ང་བཅས་ཀྱིས་ ཧེ་མ་ལས་ མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་ཡོད་མི་ ནདཔ་ཚུ་ལུ་ མཆིནམ་ལས་ཐོན་པའི་ tryptophan metabolite indole-3-propionic acid (IPA) གི་ཚད་གཞི་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ སྙན་ཞུ་འབད་ཡི། ཞིབ་འཇུག་འདི་ནང་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་མ་ཚད་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་བཟོ་ནི་གི་ནང་ལུ་ IPAགི་འགན་ཁུར་འདི་ཡང་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི།
ཞིབ་འཇུག་ནང་ གུ་རམ་ནད་གཞི་ དབྱེ་བ་༢ པ་མེད་པའི་ ནདཔ་༡༡༦ ༼ལོ་ཚད་༤༦.༨ ± ༩.༣ དང་། ཁྲག་རྒྱུན་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་འདི་ liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) གི་ཐོག་ལས་ འཇལ་ཡོདཔ་ད་ མཆིནམ་གྱི་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ RNA གི་རིམ་པ་ཡོངས་བསྡོམས་དང་ DNA methylation གི་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ Infinium HumanMethylation450 BeadChip ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མི་ཡི་མཆིནམ་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ ༼ཨེལ་ཨེགསི་-༢༽ འདི་ ཝི་ཀྲོ་གི་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན།
ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་འདི་ apoptoticདང་mitophagic དེ་ལས་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ མི་ཚེ་རིངམོ་སྦེ་གནས་ནི་གི་ལམ་ལུགས་ཚུ་ནང་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོད་པའི་རིགས་མཚན་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། AKT serine/threonine kinase 1 (AKT1)རིགས་མཚན་འདི་ མཆིནམ་གྱི་ཡིག་ཆ་དང་ DNA methylationགི་གནས་སྡུད་ནང་ལུ་ མང་ཤོས་ཅིག་རང་ འབྲེལ་བ་འཐབ་མི་རིགས་མཚན་ཅིག་ཨིན་མས། IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ apoptosisདང་ mitochondrialགི་དབུགས་གཏོང་ལེན་མར་ཕབ་འགྱོ་མི་ དེ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་དང་ mitochondrialགི་འཕེལ་འགྱུར་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ fibrosisདང་apoptosis དེ་ལས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ གནས་ཚུགསཔ་སྦེ་བཟོཝ་ཨིན་མས།
གནས་སྡུད་འདི་ཚུ་གིས་ IPAལུ་ སྨན་བཅོས་ཀྱི་ནུས་པ་ཡོདཔ་ལས་ apoptosisདང་ HSC phenotypeའདི་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་པའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ལས་ HSCདང་ mitochondrial metabolismལུ་ བར་ཆད་རྐྱབ་སྟེ་ མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་འདི་ བཀག་ཚུགས་པའི་འོས་འབབ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
