའི་ དཔེ་ཚད་ཀྱི་སྲོག་ལྡན་ཅིག་ཨིན་མས། Rps གི་ ཕྲ་རྡུལ་བཟོ་བཀོད་དང་པ། palustris RC-LH1 གི་དཔེ་ཚད་འདི་ RC ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ heterodimeric LH1 གི་བསྐོར་ར་༡༥ གིས་ བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ “Protein W” (༡༤) ཟེར་མི་ མ་ཤེས་པའི་ཟས་བཅུད་ཀྱིས་ བར་ཆད་རྐྱབ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཇུ་རྩི་Wའདི་ RPA4402ཟེར་ངོས་འཛིན་འབད་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ 10.5kDaགི་ ཇུ་རྩི་ཅིག་ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ ཚོད་དཔག་འབད་མི་ transmembrane helices(TMH)(TMH)(16)གསུམ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ rpa4402རིགས་མཚན་འདི་ RC-L, M (pufL, pufM) དང་ LH1α, β (pufA, pufB) ཡན་ལག་ཚུ་གི་དོན་ལས་ མིང་བཏགས་ཐངས་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ rpa4402 རིགས་མཚན་འདི་ pufW ལུ་བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ནི་གི་གྲོས་འཆར་བཀོད་ནུག མགུ་འཐོམ་དགོཔ་འདི་ ཟས་བཅུད་Wའདི་ RC-LH1གི་བརྒྱ་ཆ་༡༠དེ་ཅིག་ནང་ལུ་རྐྱངམ་ཅིག་ཡོདཔ་ལས་ Rpsའདི་ གསལ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན་མས། palustris གིས་ RC-LH1 གི་སྣ་མང་གཉིས་བཏོནམ་ཨིན། འདི་ཁར་ ང་བཅས་ཀྱིས་ མཐོ་དྲགས་སྦེ་ཡོད་མི་ cryo-EM (cryo-EM) གི་བཟོ་བཀོད་འདི་ གཅིག་ལུ་ ཟས་བཅུད་W དང་ 14 αβ heterodimers ཡོདཔ་ད་ གཞན་མི་འདི་ ཟས་བཅུད་W མེདཔ་དང་ 16 Heterodimer LH1 གི་བསྐྱར་ལོག་འདི་ ཁ་བསྡམ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱི་གཞི་བཀོད་འདི་གིས་ Rps གི་ RC-LH1 མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ ཧ་གོ་ཐངས་ནང་ གོམ་པ་འགྱུར་བ་ཅིག་ ངོས་འཛིན་འབདཝ་ཨིན། palustrisཟེར་མི་འདི་ ང་བཅས་ཀྱིས་ རིགས་མ་འདྲཝ་རེ་རེ་གི་མི་རློབས་འདི་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ peptideདང་ ཚོས་གཞི་དང་འབྲེལ་བའི་ lipidsདང་quinonesཚུ་ གསལ་ཏོག་ཏོ་སྦེ་བཀོད་ཚུགས་པའི་ གྲོས་ཆོད་ལངམ་སྦེ་ཡོདཔ་ལས་ཨིན་མས། འ་ནི་བཟོ་བཀོད་ཚུ་ ག་བསྡུར་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ ད་ལྟོ་ཚུན་ཚོད་ RC-LH1 མགུ་རྙོག་དྲགས་ནང་ལུ་ མ་ཐོབ་མི་ TMH ཟས་བཅུད་-W གསུམ་གྱིས་ quinone/quinolone བརྗེ་སོར་འདི་ མགྱོགས་དྲགས་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ quinone གི་རྒྱུན་ལམ་བཟོཝ་ཨིན་མས། ཉམས་སྲུང་འབད་དེ་ཡོད་པའི་ lipidདང་quinoneགི་ས་སྒོ་ཚུ་ངོས་འཛིན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ quinoneདང་RCམཉམ་སྡེབ་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ འགྱུར་བ་གསརཔ་ཅིག་ཐོན་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ སྲོག་རླུང་ཡོད་པའི་ phototrophicགི་སྲོག་ལྡན་ཚུ་གི་ photosystem II(PSII)RCལུ་འོས་འབབ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ ཞིབ་འཇུག་འབད་མི་འདི་གིས་ quinone/quinolone གི་གཡོ་འགུལ་གྱི་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་གསརཔ་བྱིན་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ RC-LH1 གི་ཕྲ་འབུཔ་གི་ལྟེ་བ་ནང་ལུ་ བརྗེ་སོར་འབདཝ་ཨིན་མས།
Rps ནང་མཐོང་བའི་ མགུ་རྙོག་གཉིས་ཀྱི་སྐོར་ལས་ ཁ་གསལ་སྦེ་ ཞིབ་འཇུག་འབད་ནི་ལུ་ ཕན་ཐོགས་འབྱུང་ཐབས་ལུ་ཨིན། palustris, ང་ཚོས་སྐྱེ་ལྡན་རྫས་སྦྱོར་གྱི་ཐབས་ལམ་ཐོག་ནས་RC-LH1རེ་རེ་བཞིན་སོ་སོར་ཕྱེ་ཡོད། འཚོ་བཅུད་W-deficient complex(ད་ལས་ཕར་ ΔpufWཟེར་སླབ་འོང་)འདི་ pufWརིགས་མཚན་མེད་པའི་རིགས་མཚན་ལས་ བཙག་འཐུ་འབད་ཡོདཔ་ད་ RC-LH1 complexགཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཟས་བཅུད་Wཡོད་པའི་སྣ་མང་འདི་ རིགས་ཅིག་གིས་ བཏོནམ་ཨིན་མས། འ་ནི་རིགས་ཀྱི་འཚོ་བཅུད་Wའདི་ C-terminusལུ་ 10x His tagབཙུགས་ཏེ་ བཟོ་བཅོས་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ འཚོ་བཅུད་Wཡོད་མི་འདི་ ལྕགས་རིགས་ཚུ་ མ་འགྱོ་བར་ འཚོ་བཅུད་Wམེད་མི་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ ཕན་ནུས་ཅན་སྦེ་མཉམ་བསྡོམ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། མགུ་རྙོག་འདི་ ཕན་ནུས་ཅན་སྦེ་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། (༡༦) Affinity Chromatography (IMAC)
པར་རིས་ ༡ ནང་སྟོན་ཡོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ མགུ་རྙོག་གཉིས་ཆ་རའི་ནང་ RC-L, RC-M དང་ RC-H ཡན་ལག་གསུམ་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཡང་ LH1 ཨེན་ཊི་ན་གིས་ བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་པས། ཇུ་རྩི་མེད་པའི་ 2.80-Aགི་བཟོ་བཀོད་འདི་གིས་ αβ heterodimers 16སྟོན་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ RCགི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ LH1གི་བསྐོར་རིམ་བཟོ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ལུ་ RC-LH116ཟེར་སླབ་ཨིན་མས། ཇུ་རྩི་Wཡོད་པའི་ 2.65Åགི་བཟོ་བཀོད་ལུ་ ཇུ་རྩི་Wགིས་ བར་ཆད་རྐྱབ་མི་ 14-heterodimer LH1ཡོདཔ་ད་ འདི་ལུ་ RC-LH114-Wཟེར་སླབ་ཨིན་མས།
(ཀ དང་ ཁ) རྫས་སྦྱོར་གྱི་ཁ་ཐོག་མཚོན་ཚུལ། (C དང་ D) མཐུད་སྦྱོར་གྱི་ཚོས་གཞི་ཚུ་ རྡོ་རིང་ནང་ལུ་བཀོད་ཡོདཔ་ཨིན། (E དང་ F) cytoplasmic གི་ཁ་ཐོག་ལས་ བལྟ་བརྟོག་འབད་མི་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ཚུ་ལུ་ peptides དང་ LH1 subunits ཚུ་ མགུ་བསྐོར་ནང་ལུ་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཚུ་ཡང་ ཟས་བཅུད་W གི་བར་སྟོང་ལས་ གཡས་ཁ་ཐུག་ལུ་ ཨང་གྲངས་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། sphaeroides མགུ་རྙོག་ཅན་ (༡༣)]. LH1-α གི་དོན་ལུ་ ཟས་བཅུད་ཡན་ལག་གི་ཚོས་གཞི་འདི་སེརཔོ་ཨིན། LH1-β གི་དོན་ལུ་ ཟས་བཅུད་ཡན་ལག་གི་ཚོས་གཞི་འདི་ ཧོནམ་ཨིན། ཟས་བཅུད་-W གི་དོན་ལུ་ ཟས་བཅུད་འདི་དམརཔོ་ཨིན། RC-H གི་དོན་ལུ་ དེ་ cyan ཨིན། RC-L གི་དོན་ལུ་ འདི་ Orange ཨིན། for RC-M, མེ་ཇེན་ཊ། Cofactorsའདི་ rodsགིས་སྟོནམ་ཨིནམ་ད་ ལྗང་ཁུ་གིས་ BChlདང་BPhགི་རྡུལ་རྟེན་ཚུ་སྟོནམ་ཨིན་མས། (G དང་ H) RC-LH114-W མགུ་རྙོག་ཅན་ (G) དང་ RC-LH116 མགུ་རྙོག་ཅན་ (H) གི་འདྲ་མཉམ་གྱི་ལུང་ཕྱོགས་ནང་ ཟས་བཅུད་-W བར་སྟོང་གི་མཐོང་ཚུལ། ཀོ་ཕེག་ཊར་ཚུ་ ས་སྟོང་བཀང་ནིའི་རྣམ་པ་ལུ་བཀྲམ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན་ ཀེ་ལེ་ཊེཌ་ཀུའི་ནོན་འདི་ ཧོནམ་སྦེ་བཀྲམ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན། ཟས་བཅུད་W གི་བར་སྟོང་འདི་ (G) ནང་ལུ་ ཐིག་སྔོན་པོ་གིས་ གསལ་སྟོན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ད་ LH116 གི་སྒོར་སྒོར་ནང་ལུ་ quinone/quinolol ཁྱབ་སྤེལ་འགྱོ་སའི་ དོང་ཆུང་ཀུ་ཚུ་ (H) ནང་ལུ་ ཐིག་ནགཔོ་གིས་ གསལ་སྟོན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན།
པར་རིས་ ༡ པ་ (ཀ དང་ ཁ) གིས་ RC འདི་ LH1αβ heterodimers གི་ ཁ་ཕྱེ་ཡང་ན་ ཁ་བསྡམས་པའི་ བཀོད་སྒྲིག་ཚུ་གིས་ བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཚུ་གིས་ BChl གཉིས་དང་ carotenoid གཅིག་ མཐུད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༡ དང་ ཁ དང་ ཁ) ཧེ་མའི་ཞིབ་འཇུག་གིས་ Rps འདི་ LH1 མགུ་རྙོག་ཅན་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། spirulina xanthinགི་སྐྱེ་ལྡན་སྦྱོར་རྫས་ལམ་ལུགས་ནང་ལུ་ འ་ནི་རིགས་སྣ་ནང་ལུ་ carotenoids(17)གི་མི་རློབས་སླ་བསྲེ་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ spiropyrroxanthin འདི་ carotenoid གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ དེ་གི་མཐུག་ཚད་འདི་ བསམ་པ་རྫོགས་པའི་ རྫས་སྦྱོར་ཅིག་ཨིན། དེ་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ LH1 མཐུད་སའི་ས་ཁོངས་ག་རའི་ནང་ spiroxanthin གི་དཔེ་སྟོན་བཟོ་ནི་གདམ་ཁ་རྐྱབ་ཅི། alpha དང་ beta polypeptides འདི་ ཕྱི་ཁའི་ལུང་ཕྱོགས་ཐུང་ཀུ་ཡོད་པའི་ TMHs རྐྱངམ་ཅིག་ཨིན། (པར་རིས་ ༡ དང་ A, B, E, དང་ F) C-terminusལུ་ ལྷག་ལུས་༡༧གི་མཐུག་ཚད་མཐོང་མ་ཚུགས་རུང་ alpha polypeptideའདི་ Met1ལས་ Ala46ཚུན་ཚོད་ མགུ་རྙོག་དྲགས་གཉིས་ཆ་རའི་ནང་ལུ་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། β polypeptide འདི་ RC-LH116 ནང་ Gly4 ལས་ Tyr52 ལུ་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ད་ RC-LH114-W ནང་ Ser5 ལས་ Tyr52 ལུ་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཡང་ན་ ༤ N-terminal ཡང་ན་ ༡༣ C-terminal ལྷག་མའི་མཐུག་ཚད་མཐོང་མ་བྱུང་།(པར་རིས་S1) རི་དྭགས་ཀྱི་རིགས་ལས་ བཟོ་མི་ RC-LH1 སླ་བསྲེ་རྐྱབ་མི་གི་ Mass spectrometry དབྱེ་དཔྱད་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ ལུང་ཕྱོགས་མེད་མི་འདི་ འ་ནི་peptides གི་ heterologous cleavage གི་གྲུབ་འབྲས་ཨིནམ་སྦེ་མཐོང་ནུག(པར་རིས་S1 དང་S2) α-Met1 གི་ N-terminal ཕོར་མའི་ལེ་ཤཱན་ཡང་ བལྟ་རྟོགས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། (f) དབྱེ་ཞིབ་ལས་ α-peptide ནང་ fMet1 ལས་ Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 བར་གྱི་ལྷག་ལུས་དང་ β-peptide ནང་ Ser2 ལས་ Ala53 བར་གྱི་ལྷག་ལུས་ཡོད་པའི་གནས་ཚུལ་ཐོན་ཡོདཔ་ལས་ དྲོད་ཚད་དམའ་བའི་EM མཐུག་ཚད་ཀྱི་སབ་ཁྲ་དང་མཐུན་སྒྲིག་ལེགས་ཤོམ་ཡོདཔ་ཨིན།
α-His29 དང་ β-His36 གི་མཉམ་འབྲེལ་གྱིས་ BChls གདོང་གདོང་བཟོཝ་ཨིན། αβ heterodimer རེ་རེ་གིས་ ཁྱིམ་ཚང་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ RC གི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོད་པའི་ བསྐྱར་ལོག་ཅིག་བཟོཝ་ཨིན་མས། RC-LH114-W གི་ 877 nm band དང་ཕྱདཔ་ད་ RC-LH116 གི་ 880 nm གི་འཐེན་ཤུགས་དམར་པོ་འདི་ 3 nm ཨིན། (པར་རིས་ ༢A) ཨིན་རུང་ སྒོར་སྒོར་གྱི་ dichroism spectrum འདི་ ཧ་ལམ་ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། དམརཔོ་གི་འགྱུར་བ་འདི་ ཚ་དྲོད་ཀྱི་གཡོ་འགུལ་མར་ཕབ་འགྱོ་མི་དང་ བསྐོར་རིམ་ནང་ལུ་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་ཡར་སེང་འགྱོ་མི་ལས་བརྟེན་ཏེ་ཨིན་མས།
(ཀ) Ultraviolet/visible/near-infrared absorption spectrum འདི་གི་མཐོ་ཚད་ཚུ་ ཁོང་རའི་ཚོས་གཞི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ རྟགས་བཀལ་ཏེ་ ༧༧༥ nm ལུ་ BPh མཐོ་ཚད་ལུ་ སྤྱིར་བཏང་བཟོ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། (ཁ) ༨༠༥ nm ལུ་ BChl དབང་པོ་ལུ་ སྤྱིར་བཏང་བཟོ་མི་ སྒོར་སྒོར་གྱི་འོད་བརླབས། (C དང་ D) RC-LH114-W མགུ་རྙོག་ (C) དང་ RC-LH116 མགུ་རྙོག་ (D) གི་དུས་ཚོད་ཐག་གཅོད་འབད་བའི་ དབང་པོའི་འོད་རླབས་ལས་ ΔA འོད་རླབས་འདེམས་སྒྲུག་འབད་ཡོདཔ། ག་བསྡུར་ལེགས་ཤོམ་གྱི་དོན་ལས་ འོད་རླབས་ཚུ་ག་ར་ ༠.༢ ps ལུ་ −A གི་ ∆A ལུ་ སྤྱིར་བཏང་བཟོཝ་ཨིན། (E) UQ2 གི་ཆ་ཚད་སྣ་ཚོགས་ཡོད་པའི་སྐབས་ འོད་འཕྲོའི་རྗེས་སུ་ cytochrome c2 oxidation གི་ཚད་གཞི་ (གནས་སྡུད་སྔོ་མའི་དོན་ལུ་ པར་རིས་ S8 བལྟ།) (F) འོད་དམའ་བ་དང་བར་མ་ ཡང་ན་ མཐོ་བའི་འོད་ཀྱི་འོག་ལུ་འཚར་ལོངས་བྱུང་མི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ (10, 30 or 300μMm-2 s-1, respectively) འཚོ་བཅུད་Wདང་RC-Lཡན་ལག་ཚུ་ བཙག་འཐུ་འབད་བའི་མགུ་རྙོག་དང་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོད་པའི་ གདོང་ཕྱོགས་ཀྱི་ཆ་ཚད་ནང་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན། ཟས་བཅུད་ཀྱི་གནས་ཚད་འདི་ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis དང་ immunoassay གི་ཐོག་ལས་ གཏན་འབེབས་བཟོ། ༼གནས་སྡུད་ངོ་མ་གི་དོན་ལུ་ པར་རིས་S9 བལྟ།༽ གཙང་མ་བཟོ་ཡོད་པའི་ RC-LH114-W མགུ་རྙོག་དང་འབྲེལ་བའི་ ཆ་ཚད་གཏན་འབེབས་བཟོ། RC-Lལས་ ཟས་བཅུད་Wགི་ཆ་ཚད་འདི་ ༡:༡ཨིན་མས།
RC-LH114-W གི་ αβ14 བསྐྱར་ལོག་ནང་ གནས་ཚད་ ༡ ནང་ཡོད་པའི་ BChls (པར་རིས་ ༡, A, C, དང་ E) RC-LH116 ནང་ཡོད་པའི་འདྲ་མཉམ་གྱི་ BChls ལས་ 6.8Å གིས་ RC གཞི་རིམ་ཞལ་འདེབས་ཕུལ་མཁན་ (P) དང་ཐག་ཉེ་བ་ཡོད། (པར་རིས་ ༡, F, S3, D); དེ་འབདཝ་ད་ མགུ་རྙོག་གཉིས་ཀྱི་ དུས་ཐུང་དབང་པོའི་ གཡོ་འགུལ་གྱི་ RC-LH114-W དང་ RC-LH116 གི་དོན་ལུ་ LH1 ལས་ RC ལུ་ འཕར་རྩའི་ནུས་ཤུགས་སྤོ་སོར་གྱི་དུས་ཚོད་ རྟག་བརྟན་འདི་ 40 ±4 དང་ 44±3 ps ཨིན་ (པར་རིས་ ༢) , C དང་ D, པར་རིས་ S4 དང་ཐིག་ཁྲམ་ S2). དེ་མ་ཚད་ RC ནང་འཁོད་ལུ་ གློག་རིག་སྤོ་བཤུད་ཀྱི་ཁྱད་པར་ཡང་ མཐོང་མ་ཚུགས།(པར་རིས་ S5 དང་འབྲེལ་ཡོད་ ལྷན་ཐབས་ཡིག་ཆ།) ང་བཅས་ཀྱིས་ LH1 དང་ RC-P གི་བར་ན་ ནུས་ཤུགས་སྤོ་བཤུད་ཀྱི་དུས་ཚོད་ཀྱི་ མཐུན་འབྲེལ་འདི་ LH1 བསྐྱར་འཁོར་གཉིས་ཀྱི་ནང་ལུ་ BChl མང་ཤོས་ཅིག་གི་ ཐག་རིང་ཐུང་དང་ གྲུ་ཟུར་ དེ་ལས་ འོས་འབབ་ཅན་གྱི་ནུས་ཤུགས་ཚུ་ ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་ཡོད་མི་ལུ་བརྟེན་ཏེ་ཨིནམ་སྦེ་ དོགས་པ་བསྐྱེདཔ་ཨིན། འདི་ཡང་ ཐག་རིང་ཐུང་དམའ་ཤོས་ལུ་ལྷོད་ནི་གི་དོན་ལུ་ LH1 ནུས་ཤུགས་ཀྱི་དཔེ་རིས་འཚོལ་ཞིབ་འབད་ནི་འདི་ ཐད་ཀར་དུ་ ནུས་ཤུགས་དམའ་ཤོས་ལས་ RC ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ནི་ལས་ མགྱོགས་དྲགས་མེདཔ་བཟུམ་ཅིག་འདུག། RC-LH114-Wནང་ལུ་ཡོད་པའི་ open-loop LH1འདི་ བཟོ་བཀོད་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ དྲོད་ཤུགས་དམའ་བའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ ཚ་དྲོད་ཀྱི་གཡོ་འགུལ་དེ་ཅིག་རང་མེདཔ་ལས་ RC1གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ βBChlsགི་ཚོས་གཞི་གི་ཐག་རིང་ཐུང་ལས་ ཁང་མིག་གི་དྲོད་ཤུགས་ནང་ལུ་ αβ14གི་སྒོར་རིམ་རིངམོ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན།
RC-LH116 མགུ་རྙོག་ནང་ BChls ༣༢ དང་ carotenoids ༡༦ ཡོདཔ་ད་ དེ་གི་སྤྱིར་བཏང་སྒྲིག་བཀོད་འདི་ ཐར་མོ་ཀྲོ་མེ་ཊི་ཡམ་ (Tch.) པིཌ་པི་ཌུམ་ [Protein Data Bank (PDB) ID 5Y5S] (9), ཐིའོར་ཧོ་ཌོ་ཝི་བི་རིའོ་ (9), ཐིའོ་རོ་ཌོ་ཝི་བི་རིའོ་ (9), ཐིའོ་རོ་ཌོ་ཝི་བི་རིའོ་ (Th. (༡༢) དང་ སྐྱུ་རུ་ལྗང་ཁུ་ (Blc.viridis) (PDB ID ༦ET༥) (༡༠) བཅས་ཡིན། ཕྲང་སྒྲིག་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ αβ heterodimers གི་གནས་རིམ་ནང་ ཐ་དད་ཆུང་ཀུ་ཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་མཐོང་ཡོདཔ་ད་ དམིགས་བསལ་གྱིས་ ༡-༥ དང་ ༡༥ དེ་ལས་ ༡༦ (པར་རིས་ S6) ཚུ་ཨིན། ཟས་བཅུད་Wཡོད་མི་འདི་གིས་ LH1གི་བཟོ་བཀོད་ལུ་ ཕན་གནོད་སྦོམ་སྦེ་རང་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་གི་TMHsགསུམ་འདི་ བསྐྱར་ལོག་ཐུང་ཀུ་གིས་ མཐུད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ཀྱི་ཕྱོགས་ལུ་ N-terminalདང་ cytoplasmicགི་ཕྱོགས་ལུ་ C-terminalཡོདཔ་ཨིན། Protein-Wའདི་ ཆུ་ལུ་མ་དགའ་མི་ཅིག་ཨིནམ་ད་ TMH2དང་TMH3གིས་ LH1αβ-14དང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ ཁ་ཐོག་ལུ་འགྱུར་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ངོས་འདྲ་བ་འདི་ ངོ་མ་རང་ transmembrane ལུང་ཕྱོགས་ནང་ལུ་ Phe དང་ Leu དེ་ལས་ Val གི་ལྷག་ལུས་ཚུ་གིས་ གྲུབ་ཡོདཔ་ཨིན། འ་ནི་ལྷག་ལུས་ཚུ་ hydrophobic amino acids དང་ αβ-14 གི་ཚོས་གཞི་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ བསྡུ་གསོག་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། ལྷག་ལུས་ལ་ལུ་ཅིག་གིས་ཡང་ འབྲེལ་བ་འཐབ་ནི་ལུ་ ཕན་ཐོགས་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ W-Thr68 དང་ β-Trp42 གི་བར་ན་ལུ་ hydrogen bond ཡོད་མི་འདི་ཨིན་མས།(པར་རིས་ ༣ དང་ F དེ་ལས་ G) ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཁ་ཐོག་ལུ་ Gln34འདི་ αβ-14 carotenoids གི་ ketoསྡེ་ཚན་གྱི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན། འདི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ n-dodecyl β-d-maltoside(β-DDM)གི་རྡུལ་རྟེན་འདི་ བསལ་ཚུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གི་ཆུ་ལུ་མ་དགའ་མི་མཇུག་འདི་ ཇུ་རྩི་Wདང་αβ-14གི་བར་ན་ལུ་ ཁྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ མར་ཁུ་གི་མཇུག་འདི་ གཟུགས་ནང་ལུ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ ཟས་བཅུད་W དང་ RCH གི་ C-terminal resolution regions འདི་ གནམ་མེད་ས་མེད་ ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ དམིགས་བསལ་གྱི་འབྲེལ་བ་འཐབ་ནི་གི་གོ་སྐབས་ནང་ལུ་མེདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡི།(པར་རིས་༡པ་དང་A དེ་ལས་E) ཨིན་རུང་ འ་ནི་ཇུ་རྩི་གཉིས་ཀྱི་བར་ན་ ཐག་མ་བཅད་པའི་ C-terminal amino acidsནང་ལུ་ འབྲེལ་བ་འབྱུང་སྲིད་ནི་ཨིནམ་ལས་ འདི་གིས་ RC-LH114-Wབསྡུ་སྒྲིག་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ ཇུ་རྩི་Wབཙུགས་ནི་གི་ཐབས་ལམ་བྱིན་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས།
(ཀ) མགུ་སྐོར་གྱི་རྣམ་པ་ནང་ལུ་ LH1αβ14དང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་མཐུད་འབད་མི་ Protein-Wའདི་ལུ་ རྡོ་གི་དབྱིབས་བཟུམ་གྱི་ ཟུར་རིམ་ཅིག་ཡོདཔ་ཨིན། (ཁ) ཆུ་ལུ་མ་དགའ་བའི་ཚོས་གཞི་ཡོད་པའི་ཁ་ཐོག་གིས་ ངོས་འཛིན་འབད་མི་ Protein-W Polar དང་ charged གི་ས་སྒོ་ཚུ་ cyan དང་ hydrophobic གི་ས་སྒོ་ཚུ་ དཀརཔོ་དང་ ཤུགས་སྦེ་ hydrophobic གི་ས་སྒོ་ཚུ་ ཚལ་ལུ་གི་ས་སྒོ་ཚུ་ཨིན། (C དང་ D) འགུལ་བརྙན་ནང་ལུ་སྟོན་མི་ Protein-W འདི་གི་གདོང་ཕྱོགས་འདི་ (A) (C) དང་ཅོག་འཐདཔ་ཨིནམ་དང་ ༡༨༠° (D) གིས་བསྒྱིརཝ་ཨིན། གོ་རིམ་ནང་ལུ་ གནས་རིམ་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ཚུགས་པའི་ ལྷག་ལུས་ཚུ་གིས་ གཞུ་དབྱིབས་ཚོས་གཞི་གི་འཆར་གཞི་འདི་ ངོས་ལེན་འབདཝ་ཨིནམ་ད་ དེ་ནང་ N-terminal འདི་ ཧོནམ་དང་ C-terminal འདི་ དམརཔོ་ཨིན། (E) ཟས་བཅུད་-W འདི་ (A) དང་འདྲཝ་སྦེ་ཡོདཔ་ད་ ཟས་བཅུད་-W:LH1 གི་ལྷག་ལུས་ཚུ་ རྟགས་བཀལ་ཡོད་པའི་ རྡོ་ཚུ་གིས་ ངོས་འཛིན་འབདཝ་ཨིན། (F) Protein-W འདི་ (E) དང་ LH1αβ14 དང་འབྲེལ་བའི་ མགུ་སྐོར་གྱི་ཁྱད་ཚབ་ནང་ལུ་ ༩༠° བསྒྱིརཝ་ཨིནམ་དང་ ཕྲ་རིང་གི་ཁྱད་ཚབ་ནང་ལུ་ ངོས་འདྲ་བའི་ལྷག་ལུས་ཚུ་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན། beta polypeptide ལས་ ལྷག་ལུས་ཚུ་ ཁ་ཡིག་བཏགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཀོ་ཕེག་ཊར་འདི་ པར་རིས་༡ པའི་ཚོས་གཞི་དང་མཐུན་པའི་ཕྲ་རིང་ཅིག་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ད་ བརྡལ་བཤིག་འགྱོ་མི་ β-DDM འདི་ ཐལཝ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ད་ སྲོག་རླུང་འདི་ དམརཔོ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། (G) (F) ནང་ལུ་ཡོད་པའི་མཐོང་སྣང་འདི་ ༡༨༠° བསྒྱིར་ཡོདཔ་དང་ འདི་ནང་ལུ་ alpha polypeptide གི་ལྷག་ལུས་ཚུ་ མངོན་གསལ་ཅན་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན།
Protein-Wགིས་ αβ heterodimerགི་ཚབ་བཙུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ αβ heterodimers འགོ་དང་པ་གསུམ་འདི་ གཡོ་འགྱོ་ནི་ལས་ བཀག་ཆ་འབདཝ་ཨིན་མས། གློག་བརྙན་སྤྱིར་བཏང་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ αβ-1 heterodimer དང་པ་གི་ གཡོ་འགུལ་གྱི་གྲུ་ཟུར་མཐོ་ཤོས་འདི་ ༢༥° ལས་ ༢༩° ཚུན་ཨིནམ་སྦེ་མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། heterodimers གཉིས་པ་དང་གསུམ་པ་འདི་ གོ་རིམ་བཞིན་དུ་ ༡༢° ལས་ ༢༢° དང་ ༥° ལས་ ༡༠° ཚུན་ གཡོ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། RCགི་བར་ཆད་ལས་བརྟེན་ཏེ་ αβ-1གི་གཡོ་འགུལ་ནང་ལུ་ αβཆ་གཉིས་པ་མ་ཚུདཔ་ལས་ LH1གི་སྒོར་ཐིག་ནང་ལུ་ ཁྱད་པར་གསལ་ཏོག་ཏོ་སྦེ་ཐོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། αβ heterodimers གཉིས་མེད་ནི་འདི་གིས་ BChl བཞི་དང་ carotenoids གཉིས་མེདཔ་ལས་ carotenoids གཅིག་ཡང་ αβ-1 གི་ཡན་ལག་ལུ་ མཐུད་མི་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ལས་ LH114-W གི་ནང་ལུ་ carotenoids 13 Vegetarian དང་ 28 BChls ཡོདཔ་ཨིན་མས། αβ1ལས་ 7གི་བར་ན་ཡོད་པའི་ མགུ་རྙོག་དྲགས་གཉིས་ཀྱི་ ས་གནས་ཀྱི་ཚད་རྩིས་འདི་ LH1གི་བསྐོར་རིམ་གཞན་མི་ཚུ་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ དམའ་ཤོས་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ RC QBགི་ས་སྒོ་གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་པའི་ LH1ཡན་ལག་གི་ རང་བཞིན་གྱི་གཤེར་ཁུ་འདི་ གསལ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན་མས།
RC-LH114-W (A དང་ B) དང་ RC-LH116 (C དང་ D) གི་པར་རིས་ཚུ་ མཐོ་ཚད་/ཕྱོགས་མཐོང་སྣང་ (A དང་ B) (A དང་ C) དང་ པར་རིས་ ༡ གི་ ཁོག་སྟོང་ཁ་ཐོག་ལས་ གཅིག་མཚུངས་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། ཚོས་གཞི་ཅན་གྱི་ལྡེ་མིག་ཚུ་གཡས་ཁ་ཐུག་ལུ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན།
གཞན་མི་ཁྱད་ཆོས་ཅན་གྱི་ལྟེ་བ་འདི་ ༡:༡༤གི་ཆ་ཚད་ཡོད་མི་འདི་ Rhodococcus sphaeroides(Rba.) RC-LH1-PufX dimer(༡༣)འདི་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ ཟས་བཅུད་Wདང་PufXལུ་ རིགས་མཚུངས་མེདཔ་ལས་ ཁོང་རའི་LH1གི་བཀོད་རིས་ལུ་ ཕན་གནོད་སྦོམ་སྦེ་རང་ཡོདཔ་ཨིན་མས། PufXའདི་ N-terminal cytoplasmic domainཡོད་པའི་ TMHགཅིག་ཨིནམ་ད་ འདི་གིས་ RC-H subunit(༡༣)གི་ cytoplasmicཕྱོགས་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཕ་ལུསི་ཊི་རིསི་ LH116αβ-16. PufX གིས་ RC-LH1 དང་ cytochrome bcl complex གི་བར་ན་ quinone/quinolone བརྗེ་སོར་གྱི་དོན་ལུ་ རྒྱུན་ལམ་བཟོ་སྟེ་ Rba ག་རའི་ནང་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན། sphaeroides ཀོར་མགུ་རྙོག་ (༡༣)། མོ་ནོ་མར་-མོ་ནོ་མར་ངོས་འདྲ་བ་འདི་ Rba ནང་ལུ་ཡོད་རུང་། sphaeroides RC-LH1-PufX dimer འདི་ RC-LH114-W ནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་ W གི་མཐུད་སའི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ཡོདཔ་ད་ PufX དང་ཟས་བཅུད་-W གིས་ བར་སྟོང་འདི་ འདྲ་མཉམ་གྱི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH114-Wགི་ཁྱད་པར་འདི་ Pseudomonas rosea LH1གི་རིག་ཚོད་ཀྱི་ quinone channel(8)དང་གཅིག་ཁར་ཡང་ མཐུན་སྒྲིག་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཇུ་རྩི་Wདང་ PufXདང་འབྲེལ་བ་མེད་པའི་ peptidesགིས་ བཟོཝ་ཨིན་མས།(པར་རིས་S7B) དེ་མིན་ Blc ནང་ཡོད་པའི་ quinone རྒྱུ་ལམ། γ subunit (7) གཅིག་ཕྱིར་འཐེན་འབད་དེ་གྲུབ་པའི་ emerald green LH1 འདི་ གནས་སྟངས་འདྲ་མཚུངས་ནང་ ཆགས་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ S7C) ཇུ་རྩི་མ་འདྲཝ་ཚུ་གིས་ བར་འཛུལ་འབད་དེ་ཡོད་རུང་ RC-LH1གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ quinone/quinololགི་རྒྱུ་ལམ་ཐོན་མི་འདི་ འཕེལ་འགྱུར་གྱི་དཔེ་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ ཇུ་རྩི་Wགིས་བཟོ་མི་ ཁྱད་པར་འདི་གིས་ quinoneགི་རྒྱུ་ལམ་སྦེ་ལཱ་འབད་འོང་ཟེར་ཨིན་མས།