མངལ་སྒོའི་ནད་གཞི་དང་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་ནད་རྟགས་ཚུ་ ཁྱབ་སྤེལ་འགྱོ་མི་འདི་ བཅུད་འགྱུར་དང་འབྲེལ་བའི་ མཆིན་ཚད་ཀྱི་ནད་གཞི་ (MASLD) ཡར་སེང་འགྱོ་མི་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན། ནད་གཞི་འདི་གིས་ སྤྱིར་བཏང་མི་རློབས་བརྒྱ་ཆ་༢༥ ལས་༣༠ ལུ་ གནོད་སྐྱོན་རྐྱབ་ཨིན། MASLDགི་ནད་གཞི་འདི་ མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ ཁམས་ཕྲན་གཞན་མི་ཚུ་ འཕྲོ་མཐུད་དེ་རང་ བསྡུ་གསོག་འབད་མི་གི་བྱ་རིམ་ཅིག་ཨིན་མས། མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་ནང་ལུ་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོད་པའི་ཁམས་ཕྲན་ངོ་མ་འདི་ hepatic stellate cells(HSCs)ཨིནམ་ད་ འདི་གིས་ མཆིནམ་གྱི་ཁམས་ཕྲན་བཞི་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཁུ་སིམ་སིམ་དང་ ལཱ་འབད་མ་ཚུགས་མི་ དེ་ལས་ རྒས་ཤོས་ཚུ་ཨིན་མས། HSCsའདི་ ལཱ་འབད་བཅུག་སྟེ་ ནུས་ཤུགས་མཐོ་དྲགས་སྦེ་དགོ་མི་ fibroblastབཟུམ་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ α-smooth muscle actin(α-SMA)དང་ type I collagen(Col-I)གི་རྣམ་པ་ཡར་སེང་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་འདི་ ཕྱི་འགྱུར་འགྱོ་བའི་སྐབས་ལུ་ HSCsའདི་ apoptosisདང་ ཡང་ན་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་པའི་ཐོག་ལས་ བཏོན་བཏངམ་ཨིན་མས། འ་ནི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ fibrogenicརིགས་མཚན་མར་ཕབ་འབད་ནི་དང་ prosurvivalརིགས་མཚན་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ནི་(NF-κBདང་PI3K/Akt signaling pathways) དེ་ལས་ mitochondrialགི་འགྱུར་བ་དང་ལཱ་འགན་ཚུ་ཚུདཔ་ཨིན་མས།
ཕོཝ་ནང་ལུ་ཐོན་མི་ tryptophan metabolite indole-3-propionic acid(IPA)གི་ཁྲག་ནང་ལུ་ MASLDརྩིས་ཏེ་ མི་གི་ཟས་བཅུད་ཀྱི་ནད་གཞི་ཚུ་ནང་ མར་ཕབ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། IPAའདི་ བཞེས་སྒོའི་ནང་ལུ་ འབྲུ་སྣུམ་བཙུགས་མི་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ལས་ འདི་གིས་ འཚོ་བཅུད་དང་ དྲག་ཤུགས་ཚུ་ བཀག་ཐབས་འབདཝ་ཨིནམ་མ་ཚད་ བཞེས་སྒོ་ལས་བརྟེན་ཏེ་ ཆང་མེན་པའི་ steatohepatitis(NASH)གི་ནད་གཞི་འདི་ ཉམས་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ང་བཅས་རའི་ཧེ་མའི་ཞིབ་འཇུག་ལས་ སྒྲུབ་བྱེད་ལ་ལུ་ཅིག་ཐོན་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཡང་ Kuopio Bariatric Surgery Study (KOBS) ནང་ མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་མེད་མི་ ནདཔ་ཚུ་དང་ཕྱདཔ་ད་ ཁྲག་ནང་ IPA གི་གནས་ཚད་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ད་རུང་ ང་བཅས་ཀྱིས་ IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ ཁམས་ཕྲན་འཐུད་ནི་དང་ ཁམས་ཕྲན་གནས་སྤོ་འགྱོ་ནི་ དེ་ལས་ མི་གི་མཆིནམ་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ ཁྲག་བཏོན་ནི་གི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ IPAགིས་ HSC apoptosisདང་ mitochondrial bioenergeticsཚུ་ ག་དེ་སྦེ་ འགྱུར་བཅོས་འབདཝ་ཨིན་ན་ གསལ་ཏོག་ཏོ་ཅིག་མེདཔ་ཨིན་མས།