LH114-Wགི་བསྐོར་རིམ་ནང་ལུ་ བར་སྟོང་ཡོད་མི་འདི་གིས་ RC-LH114-Wདང་ ནང་འཁོད་ཀྱི་ས་སྒོ་གི་བར་ན་ལུ་ འཕྲོ་མཐུད་དེ་རང་ གདོང་ཁེབས་ཅིག་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། RC-LH116 མགུ་རྙོག་འདི་ ཁ་བསྡམས་ཡོད་པའི་ Tch དང་འདྲ། སྨན་ཁབ་ལྟ་བུའི་མགུ་རྙོག་ (༢༢) (པར་རིས་ ༡H)། འཚོ་བཅུད་ཀྱི་རྒྱུན་ལམ་བརྒྱུད་དེ་ quinone ཁྱབ་སྤེལ་འགྱོ་མི་འདི་ མགྱོགས་དྲགས་སྦེ་ཡོདཔ་ལས་ LH114-W གི་བསྐོར་རིམ་འདི་གིས་ LH116 བསྐོར་རིམ་ལས་ལྷག་སྟེ་ RC གི་ཚོང་འབྲེལ་འདི་ མགྱོགས་དྲགས་སྦེ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ལས་ RC ནང་ལུ་ quinone ཁྱབ་སྤེལ་འགྱོ་ནི་འདི་ མང་སུ་ཅིག་ བཀག་ཆ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། འཚོ་བཅུད་Wགིས་ RCབརྒྱུད་དེ་ quinonesབསྒྱུར་བཅོས་འབད་ནི་ལུ་ ཐོ་ཕོགཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ubiquinone 2 (UQ2) གི་ཆ་ཚད་ཅིག་གུ་ cytochrome oxidation assay འབད་ཡི། མ་གཞི་ chelated quinone ཡོད་མི་འདི་གིས་ Michaelis གི་ཚད་གཞི་འདི་ གཏན་གཏན་སྦེ་གཏན་འབེབས་བཟོ་ནི་ལུ་ ཐོ་ཕོགཔ་ཨིན་རུང་ (RC-LH114-W དང་ RC-LH116 འདི་ 0.2±0.1μM དང་ 0.5±0.2μM ལུ་འོས་འབབ་ཡོདཔ་ཨིན།) RC-LH±0.114-114-116 གི་ཚད་གཞི་མཐོ་ཤོས་འདི་ s. RC-LH116 ལས་ 28±5% ཆེ་བ་ (3.6±0.1 e-RC-1 s-1) ཡིན།
ང་བཅས་ཀྱིས་ འགོ་ཐོག་ལུ་ ཟས་བཅུད་-W འདི་ བརྒྱ་ཆ་༡༠དེ་ཅིག་གི་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ནང་ལུ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཚོད་དཔག་འབད་ཡི། (༡༦) འདི་ཁར་ འོད་དམའ་བ་དང་ འོད་བར་མ་ དེ་ལས་ འོད་མཐོ་བའི་ འཕེལ་རྒྱས་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་གི་ སྡོད་གནས་ཚད་གཞི་འདི་ ༡༥±༠.༦% དང་ ༡༡±༡% དེ་ལས་ ༠.༩±༠.༥ % (པར་རིས་ ༢F) ཨིན། འབོར་ཚད་ག་བསྡུར་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ histidine tagཁ་སྐོང་བཀོད་མི་འདི་གིས་ རི་དྭགས་ཀྱི་རིགས་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ ཟས་བཅུད་Wགི་འབོར་ཚད་འདི་ མར་ཕབ་མ་འབད་བར་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ནུག(P = 0.59) ཨིན་རུང་ RC-LH1ནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་Wཉུང་སུ་སྦེ་ཡོད་མི་འདི་གིས་ RCsལ་ལུ་ཅིག་ མགྱོགས་དྲགས་སྦེ་འགྱོ་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ལས་ RC-LH116ནང་ལུ་ quinone/quinoloneབརྗེ་སོར་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ འོད་ཀྱི་གནས་ཚད་མཐོ་དྲགས་འདི་ འཕྲལ་ཁམས་ཀྱི་ གནས་སྡུད་ཚུ་དང་ མ་མཐུནམ་སྦེ་མཐོང་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ pufWརིགས་མཚན་གྱི་བརྡ་སྟོན་འདི་ འོད་ཤུགས་ཆེ་བའི་འོག་ལུ་ ཡར་སེང་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།(པར་རིས་S11) (23) RC-LH1ནང་ལུ་ pufWགི་ཡིག་བསྒྱུར་དང་ ཇུ་རྩི་གི་བར་ནའི་ཁྱད་པར་འདི་ མགུ་ཐོམ་སི་སི་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ འདི་གིས་ ཇུ་རྩི་གི་ཁྲིམས་ལུགས་ཚུ་ གསལ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན་མས།
RC-LH114-Wནང་ལུ་ cardiolipin(CDL)༦དང་ phosphatidylcholine(POPC)༧ དེ་ལས་ phosphatidylglycerol(POPG)༡དང་β-DDMགི་རྡུལ་རྟེན་༢༩ཚུ་ བགོ་བཀྲམ་འབད་དེ་ CDLs༦དང་POPCs༢༤ དེ་ལས་ POβsDMs༢དང་༡༢ཚུ་ དཔེ་སྟོན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH116 (པར་རིས་ ༥ ཀ་དང་ཁ)། འ་ནི་བཟོ་བཀོད་གཉིས་ཀྱི་ནང་ལུ་ CDLའདི་ ཧ་ལམ་ cytoplasmicགི་ཕྱོགས་ལུ་ཡོདཔ་ད་ POPCདང་POPG དེ་ལས་ β-DDMཚུ་ མང་ཤོས་ཅིག་རང་ luminalགི་ཕྱོགས་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། RC-LH114-W མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་ αβ-1 ལས་ αβ-6 གི་ས་ཁོངས་ནང་ མར་ཁུ་དང་ བཙོག་རྫས་ཀྱི་རྡུལ་རྟེན་གཉིས་ སོ་སོ་སྦེ་བཞག་ཡོདཔ་ད་ ལྔ་འདི་ RC-LH116 གི་འདྲ་མཉམ་གྱི་ས་ཁོངས་ནང་ སོ་སོ་སྦེ་བཞག་ཡོདཔ་ཨིན། RC དང་ αβ-7 ལས་ αβ-13 གི་བར་ན་ བསྡུ་གསོག་འབད་མི་ CDL གི་ཕྱོགས་གཞན་ཁར་ མར་ཁུ་མངམ་མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༥ དང་ A དང་ B) གཞན་མི་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ བསལ་ཚུགས་པའི་ མར་ཁུ་དང་བཙོག་ཆུ་ཚུ་ LH1གི་ཕྱི་ཁར་ཡོདཔ་ད་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་བསལ་ཚུགས་པའི་ acylགི་རིམ་པ་འདི་ LH1གི་ཆ་ཤེས་གི་བར་ན་ལུ་ ཁྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ RC-LH114-Wནང་ལུ་ β-DDMཟེར་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ RC Aནང་ལུ་ β-DDMཟེར་སླབ་ཨིན་མས། ང་བཅས་རའི་བཟོ་བཀོད་ནང་ལུ་ chelating lipids དང་ detergents གི་གནས་རིམ་ཅོག་འཐདཔ་འདི་གིས་ གཟུགས་ཁམས་དང་འབྲེལ་བའི་ མཐུད་སའི་ས་ཁོངས་ཚུ་ཨིནམ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན། (པར་རིས་S12A) Tchནང་ལུ་ རྡུལ་རྟེན་འདྲ་མཉམ་གྱི་གནས་རིམ་ཡང་ རྟགས་མཐུན་ལེགས་ཤོམ་ཡོདཔ་ཨིན། Gentle དང་ Trv. 970 RC-LH1s (Figure S12, B to E) (9, 12) དང་ lipid head group གི་ hydrogen-bonding residues གིས་ གོ་རིམ་སྒྲིག་སྟེ་ ཉམས་སྲུང་ལེགས་ཤོམ་སྦེ་རང་ འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
(A དང་ B) RC-LH114-W (A) དང་ RC-LH116 (B) peptides ཚུ་ མགུ་སྐོར་གྱིས་སྟོན་ཡོདཔ་ད་ ཚོས་གཞི་ཚུ་ རྡོ་གི་ཐོག་ལས་སྟོན་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཡང་ པར་རིས་༡ པའི་ནང་ ཚོས་གཞི་གི་འཆར་གཞི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མར་ཁུ་ཚུ་ དམརཔོ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ད་ གཙང་སྦྲ་འབད་མི་ཚུ་ སྐྱ་བོ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། RC QA དང་ QB ས་ཁོངས་ཚུ་ལུ་མཐུད་མི་ UQ འདི་སེརཔོ་ཨིནམ་དང་ སོ་སོ་སྦེ་ཡོད་མི་ UQ འདི་ཧོནམ་ཨིན། (C དང་ D) (A) དང་ (B) དང་འདྲ་བའི་བསམ་ཚུལ་ཚུ་ མར་ཁུ་བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། (E to G) RC-LH116 ལས་ Q1(E), Q2(F) དང་ Q3(G) གི་མཐོང་སྣང་སྦོམ་བཟོ་སྟེ་ ཕྱོགས་ཀྱི་རིམ་སྒྲིག་ཚུ་ གཅིག་གིས་གཅིག་ལུ་ ཤན་ཞུགས་འབདཝ་ཨིན། hydrogenམཐུད་རྫས་འདི་ ཐིག་ནགཔོ་སྦེ་སྟོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས།
RC-LH116 ནང་ལུ་ RC QA དང་ QB UQ གཉིས་ཆ་ར་གིས་ གློག་རྫས་ཁ་ཕྱེ་ནིའི་བྱ་རིམ་ནང་ གློག་རྫས་སྤོ་བཤུད་ནང་ བཅའ་མར་གཏོགས་མི་འདི་ ཁོང་རའི་ མཐུད་སའི་ས་ཁོངས་ནང་ལུ་ བརྡལ་བཤིག་འགྱོཝ་ཨིན། ཨིན་རུང་ RC-LH114-W ནང་ལུ་ QB quinone འདི་ ཐག་མ་བཅད་པར་ གཤམ་གསལ་གྱི་སྐོར་ལས་ ཁ་གསལ་སྦེ་ གྲོས་བསྟུན་འབད་ནི་ཨིན། QA དང་ QB quinones གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ chelated UQ རྡུལ་རྟེན་གཉིས་ (RC དང་ LH1 གི་སྒོར་ཐིག་བར་ན་ཡོད་པའི་) RC-LH114-W གི་བཟོ་བཀོད་ནང་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ ཐག་བཅད་ཡོད་པའི་ མགུ་ཏོ་སྡེ་ཚན་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ བགོ་བཀྲམ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ས༌སྟོང)། པར་རིས་ ༥C)། Q1 ལུ་ isoprene གི་ཆ་ཚན་གཉིས་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ སྟུག་ཚད་ཀྱི་སབ་ཁྲ་འདི་གིས་ Q2 གི་ isoprene གི་མཇུག་མ་༡༠ ཆ་ཚང་འདི་ བསལ་ཚུགསཔ་ཨིན། RC-LH116 གི་བཟོ་བཀོད་ནང་ chelated UQ10 རྡུལ་རྟེན་གསུམ་ (Q1 ལས་ Q3, པར་རིས་ ༥D) བསལ་ཡོདཔ་ད་ རྡུལ་རྟེན་ཆ་མཉམ་ལུ་ མཇུག་མ་ཆ་མཉམ་གྱི་ མཐུག་ཚད་གསལ་ཏོག་ཏོ་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༥, D ལས་ G) བཟོ་བཀོད་གཉིས་ཀྱི་ནང་ལུ་ Q1 དང་ Q2 གི་ quinone མགོ་སྡེ་ཚན་གྱི་གནས་རིམ་ཚུ་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ མཐུན་སྒྲིག་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ S12F) དེ་ལས་ RC དང་ཅིག་ཁར་རྐྱངམ་ཅིག་ འབྲེལ་བ་འཐབ་ཨིན། Q1 ནི་ RC-LH114-W གི་ W བར་སྟོང་གི་འཛུལ་སྒོ་ནང་ (པར་རིས་ ༡G དང་ ༥, C, D དང་ E) དང་ Q2 ནི་ QB མཐུད་སའི་ས་ཁོངས་ཀྱི་ཉེ་འདབས་སུ་ཆགས་ཡོད། (པར་རིས་ ༥, C, D) དང་ F) ཉམས་སྲུང་འབད་ཡོད་པའི་ L-Trp143 དང་ L-Trp269 ལྷག་ལུས་ཚུ་ Q1 དང་ Q2 དང་ཧ་ཅང་ཉེ་བར་ཡོདཔ་ལས་ འོས་འབབ་ཅན་གྱི་ π-stacking འབྲེལ་བ་བྱིནམ་ཨིན། (པར་རིས་ ༥ དང་ E དང་ F དེ་ལས་ པར་རིས་ S12) L-Gln88, 3.0 Å ལས་ Q1 གི་ཐག་རིང་སྲོག་རླུང་ལས་ ཆུ་རླུང་སྦྲེལ་མཐུད་ཤུགས་ཆེ་བ་བྱིནམ་ཨིན། (པར་རིས་ ༥E); འདི་ལྷག་མ་འདི་ ཐག་རིང་ཤོས་མཐུན་ལམ་མ་གཏོགས་ RCs ཆ་མཉམ་ནང་ ཉམས་སྲུང་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ S13) L-Ser91འདི་ གཞན་མི་RCsམང་ཤོས་ཅིག་ནང་རང་ Thrགི་ཚབ་ལུ་བཙུགས་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ Q1གི་ methyl oxygenལས་ Angstroms༣.༨ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ hydrogenགི་མཐུན་རྐྱེན་འདི་ ཞན་ཁོག་སྦེ་བྱིན་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས།(པར་རིས་༥E) Q3 ལུ་ དམིགས་བསལ་གྱི་འབྲེལ་བ་མེདཔ་སྦེ་མཐོངམ་ཨིན་རུང་ RC-M subunit དང་ LH1-α subunit ༥ ལས་ ༦ གི་བར་ན་ hydrophobic ལུང་ཕྱོགས་ནང་ ཆགས་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༥, D དང་ G) Q1, Q2 དང་ Q3 ཡང་ན་ ཉེ་འདབས་ཀྱི་ chelated quinones ཡང་ Tch ནང་ཐག་གཅོད་བྱས་ཡོད། དྲག་པོ་, Trv. རིགས་ ༩༧༠ དང་ Blc. མིག་ཏོ་གི་བཟོ་བཀོད་(༩, ༡༠, ༡༢) གིས་ RC-LH1 མགུ་རྙོག་དྲགས་ནང་ལུ་ ཉམས་སྲུང་འབད་དེ་ཡོད་པའི་ ལྷན་ཐབས་ཀྱི་ quinone མཐུད་སའི་ས་ཁོངས་ལུ་ བརྡ་སྟོནམ་ཨིན། (པར་རིས་ S12G) RC-LH116 ནང་ བརྡལ་བཤིག་འགྱོ་མི་ UQs ལྔ་འདི་ ལཱ་འབད་ཚད་མཐོ་བའི་ ཁུ་བ་ཚོས་གཞི་བརྟག་དཔྱད་ (HPLC) གིས་ ཐག་བཅད་མི་ མགུ་རྙོག་དྲགས་རེ་རེ་གི་ UQs ༥.༨±༠.༧ དང་ཅིག་ཁར་ མོས་མཐུན་ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ཡོདཔ་ད་ RC-LH114-W ནང་ལུ་ བརྡལ་བཤིག་འགྱོ་མི་ UQs གསུམ་འདི་ 6.2±0.3 གི་རྡུལ་རྟེན་ལས་ དམའ་ཤོས་ཅིག་ཨིན་མས། བཟོ་བཀོད།