འདི་ནང་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྲག་ཤེད་ཀྱི་IPAའདི་ apoptosisདང་mitophagy དེ་ལས་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ མི་ཚེ་རིངམོ་སྦེ་སྡོད་ནི་གི་ལམ་ལུགས་ཚུ་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ གསལ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན་མས། ད་རུང་ ང་བཅས་ཀྱིས་ IPAགིས་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་པའི་ལམ་ལུགས་བརྒྱུད་དེ་ ཁྲག་འབབ་ཀྱི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ བཏོན་བཏང་ནི་དང་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགསཔ་སྦེ་ མཐོང་ནུག འ་ནི་གྲུབ་འབྲས་ཚུ་གིས་ IPAགི་འགན་ཁུར་གསརཔ་ཅིག་གསལ་སྟོན་འབད་དེ་ མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་འདི་ ཡར་དྲག་བཏང་ནི་གི་དོན་ལས་ སྨན་བཅོས་ཀྱི་དམིགས་གཏད་ཅིག་སྦེ་བཟོཝ་ཨིན་མས།
ཧེ་མའི་ཞིབ་འཇུག་ནང་ KOBS སྡེ་ཚན་ནང་ མཆིནམ་ནད་གཞི་ཡོད་མི་ ནདཔ་ཚུ་ལུ་ མཆིནམ་ནད་གཞི་མེད་མི་ཚུ་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ IPA གི་གནས་ཚད་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ནུག [15] . གཅིན་སྙི་ནད་གཞི་འདི་ གཅིན་སྙི་ནད་གཞི་མེད་པའི་ ནདཔ་༡༡༦ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། བཅའ་མར་གཏོགས་མི་ཆ་མཉམ་གྱིས་ ཡིག་ཐོག་ལུ་ གནང་བ་བྱིན་ཡོདཔ་ད་ ཞིབ་འཇུག་གི་ མཐུན་གྲོས་འདི་ ཧེལ་སིན་ཀི་གསལ་བསྒྲགས་ (༥༤/༢༠༠༥ དང་ ༡༠༤/༢༠༠༨ དེ་ལས་ ༢༧/༢༠༡༠) དང་འཁྲིལ་ཏེ་ བྱང་ཕྱོགས་སཱ་ཝོ་རྫོང་ཁག་སྨན་ཁང་གི་ ཀུན་སྤྱོད་ཚོགས་ཆུང་གིས་ ཆ་འཇོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
མཆིནམ་གྱི་བརྟག་དཔྱད་དཔེ་ཚད་འདི་ གཤག་བཅོས་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ཐོབ་ཡོདཔ་ད་ ཧེ་མ་ལས་ འགྲེལ་བཤད་རྐྱབ་ཡོད་པའི་ཚད་གཞི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ ཉམས་མྱོང་ཅན་གྱི་ནད་རིགས་མཁས་པ་ཚུ་གིས་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། བརྟག་ཞིབ་ཀྱི་ཚད་གཞི་འདི་ ལྷན་ཐབས་ཐིག་ཁྲམ་S1 ནང་ལུ་ བཅུད་བསྡུས་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ ཧེ་མ་ལས་ འགྲེལ་བཤད་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན།
བཞེས་སྒོའི་ཁྲག་གི་དཔེ་ཚད་ཚུ་ དམིགས་གཏད་མེད་པའི་ ཁུ་བ་གི་ཚོས་གཞི་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ༼ཨེན་ = ༡༡༦༽ དཔེ་ཚད་ཚུ་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ UHPLC-qTOF-MS ལམ་ལུགས་ ༼༡༢༩༠ LC, ༦༥༤༠ qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Germany༽ ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། Isopropyl alcohol (IPA) གི་ངོས་འཛིན་འདི་ བཀག་འཛིན་དུས་ཚོད་དང་ MS/MS spectrum གི་གནས་ཚད་ངོ་མ་དང་གཅིག་ཁར་ ག་བསྡུར་འབད་མི་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ཨིན་མས། IPA བརྡ་རྟགས་ཀྱི་ཤུགས་ཚད་ (peak area) འདི་ དབྱེ་དཔྱད་གཞན་ཚུ་ནང་ བརྩི་འཇོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། [20]