pseudo-symmetric L དང་ M polypeptides རེ་ལུ་ TMHs ལྔ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ BChl dimer གཅིག་དང་ BChl monomers གཉིས་ དེ་ལས་ non-Heme iron དང་ UQ10 རྡུལ་རྟེན་གཅིག་གཉིས་བསྡོམས་ཏེ་ heterodimer བཟོཝ་ཨིན་མས། ཀེ་ཊོན་སྡེ་ཚན་ནང་ལུ་ hydrogenམཉམ་སྦྱོར་ཡོད་མི་དང་ Rpsནང་ལུ་ བསྡུ་གསོག་འབད་མི་ལས་བརྟེན་ཏེ་ carotenoidsའདི་ M-subunitནང་ལུ་ བཙུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ལུ་ cis-3,4-dehydroorhodopinཟེར་སླབ་ཨིན་མས། རིགས་ (25). RC-Hགི་ཕྱི་ཁའི་གདོང་ཁེབས་མངའ་ཁོངས་འདི་ TMHགཅིག་གིས་ གདོང་ཁེབས་ལུ་ བཙུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན། སྤྱིར་བཏང་RC གི་གཞི་བཀོད་འདི་ འབྲེལ་ཡོད་རིགས་སྣ་གི་ RC ཡན་ལག་གསུམ་དང་ཅོག་འཐདཔ་ཨིན། སྤེ་རོ་ཌིས་ (PDB ID: 3I4D). BChlདང་BPhགི་འཁོར་ལོ་སྦོམ་འདི་ carotenoidགི་སྒལ་ཚིགས་དང་ non-heme ironའདི་ འ་ནི་བཀོད་རིས་ནང་ལུ་ གཅིག་ཁར་འཐུད་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ QAགི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ UQ10གི་སྡེ་ཚན་དང་ RC-LH116ལུ་ཡོད་པའི་ QB quinone(པར་རིས་S15)ཨིན་མས།
RC གི་གཞི་བཀོད་གཉིས་ཡོད་མི་འདི་གིས་ QB གི་ས་ཁོངས་ནང་ འཛུལ་ཞུགས་འབད་མི་གི་ཚད་གཞི་སོ་སོ་ཡོད་མི་འདི་གིས་ QB quinone མཐུད་འབྲེལ་གྱི་ འགྱུར་བ་ཚུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ནི་གི་གོ་སྐབས་གསརཔ་བྱིནམ་ཨིན། RC-LH116 མགུ་རྙོག་ནང་ QB quinone འདི་ ཆ་ཚང་སྦེ་ མཐུད་ཡོད་པའི་ “proximal” གནས་ཚད་ (26) ནང་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ RC-LH114-W གི་ཁ་ཕྱེ་བའི་སྐབས་ QB quinone མེདཔ་ཨིན། RC-LH114-W ནང་ལུ་ QB quinone མེདཔ་ལས་ RC-LH116 གི་མགུ་རྙོག་འདི་ བཟོ་བཀོད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ ཐག་བཅད་དེ་ཡོད་མི་ QB quinone ལས་ལྷག་སྟེ་ མགུ་རྙོག་དྲགས་སྦེ་ཡོདཔ་ལས་ ཧ་ལས་སི་སི་ཅིག་ཨིན་མས། LH1གི་སྒོར་ཐིག་གཉིས་ཀྱིས་ quinonesདྲུག་དེ་ཅིག་བཟོ་སྟེ་ཡོད་རུང་ RC-LH116གི་སྒོར་ཐིག་ནང་ལུ་ ལྔ་འདི་ བསལ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ RC-LH114-Wགི་སྒོར་ཐིག་ནང་ལུ་ གསུམ་རྐྱངམ་ཅིག་ ཚད་འཛིན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འ་ནི་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་དཀའ་ངལ་ཡར་སེང་འགྱོ་མི་འདི་གིས་ RC-LH114-W QBགི་ས་སྒོ་ཚུ་ མགྱོགས་དྲགས་སྦེ་ཚབ་བཙུགས་མི་དང་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ནང་ལུ་ quinoneགི་འགུལ་སྐྱོད་མགྱོགས་དྲགས་སྦེ་འགྱོ་མི་ དེ་ལས་ LH1གི་བསྐོར་རིམ་བརྒལ་ནི་གི་འོས་འབབ་ཡར་སེང་འགྱོ་མི་ཚུ་ཨིན་མས། འདོན་སྤེལ།: ༢༠༡༠/༠༣/༠༣ རིག་པ།(༠) འདི་ཡང་ འབྲུག་རྒྱང་བསྒྲགས་ལས་འཛིན་གྱིས་ འབྲུག་རྒྱང་བསྒྲགས་ལས་འཛིན་གྱི་ འགོ་དཔོན་ཚུ་ལུ་ བརྡ་འཕྲིན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན།
QB མེད་པ་ཅིན་ L-Phe217 གི་འཁོར་སྐྱོད་འདི་ UQ10 མཐུད་མཚམས་དང་མ་མཐུན་པའི་གནས་ས་ལུ་འགྱོཝ་ཨིན། ག་ཅི་འབད་ཟེར་བ་ཅིན་ དེ་གིས་ མཇུག་མའི་ isoprene ཡུ་ནིཊ་འགོ་དང་པ་དང་གཅིག་ཁར་ ས་སྟོང་ཁ་ཐུག་རྐྱབ་འོང་། འདི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ མངོན་གསལ་ཅན་གྱི་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་འགྱུར་བ་ངོ་མ་འདི་ གསལ་ཏོག་ཏོ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། དམིགས་བསལ་གྱིས་ helix de (TMH D དང་ E གི་བར་ན་ཡོད་པའི་ helix ཐུང་ཀུ) དེ་ནང་ L-Phe217 འདི་ QB མཐུད་སའི་ཁུག་མ་ནང་ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་དེ་ L-Tyr223 གི་འཁོར་སྐྱོད་དང་ M- site (པར་རིས་ ༦ ཁ)། Helix de pivots གི་གཞི་རྟེན་ལུ་ L-Ser209 གི་ Cα འདི་ ༠.༣༣Å གིས་སྤོ་བཤུད་འབད་ཡོདཔ་ད་ L-Val221Cα འདི་ ༣.༥༢Å གིས་སྤོ་བཤུད་འབད་ནུག TMH D དང་ E གཉིས་ཆ་རའི་ནང་ བལྟ་ཚུགས་པའི་འགྱུར་བ་མེདཔ་ལས་ བཟོ་བཀོད་གཉིས་ཆ་རའི་ནང་ གཅིག་ཁར་བཀལ་ཚུགསཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༦ཀ) ང་བཅས་ཀྱིས་ཤེས་མི་ནང་ འ་ནི་འདི་ རང་བཞིན་གྱི་RC ནང་ལུ་ QB ས་ཁོངས་འདི་ཁ་བསྡམ་མི་ བཟོ་བཀོད་འགོ་དང་པ་ཅིག་ཨིན། གཞི་བཀོད་ཆ་ཚང་དང་ག་བསྡུར་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ quinoneམར་ཕབ་མ་འབད་བའི་ཧེ་མ་ quinoneནང་འཛུལ་ནི་གི་དོན་ལུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དགོཔ་སྦེ་མཐོང་ནུག L-Phe217གིས་ quinoneགི་སྡེ་ཚན་དང་གཅིག་ཁར་ π-stackingའབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ helixའདི་ ཕྱི་ཁར་འགྱོ་སྟེ་ L-Gly222གི་ཀེང་རུས་དང་ L-Tyr223གི་ཟུར་རིམ་འདི་ hydrogenགི་མཐུན་རྐྱེན་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས།(པར་རིས་༦དང་Aདང་C)
(ཀ) ཧོ་ལོ་གཱརམ་ (L chain, orange/M chain, magenta) དང་ apo (gray) གི་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་པའི་འགུལ་བརྙན། UQ10 འདི་ ཕྲ་རིང་སེརཔོ་གིས་ངོས་འཛིན་འབདཝ་ཨིན། ཚག་ཅན་གྱི་ཐིག་འདི་གིས་ བཟོ་བཀོད་ཆ་མཉམ་ནང་ལུ་ ཆུ་རླུང་མཉམ་སྦྲགས་བྱུང་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན་མས། (B དང་ C) ཁ་ཐོག་གི་ངོ་ཚབ་ apolipoprotein དང་ མཐའ་འཁོར་གྱི་བཟོ་བཀོད་ཆ་ཚང་གིས་ L-Phe217 གི་ཟུར་རིམ་སྲོག་རླུང་འདི་ ཧོནམ་དང་ L-Tyr223 དམརཔོ་སྦེ་ གོ་རིམ་བཞིན་དུ་ གསལ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན། L ཡན་ལག་འདི་ ཚལ་ལུ་ཨིན། M དང་ H ཡན་ལག་ཚུ་ ཚོས་གཞི་མེདཔ་ཨིན། (D དང་ E) Apolipoprotein (D) དང་ ཡོངས་རྫོགས་ (E) RC QB ས་ཁོངས་ [ཚོས་གཞི་གིས་ (A) གོ་རིམ་བཞིན་དུ་] དང་ Thermophilus thermophilus PSII (ལྗང་ཁུ་དང་སྔོན་པོ་དང་གྱིབ་ཤོག་ཀུའི་ནོན་; PDB ID: 3WU2) ཕྲང་སྒྲིག (58)
རེ་བ་མེད་པར་ LH1 མེད་པའི་ QB-deficient RCs གི་བཟོ་བཀོད་ལེ་ཤ་ཅིག་ཡོད་རུང་ ཞིབ་འཇུག་འདི་ནང་ བལྟ་རྟོགས་འབད་མི་ བསྒྱུར་བཅོས་ཚུ་ ཧེ་མ་ལས་ སྙན་ཞུ་མ་འབད་བས། དེ་ཚུ་ནང་ Blc ལས་ QB མར་ཕབ་ཀྱི་གཞི་བཀོད་ཚུ་ཚུདཔ་ཨིན། viridis (པི་ཌི་བི་ཨའི་ཌི་: ༣པི་ཨར་སི་) (༢༧), ཊི་ཆ། ཊེ་པི་ཌུམ་ (པི་ཌི་བི་ཨའི་ཌི་: ༡ཨི་ཝའི་ཨེསི་) (༢༨) དང་ རབ། sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29), དེ་ཚུ་ག་ར་ སྤྱིར་བཏང་ QB གཞི་བཀོད་དང་ ཧ་ལམ་གཅིག་མཚུངས་ཨིན། 3PRCགིས་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་བརྟག་དཔྱད་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ LDAO(Lauryl Dimethyl Amine Oxide)གི་རྡུལ་རྟེན་འདི་ QBགི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ མཐུད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ འདི་གིས་ ལོག་སྟེ་སྒྲིག་བཀོད་འབད་ནི་ལས་ བཀག་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། LDAO འདི་ 1EYS ཡང་ན་ 1OGV ནང་ གནས་རིམ་གཅིག་ནང་ བརྡལ་བཤིག་མི་འགྱོ་རུང་ འ་ནི་ RCs ཚུ་ བཙོག་ཆུ་གཅིག་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཟོ་ཡོདཔ་ལས་ དེ་གིས་ ནུས་པ་གཅིག་མཚུངས་ཐོན་འོང་། རྦ་ཡི་ཕྲ་རྡུལ་བཟོ་བཀོད། Sphaeroides RC འདི་ cytochrome c2 (PDB ID: 1L9B) དང་ཅིག་ཁར་ མཉམ་སྦྲགས་འབད་དེ་ QB ས་ཁོངས་ཁ་བསྡམས་ཡོདཔ་བཟུམ་ཅིག་འདུག ཨིན་རུང་ གནད་དོན་འདི་ནང་ལུ་ RC-M polypeptideགི་ N-terminalལུང་ཕྱོགས་(Q helixགུ་ཡོད་པའི་ Tyrལྷག་ལུས་བརྒྱུད་དེ་ QBམཐུད་སའི་ས་སྒོ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་མི་)གིས་ རང་བཞིན་མེན་པའི་བཟོ་རྣམ་ལུ་ ངོས་ལེན་འབདཝ་ལས་ QBགི་བཟོ་རྣམ་འགྱུར་བ་འདི་ ལྷག་པར་དུ་ བལྟ་མ་ཚུགསཔ་ཨིན་མས། གང་གིས་ སེམས་ཤུགས་བསྐྱེད་དགོཔ་འདི་ ང་བཅས་ཀྱིས་ RC-LH114-W བཟོ་བཀོད་ནང་ལུ་ M polypeptide གི་བཟོ་རྣམ་འདི་བཟུམ་མཐོང་མ་ཚུགས་མི་འདི་ RC-LH116 RC གི་ N-terminal ལུང་ཕྱོགས་དང་ ཧ་ལམ་ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ བཙོག་ཆུ་ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ LH1 antenna རྩ་མེད་བཏང་པའི་ཤུལ་ལས་ PDB ནང་ apolipoprotein RCs ཚུ་ བསལ་ཚུགས་ཏེ་ RC དང་ མཐའ་འཁོར་གྱི་ LH1 གི་ནང་ཁུལ་གྱི་ བར་སྟོང་ནང་ ནང་འཁོད་ཀྱི་ quinone pools དང་ lipids ཚུ་ རྩ་མེད་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། (31, 32) RCའདི་ ལག་ལེན་འཐབ་བཏུབ་སྦེ་རང་ ལུས་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ བརྡལ་བཤིག་གཏང་ཚུགས་པའི་ QB quinoneམ་གཏོགས་ གཞན་མི་ཆ་མཉམ་རང་ བདག་འཛིན་འཐབ་ཚུགས་མི་ལུ་བརྟེན་ཏེ་ཨིན་མས། དེ་མ་ཚད་ LH1 དང་ RC ལས་ རང་བཞིན་འཁོར་རིམ་གྱི་མར་ཁུ་བཏོན་བཏང་མི་འདི་གིས་ ལཱ་འགན་ཚུ་ལུ་ ཕན་གནོད་ཡོདཔ་སྦེ་ ཤེས་རྟོགས་བྱུང་ནུག དེ་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ RC གི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ཡོད་པའི་ ས་གནས་ཀྱི་ LH1 སྒོར་སྒོར་ཡོད་མི་འདི་གིས་ “སྒོ་བསྡམ་ཡོད་པའི་” QB ས་ཁོངས་འདི་ བདག་འཛིན་འཐབ་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་ལས་ QB གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་པའི་ ས་གནས་ཀྱི་མཐའ་འཁོར་གནས་སྟངས་འདི་ ཉམས་སྲུང་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་སྦེ་ ཚོད་དཔག་འབདཝ་ཨིན།
མ་གཞི་ apolipoprotein(QB quinoneམེད་པར་)དང་ བཟོ་བཀོད་ཆ་ཚང་གིས་ QBས་ཁོངས་ཀྱི་ཚོང་འབྲེལ་གྱི་པར་གཉིས་ལས་བརྒལ་མེད་རུང་ བྱུང་རིམ་མ་འདྲཝ་ཚུ་མེན་པར་ hydroquinoneགིས་ ལོག་སྟེ་མཐུད་ནི་ལས་ བཀག་ཐབས་འབད་ཚུགས་པའི་ བརྡ་མཚོན་ཚུ་ཡོདཔ་ཨིན། apolipoproteinགི་QBས་ཁོངས་ཀྱི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་པའི་ quinololདང་quinoneགི་འབྲེལ་བ་འདི་ སོ་སོ་སྦེ་འོང་ནི་ཨིནམ་ལས་ RCགིས་ བཀག་ཆ་འབད་བཅུགཔ་ཨིན་མས། འགྱུར་བ་འདི་གིས་ quinonesམར་ཕབ་འབད་ནི་ནང་ འགན་ཁུར་འབགཔ་ཨིནམ་སྦེ་ གྲོས་འཆར་བཀོད་དེ་འདུག མུན་ནག་ལུ་མཐུན་སྒྲིག་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ གྱང་ཤུགས་ཅན་གྱི་RCs ཚུ་གིས་ quinones མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་པའི་ ལྕོགས་གྲུབ་འདི་ ཉམས་ཆག་ཤོར་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན། (36); X-ray crystallography གིས་ གནོད་སྐྱོན་འདི་ QB quinones འདི་ 4.5 Å དེ་ཅིག་གི་ ཉེ་འདབས་ཀྱི་གནས་སྟངས་ལས་ “distal” གི་ནང་ལུ་ བཀག་བཞག་མི་ལུ་བརྟེན་ཏེ་ཨིནམ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན། (26) , 37) ང་བཅས་ཀྱིས་ བསམ་འཆར་བཀོད་མི་ནང་ འ་ནི་འདི་ apolipoproteinདང་ མཐའ་འཁོར་གྱི་བཀོད་རིས་ཀྱི་བར་ན་ བར་མཚམས་ཀྱི་གནས་སྟངས་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་བཀོད་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ quinoneདང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ QBགི་ས་སྒོ་ཁ་ཕྱེ་མི་ལུ་བརྟེན་ཏེ་ཨིན་མས།