མཆིནམ་གྱི་RNA གོ་རིམ་འདི་ Illumina HiSeq 2500 ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ད་ གནས་སྡུད་ཚུ་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ སྔོན་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ སྤྱི་ལོ་༡༩༥༧ལུ་ MitoMiner 4.0གི་གནས་སྡུད་གཞི་རྟེན་ནང་ལས་ རིགས་མཚན་གདམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ mitochondrial function/biogenesisལུ་ ཐོ་ཕོག་མི་ ཡིག་ཐོག་ལུ་ དམིགས་གཏད་ཅན་གྱི་ཁྱད་པར་ཅན་གྱི་བརྡ་སྟོན་དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡི། མཆིནམ་གྱི་DNA མི་ཐའི་ལེ་ཤཱན་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ ཐབས་ལམ་ཅོག་འཐདཔ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ Infinium HumanMethylation450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA, USA) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
མི་ཡི་མཆིནམ་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ (LX-2) འདི་ མཁས་དབང་ Stefano Romeo གིས་ བྱམས་བརྩེ་གི་ཐོག་ལས་ བྱིན་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཚུ་ DMEM/F12 བརྒྱུད་ལམ་ནང་ལུ་ གསོ་སྐྱོང་འབད་དེ་ བདག་འཛིན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། IPA གི་ལཱ་འབད་བའི་སྨན་ཚད་གདམ་ཁ་རྐྱབ་ནིའི་དོན་ལུ་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ IPA གི་ཆ་ཚད་སོ་སོ་ (10 μM, 100 μM དང་ 1 mM; Sigma, 220027) གིས་ DMEM/F12 བརྒྱུད་ལམ་ནང་ ཆུ་ཚོད་ ༢༤ གི་རིང་ལུ་ སྨན་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ IPA གིས་ HSCs ཚུ་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་བཟོ་ཚུགས་པའི་ ལྕོགས་གྲུབ་ཞིབ་དཔྱད་འབད་ནིའི་དོན་ལུ་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ 5 ng/ml TGF-β1 (R&D systems, 240-B-002/CF) དང་ 1 mM IPA དང་ཅིག་ཁར་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ སྨན་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འབྲེལ་ཡོད་སྣུམ་འཁོར་ཚད་འཛིན་གྱི་དོན་ལུ་ ༤ nM HCL ནང་ ༠.༡% BSA ཡོད་པའི་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་དང་ ༠.༠༥% DMSO འདི་ IPA སྨན་བཅོས་ཀྱི་དོན་ལུ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ད་ གཉིས་ཆ་ར་མཉམ་སྡེབ་སྨན་བཅོས་ཀྱི་དོན་ལུ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན།
བཟོ་བསྐྲུན་འབད་མི་ཚུ་གི་བཀོད་རྒྱ་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit དང་ 7-AAD (Biolegend, San Diego, CA, USA, Cat# 640922) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུ་བ་ཅིན་ LX-2 (1 × 105 cells/well) འདི་ 12-well plates ནང་ལུ་ མཚན་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ འཛུགས་སྐྱོང་འབད་ཞིནམ་ལས་ IPA ཡང་ན་ IPA དང་ TGF-β1 གི་སྨན་ཁབ་ལེ་ཤ་ཅིག་བཙུགས་ཏེ་ སྨན་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་གི་ནངས་པ་ ཆུ་ནང་ལུ་འཕྱོ་མི་དང་ འབྲེལ་འཐུད་འབད་མི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་བསྡུ་ཞིནམ་ལས་ trypsinized འབད་དེ་ PBS གི་ཐོག་ལས་ བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ Annexin V གི་ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཀག་ཞིནམ་ལས་ FITC-Annexin V དང་ 7-AAD གི་ཐོག་ལས་ སྐར་མ་༡༥ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན།
ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ Mitochondriaའདི་ MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཙོག་རླུང་བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། MTR བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ IPA དང་ TGF-β1 དང་ཅིག་ཁར་ མཐུག་ཚད་འདྲ་མཉམ་སྦེ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་ཤུལ་ལས་ སྲོག་ལྡན་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ trypsinized འབད་དེ་ PBS གི་ཐོག་ལས་ བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ སྐར་མ་༢༠ གི་རིང་ལུ་ ༣༧ °C ལུ་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ ༡༠༠ μM MTR གི་ཐོག་ལས་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་དང་ cytoplasmic མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ གདོང་ཕྱོགས་ཁ་སྟོར་(FSC)དང་ ཕྱོགས་ཁ་སྟོར་(SSC)གི་ཚད་གཞི་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ནུག
གནས་སྡུད་ཆ་མཉམ་ (བྱུང་རིམ་༣༠༠༠༠) ཚུ་ NovoCyte Quanteon (Agilent) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཐོབ་ཡོདཔ་ད་ NovoExpress® 1.4.1 ཡང་ན་ FlowJo V.10 མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
སྲོག་རླུང་སྤྱོད་ཚད་ (OCR) དང་ ཁམས་ཕྲན་གཞན་པའི་ སྐྱུར་ཆུ་གི་ཚད་གཞི་ (ECAR) ཚུ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་མི་ཚུ་གི་བཀོད་རྒྱ་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ Seahorse Extracellular Flux Analyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དུས་ཚོད་ངོ་མ་ནང་ འཇལ་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུ་བ་ཅིན་ ༢ × ༡༠༤ LX-2 ཁམས་ཕྲན་/ཆུ་རྫིང་འདི་ XF96 ཁམས་ཕྲན་ལམ་སྲོལ་གྱི་ཤོག་ལེབ་གུར་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། མཚན་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་པའི་ཤུལ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ isopropanol (IPA) དང་ TGF-β1 (ལྷན་ཐབས་ཐབས་ལམ་༡) གི་ཐོག་ལས་ སྨན་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་སྡུད་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ སི་ཧོརསི་ཨེགསི་ཨེཕ་ཝེབ་མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་དང་ འདི་ནང་ལུ་ སི་ཧོརསི་ཨེགསི་ཨེཕ་ཁམས་ཕྲན་ནུས་ཤུགས་ཕི་ནོ་ཊའིཔ་བརྟག་དཔྱད་སྙན་ཞུ་བཟོ་མི་ཡང་ཚུདཔ་ཨིན། འདི་ལས་ སྐྱེ་ལྡན་ནུས་ཤུགས་གསོ་བའི་ཟུར་ཐོ་ (BHI) རྩིས་རྐྱབ་ཡོདཔ་ཨིན། [27]