PSII གི་ཕྲ་འབུཔ་དང་ cyanobacteria དེ་ལས་ སྐྱུ་རུ་དང་སྔོ་ཤིང་ཚུ་གི་ནང་ལུ་མཐོང་མི་ RC གི་དབྱེ་བ་གཉིས་པ་འདི་ བཟོ་བཀོད་དང་ལཱ་འགན་གྱི་ཉམས་སྲུང་ཡོདཔ་ཨིན། པར་རིས་ ༦ པའི་ནང་ བཀོད་ཡོད་པའི་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་ ཕྲང་སྒྲིག་འདི་གིས་ PSII RCs དང་ ཕྲ་འབུཔ་ RC མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་ QB ས་ཁོངས་ཀྱི་བར་ན་ འདྲ་མཚུངས་ཡོད་མི་ལུ་ གཙོ་བོར་བསྟེནམ་ཨིན། འ་ནི་ག་བསྡུར་འདི་ quinoneགི་འབྲེལ་བ་དང་མར་ཕབ་ཀྱི་ལམ་ལུགས་ཚུ་ ཞིབ་འཇུག་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ དཔེ་སྟོན་ཅིག་སྦེ་སྡོད་ནུག ཧེ་མའི་དཔར་བསྐྲུན་ཚུ་གིས་ འགྱུར་བ་འདི་ PSIIགིས་ quinonesམར་ཕབ་འབད་མི་དང་གཅིག་ཁར་ འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ བསམ་འཆར་བཀོད་ནུག(39, 40) འདི་འབདཝ་ལས་ RCགི་འཕེལ་འགྱུར་གྱི་ཉམས་སྲུང་ལུ་བལྟ་སྟེ་ ཧེ་མ་ལས་མ་མཐོང་པའི་ཐབས་ལམ་འདི་ PSII RCགི་ QBས་ཁོངས་ནང་ལུ་ཡང་ ལག་ལེན་འཐབ་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས།
Rps ΔpufW (མིང་མ་བཀོད་པའི་ pufW བཏོན་གཏང་ནི) དང་ PufW-His (C-terminal 10x His-tagged protein-W རང་བཞིན་གྱི་ pufW locus ལས་བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན།) གི་རིགས་ཚུ་ཨིན། palustris CGA009 འདི་ ང་བཅས་རའི་ཧེ་མའི་ལཱ་ནང་ འགྲེལ་བཤད་རྐྱབ་ཡོདཔ་ཨིན། (༡༦) འ་ནི་རིགས་སྣ་དང་ isogenic རི་དྭགས་ཀྱི་ཕམ་ཚུ་ PYE (each 5 g liter -1) གུ་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་ཆུང་ཀུ་ཅིག་བཙུགས་ཏེ་ འཁྱགས་སྒམ་ནང་ལས་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཤོག་ལེབ་འདི་ དྲོད་ཚད་མེད་པའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ ཁང་མིག་གི་དྲོད་ཚད་ནང་ལུ་ ནུབ་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ OSRAM 116-W halogen bulbs (RS Components, UK) གིས་བྱིན་མི་ འོད་དཀརཔོ་༼~50 μmolm-2 s-1༽ གི་ཐོག་ལས་ ཉིནམ་༣ལས་༥གི་རིང་ལུ་ འོད་མདངས་བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། དབང་ཚད་གཅིག་གིས་ བརྒྱ་ཆ་༠.༡ (w/v) casamino acids (ད་ལས་ཕར་ M22 ཟེར་སླབ་ཨིན་) ཁ་སྐོང་འབད་དེ་ M22+ བརྒྱུད་ལམ་ (༤༡) ༡༠ ml བཙུགས་ནིའི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ལམ་སྲོལ་འདི་ སྲོག་རླུང་དམའ་བའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༣༤གི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་༤༨གི་རིང་ལུ་ ༡༨༠rpmལུ་ གཡོ་འགུལ་འབད་དེ་ འཚོ་སྐྱོང་འབད་ཡོདཔ་དང་ དེ་ལས་ ལམ་སྲོལ་འདི་ ཆུ་ཚོད་༢༤གི་རིང་ལུ་ གནས་སྟངས་ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་ སྨན་ཁབ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། འབོར་ཚད་མི་ལི་ཀྲར་༡འབད་མི་ ཕྱེད་ཀ་འཕུར་འགྲུལ་གྱི་ལམ་སྲོལ་འདི་ མི་ལི་ཀྲར་༣༠འབད་མི་ ཡོངས་ཁྱབ་གཅུས་གཟེར་ཅན་གྱི་དྭངས་གསལ་ཅན་གྱི་ཤེལ་གྱི་བུམ་པ་ནང་ལུ་ ཨེམ་༢༢ བརྒྱུད་ལམ་༣༠མི་ལི་ལི་ཀྲར་གྱི་སྨན་ཁབ་བཙུགས་ཏེ་ ཆུ་ཚོད་༤༨གི་རིང་ལུ་ མངལ་སྟོངམ་གྱི་ཁབ་ལེན་ཤུགས་ཀྱིས་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ འོད་འཕྲོ་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ ལམ་སྲོལ་གྱི་ ༣༠ ml འདི་ གནས་སྟངས་ཅོག་འཐདཔ་གི་འོག་ལུ་ ལམ་སྲོལ་ལི་ཀྲར་༡ དེ་ཅིག་བཙུགས་ཏེ་ དེ་ལས་ ཆུ་ཚོད་༧༢ གི་རིང་ལུ་ ~200 μmolm-2 s-1 ལུ་ འོད་འཚེར་བའི་ ལམ་སྲོལ་ལི་ཀྲར་༩ དེ་ཅིག་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ སྐར་མ་༣༠གི་རིང་ལུ་ ༧༡༣༢ RCF ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ བསྡུ་ལེན་འབད་དེ་ ༢༠ mM tris-HCl (pH ༨.༠) གི་ ~༡༠ ml ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཀག་ཞིནམ་ལས་ དགོཔ་མ་ཐོན་ཚུན་ཚོད་ -༢༠°C ལུ་ གསོག་འཇོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
བཞུ་ཚར་བའི་ཤུལ་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ ཌི་ཨོ་སི་རི་བོ་ནིའུ་ཀིལསི་༡ དང་ ལའི་སོ་ཛའིམ་ དེ་ལས་ རོ་ཆི་ཧོ་ལོ་ཨེན་ཛའིམ་ཟས་བཅུད་བཀག་ཆ་འབད་མི་ སྨན་ཁབ་གཉིས་ ཁ་སྐོང་བཀོད་དགོཔ་ཨིན། ཕཱ་རེནསི་གི་གནོན་ཤུགས་ཁམས་ཕྲན་ ༢༠༠༠༠ psi ནང་ (Aminco, USA) ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ཚར་༨ ལས་༡༢ ཚུན་ བར་ཆད་བྱུང་ཡོདཔ་ཨིན་པས། ཁམས་ཕྲན་མ་བཅག་མི་དང་ བཞུ་མ་ཚུགས་པའི་ རྡོ་རོ་ཚུ་ དྲོད་ཚད་༤ ལུ་ སྐར་མ་༡༥ གི་རིང་ལུ་ ༡༨༥༠༠ RCF ལུ་ བཏོན་བཏང་པའི་ཤུལ་ལས་ དྲོད་ཚད་༤༣༠༠༠ ལུ་ ཆུ་ཚོད་༢ གི་རིང་ལུ་ ༡༡༣༠༠༠ RCF ལུ་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། བཞུ་ཚུགས་པའི་དཔྱ་རྩིས་འདི་ བཀོ་བཞག་ཞིནམ་ལས་ ཚོས་གཞི་ཅན་གྱི་གདོང་ཕྱོགས་འདི་ ༢༠ mM tris-HCl (pH 8.0) གི་ ༡༠༠ ལས་ ༢༠༠ ml ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཀོག་ཞིནམ་ལས་ མཐོང་གསལ་གྱི་ བསྡོམས་རྩིས་མ་ཐོན་ཚུན་ཚོད་ གཅིག་མཚུངས་བཟོཝ་ཨིན། བཀག་བཞག་ཡོད་པའི་ གྱིབ་མ་འདི་ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) ནང་ལུ་ 2% (w/v) β-DDM ཡོད་པའི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་ 1 གི་རིང་ལུ་ 4°C ལུ་ གནག་དུང་དུ་སྦེ་ འཇམ་པོ་སྦེ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ དྲོད་ཚད་༧༠ ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་འབད་དེ་ དྲོད་ཚད་༤ ལུ་ ཆུ་ཚོད་༡ གི་རིང་ལུ་ RCF ༡༥༠༠༠༠ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ ལྷག་ལུས་བཞུ་མ་ཚུགས་མི་ཚུ་ བཏོན་གཏང་དགོ།
20 mM tris-HCl (pH 8.0) containing 0.03% (w / v) β-DDM] དང་ཅིག་ཁར་ 50 ml DEAE Sepharose གློག་རྡུལ་བརྗེ་སོར་གྱི་ཀ་ཆེན་ལུ་ བཀལ་ཡོདཔ་ཨིན། ཀེར་ཐིག་འདི་ CV བཱའིན་ཌིང་བཱ་ཕར་གཉིས་དང་གཅིག་ཁར་ བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ ཀེར་ཐིག་འདི་ ༥༠ mM NaCl ཡོད་པའི་ བཱའིན་ཌིང་བཱ་ཕར་གཉིས་དང་གཅིག་ཁར་ བཀྲུ་དགོ། RC-LH116 གི་སྣ་མང་འདི་ 1.75 CV ལུ་ 150 ལས་ 300 mM NaCl གི་རིམ་འགྲོས་ཐོག་ལས་ བཏོན་ཡོདཔ་ད་ ལྷག་ལུས་འདི་ 0.5 CV ལུ་ 300 mM NaCl ཡོད་པའི་ binding buffer དང་གཅིག་ཁར་ བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། ༢༥༠ དང་ ༡༠༠༠ ཨེན་ཨེམ་གྱི་བར་ན་ དབང་པོའི་འོད་རླབས་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ དབང་པོའི་ཆ་ཚད་ ༼ཨེ་༨༨༠/ཨེ་༢༨༠༽ འདི་ ༨༨༠ ལས་ ༢༨༠ ཨེན་ཨེམ་ལུ་ ༡ ལས་ལྷག་སྟེ་བཞག་སྟེ་ འབྲེལ་མཐུན་གྱི་ བཱ་ཕར་ནང་ ཚར་གཉིས་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ གཙང་སྦྲ་བཟོ་བའི་སྐབས་ ཌི་ཨི་ཨེ་ཨི་ ཀ་ཆེན་གུར་ བྱ་རིམ་ཅོག་འཐདཔ་འདི་ ལོག་སྟེ་རང་ ལག་ལེན་འཐབ་དགོ། དཔྱ་རྩིས་ A880/A280 ཆ་ཚད་ ༡.༧ ལས་མཐོ་བ་དང་ A880/A805 ཆ་ཚད་ ༣.༠ ལས་མཐོ་བའི་དཔྱ་རྩིས་ཚུ་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ གློག་རྡུལ་བརྗེ་སོར་སྐོར་རིམ་གསུམ་པ་ འབད་ཞིནམ་ལས་ A880/A280 ཆ་ཚད་ ༢.༢ ལས་མཐོ་བའི་དཔྱ་རྩིས་དང་ A880/A805 ཆ་ཚད་ .༠ ལས་མཐོ་བའི་དཔྱ་རྩིས་ཚུ་ བཞག་དགོ། ཆ་ཤས་ཅིག་གཙང་མ་བཟོ་མི་སྣ་མང་འདི་ Amicon 100,000 རྡུལ་རྟེན་ལྗིད་ཚད་བཏོག་བཏང་མི་ ༼MWCO༽ དབུགས་གཏོང་ལེན་ཚགས་མ་ ༼Merck, UK༽ ནང་ལུ་ ~2 ml ལུ་བསྡུ་སྟེ་ཡོདཔ་དང་ འདི་ཡང་ Superdex 200 16/600 གི་སྦོམ་ཆུང་གི་ཕྱིར་བཏོན་ཀ་ཆེན་ ༼GE Healthcare, US༽ འདི་ནང་ལུ་ NaCM the buffer 200 ཡོདཔ་ཨིན། ༡.༥ སི་ཝི། ཚད་གཞི་ཕྱིར་འཐེན་གྱི་དཔྱ་རྩིས་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ འོད་རླབས་འདི་ A880/A280 ཆ་ཚད་ ༢.༤ དང་ A880/A805 ཆ་ཚད་ ༥.༨ ལས་ ༡༠༠ A880 ལས་ལྷག་སྟེ་ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ དེ་འཕྲོ་ལས་ cryo-TEM grid གྲ་སྒྲིག་དང་ ཡང་ན་ གསོག་འཇོག་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་དགོ།
PufW-His གི་རིགས་ལས་ བཞུ་བཅུག་མི་ གདོང་ཁེབས་འདི་ IMAC བཱ་ཕར་ (GEcare) ནང་ལུ་ HisPrep FF Ni-NTA Sepharose ཀ་ཆེན་ ༢༠ ml ལུ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། v) β-ཌི་ཌི་ཨེམ་]. ཀ་ཆེན་འདི་ IMAC བཱ་ཕར་གྱི་ CVs ལྔ་གིས་ བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ དེ་ལས་ IMAC བཱ་ཕར་གྱི་ CVs 10 mM histidine ཡོད་མི་འདི་གིས་ བཀྲུ་དགོཔ་ཨིན། མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ IMAC buffers 100 mM histidine ཡོད་པའི་ ཀ་ཆེན་ནང་ལས་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH114-W མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་ཆ་ཤས་འདི་ ~10 ml ལུ་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ Amicon 100,000 MWCO ཚགས་མ་ (Merck, UK) དང་ཅིག་ཁར་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ ཚར་ 20 བརྡུངས་ཞིནམ་ལས་ དེ་ལས་ 25 ml ལུ་ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ DEAE b Sephar ལུ། སྔོན་འགྲོ། ཀ་ཆེན་འདི་ CV བསྡོམས་པའི་བཱ་ཕར་བཞི་གིས་ བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ 0 ལས་ 100 mM NaCl གི་རིམ་འགྲོས་གྱེན་ཐིག་ཐོག་ལུ་ CVs བརྒྱད་གུ་ མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ བཏོན་དགོཔ་ཨིན། 2.4 ལས་མཐོ་བ་དང་ A880/A805 ཆ་ཚད་ 4.6 ལས་མཐོ་བའི་དཔྱ་རྩིས་ Amicon 100,000 MWCO centrifugal ཚགས་མ་ནང་ ~2 ml ལུ་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ 1.5 CV IMAC གིས་ གོང་འཕེལ་གཏང་ཡོདཔ་ཨིན། ༡.༥ སི་ཝི། འབོར་ཚད་ཕྱིར་འཐེན་གྱི་དཔྱ་རྩིས་ཚུ་གི་ དབང་པོའི་འོད་རླབས་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ དབང་པོའི་འོད་རླབས་འདི་ A880/A280 ཆ་ཚད་ ༢.༡ ལས་ལྷག་སྟེ་ A880/A805 ཆ་ཚད་ ༤.༦ ལས་ ༡༠༠ A880 ལས་ལྷག་སྟེ་ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ འདི་ཚུ་ དེ་འཕྲོ་ལས་ གྱང་ཤུགས་ཅན་གྱི་ TEM གིརིཌ་གྲ་སྒྲིག་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ནི་དང་ ཡང་ན་ -80°C ལུ་དགོཔ་ཚུན་ཚོད་ གསོག་འཇོག་འབདཝ་ཨིན།
དྲོད་ཚད་དམའ་བའི་ཊི་ཨི་ཨེམ་གྱི་གིརིཌ་ཚུ་ བཟོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལེ་ཀ་ཨི་ཨེམ་ཇི་པི་ ཆུ་ནང་ལུ་བཙུགས་མི་འཁྱགས་སྒམ་ཅིག་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ IMAC བཱ་ཕར་ནང་ལུ་ A880 of 50 ལུ་བཞུ་བཅུག་སྟེ་ དེ་ལས་ 5μl འདི་ འོད་མདངས་གསརཔ་བཏོན་མི་ QUANTIFOIL 1.2/1.3 ནག་རྫས་གུར་ ཟངས་དྲྭ་མིག་ ༼Agar Scientific, UK༽ གུ་བཀལ་ཡོདཔ་ཨིན། གིརིཌ་འདི་ ༢༠°C དང་ ༦༠% གི་རླན་གཤེར་ལུ་ སྐར་ཆ་༣༠ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ སྐར་ཆ་༣ གི་རིང་ལུ་ སྐམ་བཏང་ཞིནམ་ལས་ -༡༧༦°C ལུ་ ཁུ་བ་ཨི་ཐེན་ནང་ལུ་ བསད་དགོ།
RC-LH114-W གི་གནས་སྡུད་འདི་ eBIC ༼གློག་རིག་སྐྱེ་ལྡན་པར་རིས་ལྟེ་བ་༽ ༼British Diamond Light Source༽ གི་ཐོག་ལུ་ ཐོ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་སྡུད་བསྡུ་ལེན་འབད་ནིའི་དོན་ལུ་ གྱངས་ཁ་རྐྱབ་ཐབས་ལམ་ནང་ པར་ཚུ་ཐོ་བཀོད་འབད་ནི་ལུ་ K2 མཐོ་ཚད་བརྟག་དཔྱད་འབད་མི་ Gatan 968 GIF Quantum འདི་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་འཇལ་འབད་ཡོད་པའི་པིག་སེལ་གྱི་ཚད་འདི་ ༡.༠༤༨Å དང་ སྨན་ཚད་ཀྱི་ཚད་གཞི་འདི་ ༣.༨༣ e-Å-༢s-༡ ཨིན། གློག་བརྙན་འདི་སྐར་ཆ་༡༡ ནང་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ ཆ་ཤས་༤༠ ལུ་བགོ་བཤའ་རྐྱབ་ནུག། ཕྲ་གཟུགས་མཐོང་ཆས་འདི་ ལོག་སྟེ་གཙོ་བོར་བཏོན་ནིའི་དོན་ལུ་ ནག་རྫས་བཀབ་ཡོད་པའི་ས་ཁོངས་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དེ་ལས་ དོང་རེ་ནང་ གློག་བརྙན་གསུམ་བསྡུ་ལེན་འབད། བསྡོམས་པས་གློག་བརྙན་ ༣༡༣༠ བསྡུ་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ད་ དེ་ནང་ -༡ དང་ -༣μm གི་བར་ན་ཡོད་པའི་ ཌི་ཕོ་ཀས་གནས་གོང་ཚུ་ཡོདཔ་ཨིན།
RC-LH116 གི་གནས་སྡུད་འདི་ Asterbury Biostructure Laboratory ༼ཡུ་ཀེ་གི་ ལིཌསི་གཙུག་ལག་སློབ་སྡེ་༽ ནང་ལུ་ ཕྲ་གཟུགས་མཐོང་ཆས་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བསྡུ་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་སྡུད་ཚུ་ ༡༣༠ཀེ་གི་ཆེར་བསྐྱེད་ཐོག་ལས་ རྩིས་རྐྱབ་ཐབས་ལམ་ནང་ལུ་བསྡུ་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་དང་ པིག་སེལ་གྱི་སྦོམ་ཆུང་འདི་ ༤.༦ཨི་-Å-༢ཨེསི་-༡ གི་ཚད་གཞི་དང་གཅིག་ཁར་ ༡.༠༦༥ Å ལུ་ཚད་འཇལ་ཡོདཔ་ཨིན། གློག་བརྙན་འདི་སྐར་ཆ་༡༢ ནང་སྒྲ་བཟུང་འབད་དེ་ ཆ་ཤས་༤༨ ལུ་དབྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། བསྡོམས་པས་གློག་བརྙན་ ༣༣༥༩ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཡང་ -༡ དང་ -༣μm གི་བར་ན་ཡོད་པའི་ ཌི་ཕོ་ཀས་གནས་གོང་ཚུ་ཨིན་པས།
གནད་སྡུད་ལས་སྦྱོར་ཆ་མཉམ་ རི་ལི་ཡོན་ ༣.༠ མདོང་ལམ་ (༤༢) ནང་ལུ་འབདཝ་ཨིན། སྨན་ཚད་ལྗིད་ཚད་ཐོག་ལས་ འོད་འཕྲོའི་གཡོ་འགུལ་འདི་ནོར་བཅོས་འབད་ནི་ལུ་ Motioncorr 2 (43) ལག་ལེན་འཐབ། དེ་ལས་ CTFFIND 4.1 (44) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ CTF (ཁྱད་པར་སྤོ་བཤུད་ལས་འགན་) ཚད་གཞི་གཏན་འབེབས་བཟོ། འདི་བཟུམ་གྱི་ འགོ་ཐོག་བཟོ་སྦྱོར་གྱི་གནས་རིམ་ཚུ་གི་ཤུལ་ལས་ སྤྱིར་བཏང་གི་པར་རིས་ཆུང་བ་ཚུ་ པར་རིས་༢ པའི་ནང་ལུ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། S16. རང་བཞིན་སེལ་འཐུའི་ཊེམ་པེལེཊི་འདི་ ༢༥༠ པིག་སེལ་གཞི་ཁྲམ་ནང་ རྡུལ་ཕྲན་༡༠༠༠ གི་ པིག་སེལ་༢༥༠ དེ་ཅིག་ ལག་ཐོག་ལས་སེལ་འཐུ་འབད་དེ་ བཟོ་བཏོན་འབདཝ་ཨིནམ་དང་ གཞི་བསྟུན་ མཐོང་སྣང་གཉིས་ (༢ཌི་) དབྱེ་ཁག་མེདཔ་ལས་ དཔེ་ཚད་བཙོག་པ་ མཐུན་སྒྲིག་འབད་མི་དང་ ཡང་ན་ མཐོང་གསལ་ཅན་གྱི་ཁྱད་ཆོས་མེད་མི་ དབྱེ་ཁག་ཚུ་ ངོས་ལེན་མི་འབད། དེ་ལས་ རང་བཞིན་གྱིས་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ ཕྲ་གཟུགས་པར་རིས་ཚུ་ག་ར་ནང་ འབད་ཡོདཔ་ད་ RC-LH114-W འདི་ རྡུལ་ཕྲན་༨༤༩,༣༥༩ དང་ RC-LH116 གི་མགུ་རྙོག་འདི་ རྡུལ་ཕྲན་༤༧༦,༥༤༧ ཨིན་པས། འདམ་ཁ་རྐྱབ་ཡོད་པའི་རྡུལ་ཕྲན་ཆ་མཉམ་གྱིས་ གཞི་བསྟུན་མེན་པའི་ ༢ཌི་དབྱེ་ཁག་གཉིས་བརྒལ་ཡོདཔ་ད་ རྒྱུག་ཐེངས་རེ་རེ་གི་ཤུལ་ལས་ ནག་རྫས་ས་ཁོངས་དང་ དཔེ་ཚད་བཙོག་པ་ མངོན་གསལ་ཅན་གྱི་ཁྱད་ཆོས་མེད་མི་ ཡང་ན་ ཤུགས་སྦེ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་པའི་རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ ངོས་ལེན་མ་འབད་བར་ 772,033 (90.9%) དང་ 359,57ticles are378 of Pardles ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH114-W དང་ RC-LH116 བཅས་ཡིན། འགོ་ཐོག་ ༣གྲི་ཁུངས་གཏུག་དཔེ་ཚད་འདི་ ཨིསི་ཀྲོ་ཀཱསི་ཀྲིག་གྱེན་ལམ་གྱི་ཐབས་ལམ་ལག་ལེན་འཐབ་ཏེ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འགོ་ཐོག་དཔེ་ཚད་འདི་གཞི་བསྟུན་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ སེལ་འཐུ་འབད་ཡོད་པའི་རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ ༣ཌི་ནང་ དབྱེ་ཁག་བཞི་ལུ་དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། འདི་ཡང་ དབྱེ་ཁག་འདི་ནང་ལུ་ དཔེ་ཚད་འདི་ གཞི་བསྟུན་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དབྱེ་ཁག་སྦོམ་ཤོས་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་གུར་ ༣ཌི་བཙག་འཐུ་འབད་ཞིནམ་ལས་ འགོ་ཐོག་ ༡༥Å དམའ་ཤོས་ཚགས་མ་འདི་ བཞུ་རྫས་ས་ཁོངས་འདི་ བཀབ་ནིའི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མཐའམ་མཉེན་པའི་ པིག་སེལ་༦ ཁ་སྐོང་བརྐྱབ་སྟེ་ པིག་སེལ་ཚུ་ ལས་སྦྱོར་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ གཱ་ཊན་ཀེ་༢ ཕཱན་ཀྲར་གྱི་ མཐོ་ཚད་འདི་ བཅོ་ཁ་རྐྱབ་དགོཔ་ཨིན། RC-LH114-W གནས་སྡུད་ཆ་ཚན་གྱི་དོན་ལས་ འ་ནི་འགོ་ཐོག་དཔེ་ཚད་འདི་ ཁ་རས་ཀྱི་མཐའམ་ལུ་ཡོད་པའི་ སྟུག་ཚད་ཤུགས་ཅན་འདི་བཏོན་བཏང་ཞིནམ་ལས་ བཟོ་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ༼UCSF Chimera ནང་ལུ་ སྟུག་ཚད་ལྟེ་བ་ལས་ མཐུད་མཚམས་མེདཔ་ཨིན།༽ གྲུབ་འབྲས་དཔེ་ཚད་ཚུ་ ༼RC-LH114-W དང་ RC-LH116 གི་ཐག་རིང་ཚད་འདི་ ༣.༩༡ དང་ ༤.༡༦ Å ཨིན་༽ ༣ཌི་དབྱེ་ཁག་གཉིས་པའི་དོན་ལས་ ཁུངས་གཏུག་ཅིག་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། ལག་ལེན་འཐབ་ཡོད་པའི་རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ འགོ་ཐོག་༣ཌི་དབྱེ་རིམ་ནང་སྡེ་ཚན་བཟོ་སྟེ་ཡོདཔ་ལས་ ཁྱིམ་ཚང་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་ཤུགས་ཅན་མེདཔ་ཨིན། གཅིག་ལ་གཅིག་བརྟེན་ཡང་ན་ མངོན་གསལ་ཅན་གྱི་བཟོ་བཀོད་ཁྱད་ཆོས་མེདཔ། 3D དབྱེ་ཁག་གཉིས་པའི་རྗེས་སུ་དབྱེ་རིམ་མཐོ་ཤོས་དེ་འདེམས་སྒྲུག་བྱས། [RC-LH114-W གི་དོན་ལུ་དབྱེ་ཁག་གཅིག་ནི་རྡུལ་ཕྲན་377,703 (44.5%) ཡིན། RC-LH116 གི་དོན་ལུ་དབྱེ་ཁག་གཉིས་ལས་མེད། ཁྱད་པར་ཆུང་ཆུང་ཡོད་པའི་འགོ་ཐོག་འཁོར་སྐྱོད་ཀྱི་ཤུལ་ལས་]. སེལ་འཐུ་འབད་ཡོད་པའི་རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ ༤༠༠ པིག་སེལ་སྒྲོམ་ནང་ ལོག་སྟེ་བཏོན་ཞིནམ་ལས་ ༣ཌི་བཙག་འཐུ་འབད་ཐོག་ལས་ བཙག་འཐུ་འབདཝ་ཨིན། བཞུ་རྫས་ཁ་རས་འདི་ འགོ་ཐོག་ ༡༥Å དམའ་བའི་བརྒྱུད་ལམ་ཚགས་མ་དང་ ༣ པིག་སེལ་སབ་ཁྲ་རྒྱ་སྐྱེད་ དེ་ལས་ ༣ པིག་སེལ་མཉེན་ཆས་ཁ་རས་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཟོ་བཏོན་འབདཝ་ཨིན། རྡུལ་ཕྲན་རེ་ལུ་སི་ཊི་ཨེཕ་བཙོ་སྦྱང་དང་ རྡུལ་ཕྲན་རེ་ལུ་གཡོ་འགུལ་ནོར་བཅོས་ དེ་ལས་ རྡུལ་ཕྲན་རེ་ལུ་སི་ཊི་ཨེཕ་བཙོ་སྦྱོར་གྱི་སྐོར་རིམ་གཉིས་པ་ ༣ཌི་བཙག་འཐུ་ བཞུ་རྫས་བཀབ་ནི་ དེ་ལས་ ལས་སྦྱོར་གྱི་ཤུལ་ལས་ གོ་རིམ་རེ་རེ་གི་ཤུལ་ལས་ གྲུབ་འབྲས་ཐོན་པའི་བཟོ་རྣམ་འདི་ ལྷག་པར་དུ་བཙག་འཐུ་འབདཝ་ཨིན། FSC (Fourier Shell Correlation Coefficient) གི་ བཏོག་བཏང་གནས་གོང་ ༠.༡༤༣ ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ RC-LH114-W དང་ RC-LH116 གི་མཐའ་དཔྱད་དཔེ་ཚད་ཀྱི་ ཐག་བཅད་ཚུ་ གོ་རིམ་བཞིན་དུ་ ༢.༦༥ དང་ ༢.༨༠Å ཨིན། མཐའ་མའི་དཔེ་ཚད་ཀྱི་ FSC གུག་གུགཔ་འདི་ པར་རིས་ ༢ པའི་ནང་ལུ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། S17.
ཟས་བཅུད་ཀྱི་རིམ་པ་ཆ་མཉམ་ ཡུ་ནི་པྲོཊ་ཀེ་བི་: LH1-β (PufB; ཡུ་ནི་པྲོཊ་ཨའི་ཌི་: Q6N9L5) ལས་ཕབ་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། LH1-α (PufA; ཡུ་ནི་པྲོ་ཊི་ཨའི་ཌི་: ཀིའུ་༦ཨེན་༩ཨེལ་༤); RC-L (PufL; ཡུ་ནི་པོརཊ་ཨའི་ཌི་: ཨོ་༨༣༠༠༥); RC-M (PufM; ཡུ་ནི་པྲོཊ་ཨའི་ཌི་: ཨེ་༠ཨེ་༤ཛེ་༧); RC-H (PuhA; ཡུ་ནི་པྲོཊ་ཨའི་ཌི་: ཨེ་༠ཨེ་༤ཛེ་༩); ཟས་བཅུད་-W (PufW; ཡུ་ནི་པྲོཊ་ཨའི་ཌི་: Q6N1K3). SWISS-MODEL (45) འདི་ RC གི་རིགས་མཚུངས་དཔེ་ཚད་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ནང་ལུ་ RC-L དང་ RC-M དེ་ལས་ RC-H གི་ཟས་བཅུད་ཀྱི་གོ་རིམ་དང་ Rba གི་བཟོ་བཀོད་ཚུ་ཡོདཔ་ཨིན། sphaeroides RC འདི་ ཊེམ་པེལེཊི་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། (PDB ID: 5LSE) (༤༦) ཡུ་སི་སི་ཨེཕ་ཆི་མེ་ར་ནང་ “fit map” ལག་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ སབ་ཁྲ་ལུ་བཟོ་ཡོད་པའི་དཔེ་ཚད་འདི་ མཐུན་སྒྲིག་འབད་དགོཔ་ཨིན། 3,4-ཌི་ཧའི་ཌོ་ཧེག་ས་ཀར་བོ་ནིལ་ཀོ་ལིན་ (QAK)] ཁ་སྐོང་བརྐྱབ་ནིའི་དོན་ལུ་ ཀུཊ་ (48) ལག་ལེན་འཐབ། ཀིའུ་ཨེ་ཀེ་འདི་ མོ་ནོ་མར་དཔེ་མཛོད་ནང་ལུ་མེདཔ་ལས་ ཕི་ནིགསི་ (༤༩) ནང་ལུ་ eLBOW ལག་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཚད་གཞི་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན།
དེ་གི་ཤུལ་ལས་ LH1 ཡན་ལག་སྡེ་ཚན་འདི་བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འགོ་ཐོག་ལུ་ PHENIX (49) ནང་ལུ་ རང་བཞིན་བཟོ་བསྐྲུན་གྱི་ལག་ཆས་འདི་ སབ་ཁྲ་དང་ LH1-α དེ་ལས་ LH1-β ཟས་བཅུད་ཀྱི་རིམ་པ་ཚུ་ ཨིན་པུཊ་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ LH1 གོ་རིམ་གྱི་ཆ་ཤས་ཅིག་ རང་བཞིན་གྱིས་བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ནུག འདོན་སྤེལ།: ༢༠༡༡/༠༤/༢༠ རིག་པ།(༡) འབྲུག་རྒྱང་བསྒྲགས་ལས་ཁུངས་ཀྱིས་ འབྲུག་རྒྱང་བསྒྲགས་ལས་ཁུངས་ལུ་ བརྡ་དོན་འཕྲུལ་རིག་དང་འབྲེལ་བའི་ ལཱ་ཚུ་འབད་ནི། རིགས་སྣ་ (༡༧)]. འདོན་སྤེལ།: ༢༠༡༡/༠༤/༢༠ རིག་པ།(༡) འདོན་སྤེལ།: ༢༠༡༡/༠༤/༢༠ རིག་པ།(༡) LH1 ཡན་ལག་ཆ་མཉམ་དཔེ་སྟོན་མ་འབད་ཚུན་ཚོད་ བྱ་རིམ་འདི་བསྐྱར་ལོག་འབད། RC-LH114-W བཟོ་བཀོད་ཀྱི་དོན་ལས་ Coot ནང་ལུ་ བགོ་བཀྲམ་མ་འབད་བའི་སྟུག་ཚད་བཏོན་ཞིནམ་ལས་ ཟས་བཅུད་འདི་ USCF Chimera སབ་ཁྲ་ནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་མེན་པའི་ཆ་ཤས་ལྷག་ལུས་ཚུ་ལས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ འགོ་ཐོག་དཔེ་ཚད་གཞི་བཙུགས་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ Autobuild གི་ལག་ཆས་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིནམ་དང་ ལྷག་ལུས་ཆ་ཤས་ཆུང་བ་ཚུ་ ༼ཟས་བཅུད་-W༽ དཔེ་ཚད་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། ཕི་ནིགསི་ (༤༩) ནང་། ཀུཊི་ (༤༨) ནང་ལུ་ གྲུབ་འབྲས་དཔེ་ཚད་ལུ་ གོ་རིམ་མེད་མི་ཚུ་ཁ་སྐོང་བརྐྱབ་ཞིནམ་ལས་ ལག་ཐོག་ལས་ ཡན་ལག་ཆ་ཤས་ཆ་མཉམ་རང་ བཙག་འཐུ་འབད། ལྷག་ལུས་བགོ་བཀྲམ་མ་འབད་བའི་མཐུག་ཚད་འདི་ མར་ཁུ་གི་མཉམ་སྡེབ་ལུ་མཐུན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན། དཔེ་ཚད་གནས་སྡུད་དང་ མཐོང་སྣང་གི་སྤུས་ཚད་ཚུ་ ཧེང་སྐལ་ཡར་དྲག་གཏང་མ་ཚུགས་ཚུན་ཚོད་ འགོ་ཐོག་དཔེ་ཚད་ཆ་ཚང་འདི་ ལེགས་ཤོམ་བཟོ་ནི་ལུ་ PHENIX ཡར་འཕེལ་ (༤༩) དང་ Coot (༤༨) ནང་ལུ་ ལག་ཐོག་ཡར་འཕེལ་ལག་ལེན་འཐབ། མཐའ་མཇུག་ཁར་ ས་གནས་ཀྱི་སབ་ཁྲ་འདི་ ཤུགས་ཅན་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ LocScale (50) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དེ་ལས་ བགོ་བཀྲམ་མ་འབད་བའི་ སྟུག་ཚད་དང་ རང་བཞིན་དང་ ལག་ཐོག་ལས་ ཡར་དྲག་བཏང་ནི་གི་ དཔེ་སྟོན་གྱི་ འཁོར་རིམ་གཞན་མི་ལེ་ཤ་ཅིག་ འབད་དགོ།
རང་སོའི་མཐུག་ཚད་ནང་ལུ་ རང་སོའི་ peptides དང་ cofactors དེ་ལས་ གཞན་མི་ lipids དང་ quinones ཚུ་ པར་རིས་༡ དང་༢ ནང་ལུ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། མཐའ་མའི་དཔེ་ཚད་ཀྱི་རྩིས་དཔྱད་བརྡ་དོན་འདི་ ཐིག་ཁྲམ་S1 ནང་ལུ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན།
དེ་མེན་པ་ཅིན་ UV/Vis/NIR དབང་པོའི་འོད་རླབས་འདི་ Cary60 spectrophotometer (Agilent, USA) གུ་ ༢༥༠ nm ལས་ ༡༠༠༠ nm གི་བར་ན་ ༡ nm གི་བར་མཚམས་ལུ་ བསྡུ་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
དཔེ་ཚད་འདི་ ཀོཝར་ཀྲེསི་ཀུ་ཝེཏ་ནང་ལུ་ ༢ཨེམ་ཨེམ་གྱི་ལམ་ A880 of 1 ལུ་བཙུགས་ཏེ་ ༤༠༠ལས་༡༠༠༠ཨེན་ཨེམ་གྱི་བར་ན་ ཐིམ་པའི་འོད་བརླབས་འདི་བསྡུ་ལེན་འབད། སྒོར་སྒོར་གྱི་འོད་རླབས་འདི་ Jasco 810 spectropolarimeter ༼Jasco, Japan༽ གུ་ལུ་ 400nm དང་ 950nm གི་བར་ན་ 1nm གི་བར་མཚམས་ལུ་ 20nm min-1 གི་པར་བཏབ་ཚད་ནང་ལུ་ བསྡུ་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