RNA ཡོངས་བསྡོམས་འདི་ cDNA ནང་ལུ་ ཡིག་བསྒྱུར་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དམིགས་བསལ་གྱི་ཐབས་ལམ་གྱི་དོན་ལུ་ རྒྱབ་རྟེན་ [15] ལུ་བལྟ། མི་གི་ 60S རི་བོ་སོ་མཱལ་ཨེ་སིཌ་ཟས་བཅུད་ P0 (RPLP0) དང་ cyclophilin A1 (PPIA) mRNA གི་གནས་ཚད་ཚུ་ རིགས་མཚན་ཚད་འཛིན་གྱི་ རྩ་དོན་ཅིག་སྦེ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཀོའན་ཊི་ཨིསི་ཊུ་གྲིའོ་༦ པྲོ་རི་ཡལ་ཊའིམ་པི་སི་ཨར་ལམ་ལུགས་ ༼ཐར་མོ་ཕི་ཤར་ ལེནཌ་སི་མིར་ ནེ་དར་ལེནཌ་༽ འདི་ ཀྲེག་མེན་ཀྲི་ཨེམ་མགྱོགས་དྲག་གོང་འཕེལ་ཅན་གྱི་སླ་བསྲེ་ཅ་ཆས་ ༼སྐྱེ་ལྡན་རིམ་ལུགས་ལག་ལེན་འཐབ་མི་༽ ཡང་ན་ སེན་སི་ཕཱསི་ཊི་ཨེས་ཝའི་བི་ཨར་ལོ་རོགསི་རིགས་མཚན་ཅ་ཆས་ ༼སྐྱེ་ལྡན་བི་ཨོ་༩༤༠༥༠༽ དང་ཅིག་ཁར་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་གཞི་ (ΔΔCt) དང་ ∆∆Ct ཐབས་ལམ། གཞི་རྟེན་གྱི་ཁ་གསལ་ཚུ་ ལྷན་ཐབས་ཐིག་ཁྲམ་ S2 དང་ S3 ནང་ལུ་བཀོད་དེ་ཡོད།
རྡུལ་ཕྲན་དྲི་ཨེན་ཨེ་ (ncDNA) དང་ mitochondrial DNA (mtDNA) ཚུ་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ DNeasy ཁྲག་དང་ ཀྲི་ཤུ་ཅ་ཆས་ (Qiagen) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། mtDNA གི་འབྲེལ་བའི་ཚད་གཞི་འདི་ དམིགས་གཏད་mtDNA ལུང་ཕྱོགས་རེ་རེ་གི་ཆ་ཚད་དང་ རྡུལ་ཕྲན་DNA ལུང་ཕྱོགས་གསུམ་གྱི་དབྱིབས་རྩིས་སྤྱིར་སྙོམས་རྩིས་རྐྱབ་སྟེ་ རྩིས་རྐྱབ་ཡོདཔ་ཨིན།
ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ MitotrackerTM Red CMXRos (MTR) ༼Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA༽ གི་ཐོག་ལས་ ཚོས་གཞི་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། LX-2 ཁམས་ཕྲན་ ༼༡ × ༡༠༤ ཁམས་ཕྲན་/ཆུ་རྫིང་༽ འདི་ ཤེལ་གྱི་འོག་ལུ་ཡོད་པའི་ ཤེལ་གྱི་ཤོག་ལེབ་གུར་ ༼Ibidi GmbH, Martinsried, Germany༽ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་ཤུལ་ལས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ དྲོད་ཚད་༣༧ °C ལུ་ སྐར་མ་༢༠ གི་རིང་ལུ་ ༡༠༠ μM MTR དང་ཅིག་ཁར་ བཙུགས་ཏེ་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ DAPI (༡ μg/ml, Sigma-Aldrich) གིས་ ཚོས་གཞི་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། Mitochondrialཡོངས་འབྲེལ་འདི་ Zeiss Axio Observer གི་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མཐོང་ཚུགས་ནུག དཔེ་ཚད་དབྱེ་བ་རེ་རེ་གི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ Z-series པར་རིས་བཅུ་ཐམ་ཐོབ་ཅི། Z-series རེ་ལུ་ དབྱེ་ཁག་ ༣༠ རེ་ཡོདཔ་ད་ དབྱེ་ཁག་རེ་རེའི་མཐུག་ཚད་ ༩.༨༦ μm ཡོད། དཔེ་ཚད་རེ་ལུ་ མཐོང་སྣང་མ་འདྲཝ་བཅུ་ཐམ་གྱི་པར་ཚུ་ ZEN 2009མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཐོབ་ཡོདཔ་ད་ (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) དེ་ལས་ mitochondrial morphologyགི་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ ImageJམཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ༠.༡ M phosphate buffer ནང་ལུ་ glutaraldehyde བརྒྱ་ཆ་༢ གི་ཐོག་ལས་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་བཟོ་ཞིནམ་ལས་ བརྒྱ་ཆ་༡ གི་ osmium tetroxide གི་ཐབས་ཤེས་ (Sigma Aldrich, MO, USA) གི་ཐོག་ལས་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་བཟོ་སྟེ་ རིམ་གྱི་སྦེ་ acetone གི་ཐོག་ལས་ ཆུ་མེདཔ་བཟོ་སྟེ་ མཐའ་མཇུག་ཁར་ epoxy resin ནང་ལུ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། མཐོ་དྲགས་ཅན་གྱི་ཆ་ཤས་ཚུ་ བཟོ་སྟེ་ བརྒྱ་ཆ་༡གི་ ཡུ་ར་ནཱལ་ཨེ་སི་ཀྲེཏ་ ༼མརཀ་ དྲརམ་སི་ཀྲེཏ་ ཇར་མ་ནི་༽ དང་ བརྒྱ་ཆ་༡གི་ ལིཌ་སི་ཀྲེཊ་ ༼མརཀ་ དྲརམ་སི་ཀྲགྲ་ ཇར་མ་ནི་༽ གི་ཐོག་ལས་ ཚོས་གཞི་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། མཐོ་རིམ་བཟོ་བཀོད་ཀྱི་པར་རིས་ཚུ་ JEM 2100F EXII བརྒྱུད་འཕྲིན་གློག་རྫས་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་ (JEOL Ltd, Tokyo, Japan) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མགྱོགས་ཚད་ཀྱི་གློག་ཤུགས་༨༠ ཀེ་ཝི་ནང་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན།
ཆུ་ཚོད་༢༤གི་རིང་ལུ་ IPAགིས་སྨན་བཅོས་འབད་མི་ LX-2ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་འདི་ Zeiss inverted light microscope (Zeiss Axio Vert.A1 དང་ AxioCam MRm, Jena, Germany) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ༥༠x ཆེར་བསྐྱེད་འབད་དེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ནུག
སྨན་བཅོས་གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± ཚད་ལྡན་ཐ་དད་ཡང་ན་ སྤྱིར་སྙོམས་ (interquartile range: IQR) སྦེ་བཀོད་ཡོདཔ་ཨིན། ཞིབ་འཇུག་སྡེ་ཚན་གསུམ་གྱི་བར་ན་ཁྱད་པར་ག་བསྡུར་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ འགྱུར་ལྡོག་གི་ཕྱོགས་གཅིག་དབྱེ་དཔྱད་(འཕྲོ་མཐུད་འགྱུར་ལྡོག་) ཡང་ན་ χ2 བརྟག་དཔྱད་(དབྱེ་ཁག་འགྱུར་ལྡོག་) ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། བརྟག་དཔྱད་ལེ་ཤ་ཅིག་གི་དོན་ལས་ བདེན་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ རྫུན་མའི་ངེས་གཏན་གྱི་གནས་ཚད་ (FDR) འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་དང་ FDR < 0.05 ཡོད་མི་རིགས་མཚན་ཚུ་ གནས་སྡུད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་སྦེ་ཆ་བཞག་ཡོདཔ་ཨིན། Spearmanགི་འབྲེལ་བ་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ CpG DNA methylationདང་ IPAབརྡ་མཚོན་གྱི་ཤུགས་ཚད་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ pགི་གནས་གོང་ཚུ་ (p < 0.05) སྙན་ཞུ་འབད་ནུག
ལམ་ལུགས་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ ཡོངས་འབྲེལ་གཞི་བཞག་སྟེ་ རིགས་མཚན་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་ལག་ཆས་(WebGestalt)ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཡིག་ཆ་༢༦༨དང་ mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཆ་༡༡༩(མིང་ཚིག་p <༠.༠༥) དེ་ལས་ ཡིག་ཆ་༤༣༥༠གི་ CpGsའདི་ ༣༠༩དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། རང་དབང་ཅན་སྦེ་ཐོབ་ཚུགས་པའི་ Venny DB ༼ཐོན་རིམ་༢.༡.༠༽ གི་ལག་ཆས་འདི་ རིགས་མཚན་ཚུ་ གཅིག་ཁར་འཛོམས་མི་འདི་འཚོལ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་དང་ StringDB ༼ཐོན་རིམ་༡༡.༥༽ འདི་ ཟས་བཅུད་དང་ཟས་བཅུད་ཀྱི་བར་ནའི་འབྲེལ་བ་འདི་ མཐོང་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན།