མོ་ལར་ཡལ་འགྱོ་ནི་གི་འཇོན་ཐངས་འདི་ ཧ་ལམ་༥༠དེ་ཅིག་གི་ A880ལུ་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ ཐག་བཏོགཔ་ཨིན་མས། 10μlགི་འབོར་ཚད་འདི་ 990μlགི་ནང་ལུ་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ BChlགི་མར་ཕབ་འདི་ མར་ཕབ་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ དེ་འཕྲོ་ལས་ འོད་རླབས་བསྡུ་ལེན་འབད་དགོཔ་ཨིན། མི་ཐ་ནོལ་དཔེ་ཚད་རེ་གི་ནང་ལུ་ BChl གི་ནང་དོན་འདི་ ༥༤.༨ mM-1 cm-1 གི་ ༧༧༡ nm ལུ་ ཡལ་འགྱོ་བའི་འཇོན་ཐངས་ཀྱི་ཐོག་ལས་ རྩིས་རྐྱབ་སྟེ་ ཡལ་འགྱོ་བའི་འཇོན་ཚད་འདི་ གཏན་འབེབས་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། (༥༡) འཇལ་ཚད་འབད་མི་ BChl གི་ཆ་ཚད་འདི་ ༣༢ ༼RC-LH114-W༽ ཡང་ན་ ༣༦ ༼RC-LH116༽ གིས་བགོ་བཤའ་རྐྱབ་སྟེ་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ཀྱི་ཆ་ཚད་འདི་ གཏན་འབེབས་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། འདྲ་མཉམ། དཔེ་ཚད་རེ་ལུ་ བསྐྱར་ལོག་འཇལ་ཚད་གསུམ་རེ་བཏོན་ཡོདཔ་ད་ རྩིས་རྐྱབ་ནིའི་དོན་ལུ་ BChl Qy མཐོ་ཤོས་ཀྱི་ སྤྱིར་སྙོམས་འཐེན་ཤུགས་འདི་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH114-W གི་ རབས་ཆད་ཀྱི་འཇོན་ཚད་འདི་ ༨༧༨ nm ལུ་འཇལ་མི་འདི་ ༣༢༨༠±༡༤༠ mM-༡ cm-༡ ཨིནམ་དང་ RC-LH116 གི་ཡལ་འགྱོ་བའི་འཇོན་ཚད་འདི་ ༨༨༠ nm ལུ་འཇལ་མི་འདི་ ༣༨༠༠±༣༠ mM-༡ cm-༡ ཨིན།
UQ10 འདི་ (52) ནང་ཡོད་པའི་ཐབས་ལམ་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ ཚད་འཇལ་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུས་ན་ ཕྱིར་ལོག་གནས་རིམ་ HPLC (RP-HPLC) འདི་ Agilent 1200 HPLC ལམ་ལུགས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། RC-LH116 ཡང་ན་ RC-LH114-W གི་ 0.02 nmol དེ་ཅིག་ 50:50 མི་ཐ་ནོལ:ཀླུ་ཕོརམ་ནང་ 0.02% (w/v) ཕེ་རིཀ་ཀླུ་རའིཌ་ཡོད་པའི་ 50μl ནང་བཞུ་བཅུག་སྟེ་ སྔོན་འགྲོའི་འདྲ་མཉམ་གྱི་ Beckman Coulter Ultrasphere m1-4 m1l. 40°C ནང་ HPLC བཞུ་རྫས་ (80:20 མི་ཐ་ནོལ:2-པྲོ་པ་ནོལ) ×25 cm ཀ་ཆེན་གུ། ཆུ་ཚོད་༡གི་རིང་ལུ་ ༢༧༥ཨེན་ཨེམ་ ༼ཡུ་ཀིའུ་༡༠༽ དང་ ༤༥༠ ཨེན་ཨེམ་ ༼ཀེ་རོ་ཊི་ནའིཌསི་༽ དེ་ལས་ ༧༨༠ ཨེན་ཨེམ་ ༼བི་སི་ཨེཆ་ཨེལ་༽ ལུ་ ཐིམ་ཚུགས་བལྟ་ནི་གི་དོན་ལས་ ཨེཆ་པི་ཨེལ་སི་བཞུ་རྫས་ནང་ལུ་ ཨའི་སོ་ཀྲེག་ཀྲིག་བཞུ་ཁུ་འབད་དགོ། སྐར་མ་༢༥.༥ ལུ་ ༢༧༥ nm chromatogram ནང་ མཐོ་ཚད་འདི་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཡོདཔ་ད་ དེ་ནང་ གཞན་མི་བརྟག་དཔྱད་འབད་ཚུགས་པའི་ རྫས་སྦྱོར་ཚུ་མེདཔ་ཨིན། མཉམ་སྡེབ་ས་ཁོངས་འདི་ ༠ ལས་ ༥.༨ nmol ཚུན་ ཚད་གཞི་གཙང་མ་བཙུགས་མི་ལས་ རྩིས་རྐྱབ་མི་ ཚད་འཇལ་གུག་ཀྱོག་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ བཏོན་མི་ UQ10 གི་ མོ་ལར་གྱི་ཚད་གཞི་རྩིས་རྐྱབ་ནིའི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། (པར་རིས་ S14) དཔེ་ཚད་རེ་རེ་བཞིན་དུ་ འདྲ་བཤུས་གསུམ་ནང་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ད་ སྙན་ཞུ་འབད་མི་འཛོལ་བ་འདི་ སྤྱིར་སྙོམས་ཀྱི་ SD དང་མཐུན་སྒྲིག་ཡོདཔ་ཨིན།
RC-LH1 མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་ཐབས་ཤེས་འདི་ མཐོ་ཤོས་ Qy 0.1 བཙུགས་ཏེ་ 30 μM རྟ་གི་སྙིང་ཁམས་ cytochrome c2 (Merck, UK) དང་ 0 ལས་ 50 μMUQ2 (Merck, UK) མར་ཕབ་འབད་དེ་ བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། དཔེ་ཚད་༡-ml གསུམ་འདི་ UQ2 གི་ཆ་ཚད་རེ་ལུ་བཟོ་སྟེ་ འཇལ་ཚད་མ་འབད་བའི་ཧེ་མ་ གནག་དུང་ནང་ལུ་ ཆ་ཚང་སྦེ་ མཐུན་སྒྲིག་འབད་ཚུགས་ནི་གི་དོན་ལས་ དྲོད་ཚད་༤°C ལུ་ མཚན་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ གནགཔོ་ནང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཐབས་ཤེས་འདི་ OLIS RSM1000 མོ་ཌུ་ལར་ཨིསི་པེག་ཀྲོ་ཕོ་ཀྲོ་མི་ཀྲར་ནང་ལུ་ ༣༠༠ཨེན་ཨེམ་གྱི་མེ་ལྕེ་/༥༠༠གི་ཐིག་གེ་རེ་ཊིང་དང་ ༡.༢༤ཨེམ་ཨེམ་གྱི་ ནང་འཛུལ་ དེ་ལས་ ༠.༡༢ཨེམ་ཨེམ་གྱི་བར་ན་ དེ་ལས་ ༠.༦ཨེམ་ཨེམ་གྱི་ ཕྱི་ཁའི་ས་སྒོ་ཚུ་བཙུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན། དཔེ་ཚད་ཀྱི་འོད་ཀྱི་དུང་ཅུང་དང་ གཞི་བསྟུན་འོད་ཀྱི་དུང་ཅུང་གི་འཛུལ་སྒོ་ནང་ ༦༠༠ ཨེན་ཨེམ་རིང་ཚད་ཀྱི་ བརྒྱུད་ལམ་ཚགས་མ་ཅིག་ བཙུགས་ཏེ་ འཕར་རྩའི་འོད་འདི་ ཕྱིར་བཏོན་འབདཝ་ཨིན། དབང་པོའི་ཤུགས་ཚད་འདི་ ༥༥༠ nm ལུ་ ༠.༡༥ s གི་མཉམ་སྡེབ་དུས་ཚོད་དང་གཅིག་ཁར་ བལྟ་རྟོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འོད་འདི་ 880 nm M880F2 LED ༼Light Emitting Diode༽ ༼Thorlabs Ltd., UK༽ ལས་ DC2200 ཚད་འཛིན་༼Thorlabs Ltd., UK༽ བརྒྱུད་དེ་ བརྒྱ་ཆ་༩༠ གི་ཤུགས་ཚད་ནང་ལུ་ ཕའི་བཱར་ཨོཔ་ཀྲིག་ཀེབ་ལི་བརྒྱུད་དེ་ བཏོན་དོ་ཡོདཔ་དང་ འདི་ཡང་ འོད་ཀྱི་འབྱུང་ཁུངས་འདི་ གྲུ་ཟུར་༩ ལུ་ བཏོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན། འཇལ་ཚད་ཀྱི་འོད་འདི་ དཔེ་ཚད་ཀྱིས་ འགོ་ཐོག་ལུ་ མ་བཙུགས་པའི་འོད་ག་ཅི་རང་འབད་རུང་ ལོག་སྤྲོད་ནིའི་དོན་ལུ་ མེ་ལོང་ལུ་ རྒྱབ་འགལ་འབདཝ་ཨིན། 50 s གི་འོད་མདངས་མ་བྱུང་བའི་ཧེ་མ་ 10 s གི་འཐེན་ཤུགས་ལྟ་རྟོག་འབད། དེ་ལས་ གནག་དུང་ནང་ལུ་ སྐར་མ་༦༠གི་རིང་ལུ་ བལྟ་རྟོག་འབད་དེ་ quinololགིས་ cytochrome c23 + ག་དེ་ཅིག་མར་ཕབ་འབདཝ་ཨིན་ན་ བལྟ་ནུག
གནས་སྡུད་ཚུ་ ༠.༥ ལས་ ༡༠ s གི་ནང་འཁོད་ལུ་ རིམ་འགྲོས་འགོ་ཐོག་གནས་ཚད་བཙུགས་ཏེ་ ༼UQ2 གི་ཆ་ཚད་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་༽ དཔེ་ཚད་གསུམ་ཆ་ར་གི་གནས་ཚད་ཚུ་ UQ2 གི་ཆ་ཚད་རེ་རེ་ནང་ སྤྱིར་སྙོམས་འབད་དེ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། རང་སོའི་ཡལ་འགྱོ་ནི་གི་འཇོན་ཐངས་ཀྱིས་ རྩིས་རྐྱབ་མི་ RC-LH1 གི་ཆ་ཚད་འདི་ Origin Pro 2019 ༼OriginLab, USA༽ ནང་ལུ་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་དང་ འདི་ཡང་ Michaelis-Menten གི་དཔེ་ཚད་ནང་ལུ་བཙུགས་ཏེ་ Km དང་ Kcat གི་གནས་གོང་ཚུ་ གཏན་འབེབས་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན།
དུས་ཐུང་དབང་པོའི་འཇལ་ཚད་ཀྱི་དོན་ལས་ RC-LH1 དཔེ་ཚད་འདི་ IMAC བཱ་ཕར་ནང་ལུ་ ~2μM ལུ་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ 50 mM sodium ascorbate (Merck, USA) དང་ 0.4 mM Terbutin (Merck, USA) ཡོདཔ་ཨིན། Ascorbic acid འདི་ གློག་རྫས་བྱིན་མི་ཅིག་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་ད་ tert-butaclofen འདི་ འཇལ་ཚད་ཀྱི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ RC བྱིན་མི་ངོ་མ་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་བཅུག་ནི་གི་དོན་ལས་ QB བཀག་ཆ་འབད་མི་ཅིག་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། དཔེ་ཚད་འདི་ ཧ་ལམ་ ༣ ml དེ་ཅིག་ རང་བཞིན་གྱི་བསྒྱིར་མི་ཁམས་ཕྲན་ཅིག་ནང་ལུ་ ཁ་སྐོང་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། དཔེ་ཚད་འདི་ ༨༨༠ ཨེན་ཨེམ་ལུ་ ༡ ཀེ་ཨེཆ་ཛི་གི་བསྐྱར་ལོག་ཚད་གཞི་ནང་ ༼ཨེན་ཨའི་ཨར་ ༢༠ ཨེན་ཇེ་ ཡང་ན་ ཝིསི་གི་དོན་ལུ་ ༡༠༠ ཨེན་ཇེ་༽ ལུ་ ཊི་: སེ་ཕི་ཡར་ འོད་རླབས་ལམ་ལུགས་ ༼ཨིསི་པེག་ཊར་དངོས་ཁམས་རིག་པ་ ཡུ་ཨེས་ཨེ་༽ འདི་ རྒྱ་སྐྱེད་བཏང་ནི་གི་དོན་ལས་ ~༡༠༠-ཨེཕ་ཨེསི་ འོད་འཕྲོའི་འཕར་རྩ་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ། གནས་སྡུད་བསྡུ་ལེན་མ་འབད་བའི་ཧེ་མ་ དཔེ་ཚད་འདི་ སྐར་མ་༣༠ དེ་ཅིག་གི་རིང་ལུ་ འཕར་རྩའི་འོད་ལུ་བཏོན་དགོ། འགྲེམ་སྟོན་འབད་མི་འདི་གིས་ QA ཤུགས་མེད་བཟོ་འོང་ (QA ཚར་གཅིག་ཡང་ན་ཚར་གཉིས་མར་ཕབ་འབད་ཚུགས།) དེ་འབདཝ་ད་ བྱ་རིམ་འདི་ ལོག་བཏང་ཚུགསཔ་ཨིནམ་དྲན་འཛིན་འབད་གནང་། ག་ཅི་འབད་ཟེར་བ་ཅིན་ དུས་ཡུན་རིངམོ་ཅིག་ གནགཔོ་སྦེ་ མཐུན་སྒྲིག་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ RC གིས་ འགོར་ལས་སྦེ་ QA ལས་སྣ་ལུ་ལོག་འོང་། ཧི་ལིའོསི་ཨིསི་པེག་ཀྲོ་མི་ཀྲར་ ༼ཨཱལ་ཀྲ་ཕཱསཀྲ་ལམ་ལུགས་ ཡུ་ཨེསི་ཨེ་༽ འདི་ དུས་ཚོད་ཕྱིར་འགྱངས་འབད་དེ་ -༡༠ལས་༧༠༠༠པི་ཨེསི་གི་བར་ན་འཇལ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། གནད་སྡུད་ཆ་ཚན་ཚུ་ སྡེ་ཚན་མེདཔ་བཟོ་ཞིནམ་ལས་ མཉམ་བསྡོམས་འབད་དེ་ ཚད་ལྡན་བཟོ་ནི་ལུ་ སར་ཕེསི་ཨེགསི་པོལོ་རར་མཉེན་ཆས་ (ཨཱལ་ཊར་ཕཱསི་ཊི་སི་ཊམ་ ཡུ་ཨེསི་ཨེ་) ལག་ལེན་འཐབ། ཉམས་རྒུད་དང་འབྲེལ་བའི་འོད་བརླབས་ཀྱི་ཁྱད་པར་ཐོབ་ནི་གི་དོན་ལས་ མཉམ་སྡེབ་ཀྱི་གནས་སྡུད་ཆ་ཚན་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ནི་གི་དོན་ལས་ ཀཱར་པེཀྲི་བིའུ་མཉེན་ཆས་ཐུམ་སྒྲིལ་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ ༼འོད་བསྒྱུར་བཅོས་ལས་འཛིན་ ལི་ཐུ་ཝེ་ནི་ཡ་༽ ཡང་ན་ འབྱུང་ཁུངས་ ༼འབྱུང་ཁུངས་ཡུ་ཨེསི་ཨེ་ལུ་༽
གོང་དུ་བཤད་པ་ལྟར་ (༥༣) RC དང་ peripheral LH2 antenna གཉིས་ཆ་ར་མེད་པའི་ LH1 མགུ་རྙོག་ཡོད་པའི་ འོད་ཀྱི་བསྡུ་སྦྱོར་གྱི་གློག་བརྙན་ཅིག་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། གྱིབ་མ་འདི་ ༢༠ mM tris (pH 8.0) ནང་ལུ་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ དེ་ལས་ 2 mm གི་འོད་ཀྱི་ལམ་ཡོད་པའི་ ཀོཝར་ཊི་ཀུ་ཝེཊ་ནང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། དཔེ་ཚད་འདི་ ༥༤༠ nm ལུ་ -༡༠ ལས་ ༧༠༠༠ ps གི་བར་ན་ ཕྱིར་འགྱངས་འབད་དེ་ སེམས་ཤུགས་བསྐྱེད་ནི་གི་དོན་ལས་ ༣༠nJ ལེ་ཟར་པཱལསི་འདི་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། Rps གི་དོན་ལུ་གསལ་བཀོད་འབད་ཡོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ གནད་སྡུད་ཆ་ཚན་འདི་ལས་སྦྱོར་འབད། pal དཔེ་ཚད།
དྲོད་ཚད་༤གི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་༢གི་རིང་ལུ་ ༡༥༠༠༠༠ RCF ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ གྱིབ་མ་འདི་ དྲོད་ཚད་༨༨༠nm ལུ་ ༢༠ mM tris-HCl (pH ༨.༠) དང་ ༢༠༠ mM NaCl ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཀག་བཞག་ཡོདཔ་ཨིན། ༢% (w/v) β-DDM ནང་ ཆུ་ཚོད་ ༡ གི་རིང་ ༤°C ལུ་ གནག་དུང་ནང་ རིམ་གྱིས་སྦེ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ གྱིབ་མ་འདི་ བཞུ་དགོ། དཔེ་ཚད་འདི་ ༡༠༠ mM triethylammonium carbonate ༼pH ༨.༠༽ ༼TEAB; Merck, UK༽ ནང་ལུ་ འཚོ་བཅུད་ཀྱི་ཆ་ཚད་ ༢.༥ mg ml-1 ༼Bio-Rad དབྱེ་དཔྱད༽ ལུ་ བཞུ་བཅུག་ཡོདཔ་ཨིན། ད་རུང་ ཧེ་མ་ལས་ དཔར་བསྐྲུན་འབད་ཡོད་པའི་ཐབས་ལམ་ལས་ བཟོ་སྦྱོར་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། སྐར་ཆ་༦༠ གི་རིང་ལུ་ སྒྲ་སྐད་བཏང་པའི་ཤུལ་ལས་ སྐར་མ་༣༠ གི་རིང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༣༧°C ལུ་ ༥ mM tris(༢-carboxyethyl)phosphine (Merck, UK) གི་ཐོག་ལས་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། S-alkylation གི་དོན་ལས་ དཔེ་ཚད་འདི་ ༡༠ mM མི་ཐིལ་ S-methylthiomethanesulfonate ༼Merck, UK༽ དང་ཅིག་ཁར་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ 200 mM isopropanol གི་ཐབས་ཤེས་ལས་ སྐར་མ་༡༠ གི་རིང་ལུ་ ཁང་མིག་གི་དྲོད་ཚད་ནང་ལུ་ ཁ་སྐོང་བཀོད་དགོ། ཟས་བཅུད་བཞུ་བཅུག་ནི་འདི་ trypsin/endoproteinase Lys-C སླ་བསྲེ་ (Promega UK) ༢ μg བླུགས་ཏེ་ ཆུ་ཚོད་༣ གྱི་རིང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༣༧°C ལུ་ བཙུགས་ཏེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ལཱུ་རེཊ་ ཁ་ཐོག་ལུ་ཡོད་པའི་ རྫས་སྦྱོར་འདི་ ཨི་ཐཱལ་ཨེ་སི་ཊེཊ་ ༥༠ μl དང་ ༡༠% (v/v) LC རིམ་པ་ ཀྲི་ཕུ་ལོ་རོ་ཨེ་སི་ཊིག་ཨེ་སིཌ་ (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) ཁ་སྐོང་བཀོད་དེ་ སྐར་མ་༦༠ གི་རིང་ལུ་ བསྐོར་ར་རྐྱབ་སྟེ་ བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་རིམ་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་འདི་ སྐར་མ་༥ གི་རིང་ལུ་ ༡༥༧༠༠ RCF ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ ཡར་དྲག་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། བཟོ་བསྐྲུན་འབད་མི་ཚུ་གི་མཐུན་གྲོས་དང་འཁྲིལ་བ་ཅིན་ པེབ་ཊའིཌ་ཡོད་པའི་ དམའ་བའི་གནས་རིམ་འདི་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ བཏོན་བཏང་ནི་དང་ ཚྭ་བཏོན་ནི་གི་དོན་ལས་ C18 spin column (Thermo Fisher Scientific, UK) འདི་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། གནམ་སྟོང་དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ སྐམ་བཏང་པའི་ཤུལ་ལས་ དཔེ་ཚད་འདི་ བརྒྱ་ཆ་༠.༥གི་ཀྲི་ཨེཕ་ཨེ་དང་ བརྒྱ་ཆ་༣གི་ཨེ་སི་ཀྲོ་ནི་ཀྲའིལ་ནང་ལུ་བཞུ་བཅུག་སྟེ་ ཧེ་མ་ཁ་གསལ་སྦེ་བཀོད་དེ་ཡོད་མི་ལམ་ལུགས་ཀྱི་ཚད་གཞི་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ་ཏེ་ ནེ་ནོ་ཕོལོ་ཨར་པི་ཀོརོ་མེ་ཀྲོ་གཱ་ར་ཕི་གི་ཐོག་ལས་ ༥༠༠ཨེན་ཇི་འདི་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
ཟས་བཅུད་ངོས་འཛིན་དང་ འབོར་ཚད་ཀྱི་དོན་ལུ་ MaxQuant v.1.5.3.30 (56) ལག་ལེན་འཐབ། palustris ཕྲ་འབུམ་གྱི་གནས་སྡུད་གཞི་གྲངས་ (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426) དང་། གནས་སྡུད་ཆ་ཚན་ངོས་འཛིན་འབད་མི་ PXD020402 གི་འོག་ལུ་ PRIDE མཉམ་འབྲེལ་གྱི་མཛོད་ཁང་བརྒྱུད་དེ་ ProteomeXchange Alliance ནང་ལུ་ བཙུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན།
RPLC དང་ electrospray ionization mass spectrometry གིས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ RC-LH1 གི་སྣ་མང་འདི་ རི་དྭགས་ཀྱི་ Rps ལས་ བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། ཧེ་མ་ལས་ དཔར་བསྐྲུན་འབད་ཡོད་པའི་ཐབས་ལམ་ (༡༦) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ པཱ་ལུ་སི་ཊི་རིསི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ ཐོན་སྐྱེད་འབད་མི་ ཟས་བཅུད་ཀྱི་ ཆ་ཚད་འདི་ ༢༠ mM Hepes (pH ༧.༨) དང་ ༡༠༠ mM NaCl དེ་ལས་ ༠.༠༣% (w/v) β- (Bio-Rad analysis) ) DDM ནང་ ༢ mg ml-1 ཨིན་པས། བཟོ་སྐྲུན་པའི་སྒྲིག་གཞི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ 2D purification kit (GE Healthcare, USA) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཆར་ཆུ་ཐབས་ལམ་ཐོག་ལས་ ཟས་བཅུད་ ༡༠ μg བཏོན་ཞིནམ་ལས་ ཆར་ཆུ་འདི་ ༢༠ μl ༦༠% (v / v) ཕོར་མིག་ཨེ་སིཌ་ (FA) དང་ ༢༠% (v / v) Acetonitrile/ ༢༠%vter (20%)vter ནང་ བཞུ་དགོ། མའི་ཀོརོ་ལི་ཊར་ལྔ་འདི་ RPLC (Dionex RSLC) གིས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། 60°C དང་ 100μlmin -1 ལུ་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནིའི་དོན་ལུ་ MabPac 1.2×100 mm ཀ་ཆེན་ (Thermo Fisher Scientific, UK) ལག་ལེན་འཐབ། [0.1%(v/v) FA དང་ 0.02%(v/v) 90%(v/v) acetonitrile TFA ནང་] སྐར་མ་ ༦༠ ལྷག་ཙམ་གྱི་རིང་ལ་ཚད་ལྡན་གློག་རྡུལ་གློག་རྡུལ་གློག་རྡུལ་འབྱུང་ཁུངས་དང་སྔོན་སྒྲིག་ཚད་གཞི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མང་ཚོགས་འོད་རླབས་ཚད་འཇལ་ཆས་ཀྱིས་ ༡༠༠ ལས་ ༢༧༥༠ m/z ༼མང་ཚོགས་ལས་གློག་ཤུགས་ཆ་སྙོམས་༽ ཐོབ་ཨིན། ExPASy སྐྱེ་ལྡན་བརྡ་དོན་ཐོན་ཁུངས་དྲྭ་ཚིགས་ FindPept ལག་ཆས་ (https://web.expasy.org/findpept/) གི་རྒྱབ་སྐྱོར་ཐོག་ལས་ མགུ་རྙོག་དྲགས་ཀྱི་ཡན་ལག་ཚུ་ལུ་ འོད་རླབས་ཀྱི་ སབ་ཁྲ་བཟོ།
ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ཆུ་ཚོད་༧༢ གི་རིང་ལུ་ NF-low (10μMm-2 s-1) དང་ བར་མ་ (30μMm-2 s-1) ཡང་ན་ མཐོ་དྲགས་ (300μMm-2 s-1) གི་འོད་འོག་ལུ་ འཕེལ་འགྱུར་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། M22 བརྒྱུད་ལམ་ (M22 བརྒྱུད་ལམ་ནང་ ammonium sulfate བཏོན་བཏང་ཞིནམ་ལས་ སོ་དྲི་ཡམ་སུ་སི་ནེཊ་འདི་ སོ་དྲི་ཡམ་ཨ་སི་ཊེཊ་གིས་ ཚབ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན།) 100 ml screw-top bottle (23) ནང་། སྐར་ཆ་༣༠གི་འཁོར་རིམ་ལྔ་གི་ནང་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ བཤིག་ནི་གི་དོན་ལས་ མའི་ཀྲོན་༠.༡གི་ཤེལ་གྱི་ཕྱེངམ་འདི་ འབོར་ཚད་༡:༡གི་ཆ་ཚད་ནང་ལུ་ ཕྱེངམ་སྦེ་བཙུགས་ཏེ་ སྐར་མ་༥གི་རིང་ལུ་ འཁྱེག་གུར་ལུ་བསིལ་དྲགས་སྦེ་བཞག་ཡོདཔ་ཨིན། བཞུ་མ་ཚུགས་པའི་དངོས་པོ་དང་ མ་བཅག་པའི་ཁམས་ཕྲན་ དེ་ལས་ ཤེལ་གྱི་ཕྱེངམ་ཚུ་ སྐར་མ་༡༠གི་རིང་ལུ་ RCF ༡༦༠༠༠ ལུ་ བང་ཅུང་ཆུང་བ་ནང་ལུ་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། གདོང་ཁེབས་འདི་ Ti 70.1 འཁོར་ལོ་ནང་ 100,000 RCF 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ནང་ 40/15% (w/w) སུ་ཀ་རོསི་གི་གཤམ་འོག་ཆུ་ཚོད་ 10 རིང་ཁ་ཕྱེ་ཡོད།
ང་བཅས་ཀྱི་ཧེ་མའི་ལཱ་ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ PufW (16) གུ་ཡོད་པའི་ His tag གི་ནད་འགོག་བརྟག་དཔྱད་འདི་ཨིན། མདོར་བསྡུས་བ་ཅིན་ གཙང་སྦྲ་ཅན་གྱི་ལྟེ་བ་(༡༡.༨ nM) ཡང་ན་ RC གི་ཆ་ཚད་ཅོག་འཐདཔ་ཡོད་མི་ གདོང་ཁེབས་འདི་ ༼འོད་རླབས་ཀྱི་ཁྱད་པར་མར་ཕབ་འབད་དེ་ ཚོས་གཞི་ཡོད་པའི་ ཇེལ་གྱི་ལྗིད་ཚད་དང་མཐུན་སྒྲིག་འབད་དེ་ བཙོག་རླུང་གིས་ ཐག་བཏོགཔ་ཨིན།༽ འཚོ་བཅུད་ཚུ་ བརྒྱ་ཆ་༡༢གི་ བིསི་ཀྲིསི་ནུ་པེཇ་ཇེལ་གྱི་འདྲ་དཔེ་གུ་ལུ་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། ༼ཐར་མོ་ཕི་ཤར་མཚོན་རིག་ ཡུ་ཀེ་༽ RC-L ཡན་ལག་འདི་ མངོན་གསལ་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ ཇེལ་འདི་ Coomassie Brilliant Blue ༼Bio-Rad, UK༽ གི་ཐོག་ལས་ ཚོས་གཞི་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། ཇེལ་གཉིས་པའི་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ འཚོ་བཅུད་འདི་ ནད་རིགས་བཀག་ཐབས་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལས་ མི་ཐ་ནོལ་ཤུགས་ལྡན་བཟོ་མི་ པོ་ལི་ཝི་ནི་ལི་ཌིན་ཕུ་ལོ་རའིཌ་ ༼པི་ཝི་ཌི་ཨེཕ་༽ གི་ཆ་རྐྱེན་ ༼ཐར་མོ་ཕི་ཤར་མཚོན་རིག་ ཡུ་ཀེ་༽ ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ཡང་ ༥༠ mM tris-HCl (pH 7.6) དང་ ༡༥༠ mM NaCl དེ་ལས་ ༠.༢% (v / v) ཊུའིན་-༢༠ དང་ ༥% (w / v) གྱི་ཆུམ་གྱི་ཕྱེ་མ་ནང་ བཀག་བཞག་སྟེ་ དེ་ལས་ ཨེན་ཊི་ཧིསི་གི་ གཞི་རྟེན་ནུས་ཤུགས་ (buffer mH0p [in Dilute mH-5p]) དང་ཅིག་ཁར་ བཀག་བཞག་ནུག། ༧.༦) ༡༥༠ mM NaCl དང་ ༠.༠༥% (v/v) Tween-20] ༡:༡༠༠༠ A༡༩༠-༡༡༤A བེ་ཐིལ་བརྟག་དཔྱད་ཁང་ ཡུ་ཨེས་ཨེ་) ནང་ཆུ་ཚོད་ ༤ རིང་བཞག་ཡོད། ནུས་གཟུགས་བཱ་ཕར་ནང་སྐར་མ་༥ གི་རིང་ལུ་ ཚར་༣ བཀྲུ་བའི་ཤུལ་ལས་ གདོང་ཁེབས་འདི་ ཧོར་སེར་ཌིཤ་པེ་རོ་ཨོག་སི་ཌེསི་ (Sigma-Aldrich, UK) དང་ཅིག་ཁར་ མཉམ་སྡེབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། (Cyanagen, Italy) དང་ཨ་མར་ཤམ་ཨི་མེ་གར་ ༦༠༠ (GE Healthcare, UK) བཅས་ཡིན།
ཚོས་གཞི་ཡོད་པའི་ཇེལ་རེ་རེ་གི་ཤུགས་ཚད་བཀྲམ་སྤེལ་དང་ ཡང་ན་ ནད་རིགས་བཀག་ཐབས་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་ལམ་ལུགས་འདི་ རི་མོ་བཀོད་དེ་ མཐོ་ཚད་འོག་ལུ་ཡོད་པའི་ས་ཁོངས་འདི་ གཅིག་ཁར་བསྡོམ་ཞིནམ་ལས་ RC-L (stained gel) དང་ Protein-W (immunoassay) གི་ཤུགས་ཚད་ཀྱི་ཆ་ཚད་རྩིས་རྐྱབ་སྟེ་ ImageJ (57) ནང་ལུ་ པར་རིས་འདི་བཟོ་ནི། འ་ནི་ཆ་ཚད་ཚུ་ RC-LH114-W དཔེ་ཚད་ངོ་མ་ནང་ལུ་ RC-L དང་ protein-W གི་ཆ་ཚད་འདི་ ༡:༡ཨིནམ་སྦེ་ མནོ་བསམ་བཏང་སྟེ་ མོ་ལར་ཆ་ཚད་ལུ་བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ གནས་སྡུད་ཆ་མཉམ་རང་ སྤྱིར་བཏང་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན།
རྩོམ་ཡིག་འདི་གི་དོན་ལུ་ ལྷན་ཐབས་ཀྱི་རྒྱུ་ཆ་ཚུ་གི་དོན་ལུ་ ཁ་བྱང་འདི་གཟིགས་གནང་།
འདི་ གསར་བསྐྲུན་སྤྱིར་བཏང་ཁྱད་ཆོས་ཆོག་ཐམ་གྱི་ གནས་ཚིག་ཚུ་གི་འོག་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ཡོད་པའི་ ཁ་ཕྱེ་ཡོད་པའི་འཛུལ་སྤྱོད་རྩོམ་ཡིག་ཅིག་ཨིན། རྩོམ་བྲིས་འདི་གིས་ ལཱ་ངོ་མ་འདི་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ བཀོད་དེ་ཡོད་པའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ བརྒྱུད་ལམ་ག་ཅི་ནང་ར་འབད་རུང་ བཀག་ཆ་མེད་པར་ ལག་ལེན་འཐབ་ནི་དང་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ནི་ དེ་ལས་ བསྐྱར་བཟོ་འབད་བཅུགཔ་ཨིན།
དྲན་འཛིན་: ཁྱོད་ཀྱིས་ ཤོག་ལེབ་ལུ་ གྲོས་འཆར་བཀོད་མི་ མི་ངོམ་འདི་གིས་ ཁྱོད་ཀྱིས་ གློག་འཕྲིན་འདི་ བལྟ་དགོཔ་སྦེ་ ཤེས་ཚུགས་ནིའི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྱོད་རའི་གློག་འཕྲིན་ཁ་བྱང་འདི་ ཨིས་པམ་མེན་ཟེར་ ཤེས་ཚུགསཔ་སྦེ་ དྲིཝ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ གློག་འཕྲིན་ཁ་བྱང་གང་རུང་ཅིག་ བཟུང་མི་བཏུབ།
དྲི་བ་འདི་ ཁྱོད་ལྟ་བཤལཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ བརྟག་ཞིབ་འབད་ནི་དང་ རང་བཞིན་གྱིས་ ཨིས་པམ་གཏང་ནི་བཀག་ཐབས་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན།
ཌེ་ཝིཌ་ཇེ་ཀེ་ སུའེནསི་བཱ་རི་ པཱརཀ་ཀིའན་ ཕི་ལིབ་ཇེ་ཇེག་སོན་ ཀེཊ་ལིན་ཨེམ་ཕེ་རིསི་ ཌ་རི་ཡུསི་ཨེམ་ ནིཌ་ཟི་ཝི་ཌི་སི་ཀི་ ཨི་ལི་ཟི་བིཊ་སི་མར་ཊིན་ ཌེ་ཝིཌ་ཨེ་ཕར་མར་ ལོར་ན་ཨེ་མ་ལོན་ རི་བེཀ་ཀ་ཨེཕ་ཐོམ་སོན་ ནིལ་ཨེ་རན་སོན་ ཌེ་ནིལ་པི་ཀེན་ནིཕ་ མཱརཀ་ཇེ་ཌིག་མེན་ ཌི་ཝིན་ཧི་ཝིལ་ཧོ་ཊེན་ ཁིརཱིསཊ་ཇེ་ཌིག་མེན་ ཌི་ཝི་ཧི་ནིཆ་ཧོལ་ཊེན།
འགྱུར་ལྡོག་ལྟེ་བའི་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ འོད་ཀྱི་ལྕགས་ཐག་༡གི་ མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་བཟོ་བཀོད་འདི་གིས་ ཀུའི་ནོན་གྱི་གཡོ་འགུལ་གྱི་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་གསརཔ་བྱིནམ་ཨིན།
ཌེ་ཝིཌ་ཇེ་ཀེ་ སུའེནསི་བཱ་རི་ པཱརཀ་ཀིའན་ ཕི་ལིབ་ཇེ་ཇེག་སོན་ ཀེཊ་ལིན་ཨེམ་ཕེ་རིསི་ ཌ་རི་ཡུསི་ཨེམ་ ནིཌ་ཟི་ཝི་ཌི་སི་ཀི་ ཨི་ལི་ཟི་བིཊ་སི་མར་ཊིན་ ཌེ་ཝིཌ་ཨེ་ཕར་མར་ ལོར་ན་ཨེ་མ་ལོན་ རི་བེཀ་ཀ་ཨེཕ་ཐོམ་སོན་ ནིལ་ཨེ་རན་སོན་ ཌེ་ནིལ་པི་ཀེན་ནིཕ་ མཱརཀ་ཇེ་ཌིག་མེན་ ཌི་ཝིན་ཧི་ཝིལ་ཧོ་ཊེན་ ཁིརཱིསཊ་ཇེ་ཌིག་མེན་ ཌི་ཝི་ཧི་ནིཆ་ཧོལ་ཊེན།
འགྱུར་ལྡོག་ལྟེ་བའི་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ འོད་ཀྱི་ལྕགས་ཐག་༡གི་ མགུ་རྙོག་ཅན་གྱི་བཟོ་བཀོད་འདི་གིས་ ཀུའི་ནོན་གྱི་གཡོ་འགུལ་གྱི་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་གསརཔ་བྱིནམ་ཨིན།
©2021 ཨ་མི་རི་ཀའི་ཚན་རིག་གོང་འཕེལ་ཚོགས་པ། ཐོབ་ཐང་ཆ་ཚང་ཉར་ཡོད། AAAS འདི་ HINARI དང་ AGORA OARE CHORUS CLOCKSS ཀོརསི་རིཕ་ དེ་ལས་ ཀའུན་ཊར་ཚུ་གི་མཉམ་འབྲེལ་པ་ཅིག་ཨིན། མཚོན་རིག་གོང་འཕེལ་ ISSN 2375-2548