LX-2 བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ དཔེ་ཚད་ཚུ་ D'Agostino-Pearson བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ སྤྱིར་བཏང་གི་བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་སྡུད་ཚུ་ སྐྱེ་ལྡན་རིག་པའི་འདྲ་དཔེ་གསུམ་ལས་ཐོབ་ཡོདཔ་དང་ འདི་ཡང་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་དང་གཅིག་ཁར་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA ལུ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། p-value ༠.༠༥ ལས་ཉུངམ་འདི་ གནས་སྡུད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ གལ་གནད་ཅན་ཅིག་སྦེ་ བརྩི་ནུག། གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± SD སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་དང་ བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་གྱངས་ཁ་འདི་ པར་རིས་རེ་རེ་ནང་ བརྡ་སྟོན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དབྱེ་དཔྱད་དང་ཐིག་ཁྲམ་ཚུ་ག་ར་ ཝིན་ཌོ་གི་དོན་ལུ་ གཱརཕ་པེ་ཌི་པིརིསམ་༨ རྩིས་དཔྱད་མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
དང་པ་ར་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPA གི་གནས་ཚད་འདི་ མཆིནམ་དང་གཟུགས་ཆ་མཉམ་ དེ་ལས་ mitochondrial གི་ཡིག་ཆ་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། ཡོངས་བསྡོམས་ཡིག་ཐོག་གི་གནས་སྡུད་ནང་ལུ་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བའི་རིགས་མཚན་ཤུགས་ཆེ་ཤོས་འདི་ MAPKAPK3(FDR = 0.0077; mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3)ཨིན་མས། mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཐོག་གི་གསལ་སྡུད་ནང་ལུ་ རིགས་མཚན་ཤུགས་ཆེ་ཤོས་འདི་ AKT1 (FDR = 0.7621; AKT serine/threonine kinase 1) ཨིན་མས།
དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ འཛམ་གླིང་ཡོངས་ཀྱི་ཡིག་ཆ་(n = 268; p < 0.01) དང་ mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཆ་(n = 119; p < 0.05) དབྱེ་དཔྱད་འབད་དེ་ མཐའ་མཇུག་ཁར་ apoptosis འདི་ གལ་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་ངོས་འཛིན་འབད་ནུག(p = 0.0089) ཁྲག་ཤེད་ཀྱི་ IPA གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བའི་ mitochondrial གི་ཡིག་ཆ་ཚུ་གི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ apoptosis (FDR = 0.00001) དང་ mitophagy (FDR = 0.00029) དེ་ལས་ TNF བརྡ་མཚོན་ལམ་ལུགས་ (FDR = 0.000006) ལུ་གཙོ་བོར་བསྟེན་ཡོདཔ་ཨིན།
འཛམ་གླིང་ཡོངས་ཁྱབ་ཀྱི་དབྱེ་དཔྱད་དང་ mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཆ་ དེ་ལས་ མི་གི་མཆིནམ་ནང་ལུ་ DNA methylationཚུ་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། Aགིས་ འཛམ་གླིང་ཡོངས་ཁྱབ་ཀྱི་ཡིག་ཆ་༢༦༨དང་ mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཆ་༡༡༩ དེ་ལས་ DNA methylatedཡིག་ཆ་ཚུ་ serum IPAགི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བའི་ CpGས་ཁོངས་༣༠༩༢ལུ་ སབ་ཁྲ་བཟོ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། གཙོ་བོ་གཅིག་ལ་གཅིག་བརྟེན་གྱི་ཡིག་ཆ་ཚུ་ བར་ན་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། (AKT1 དང་ YKT6) རིགས་མཚན་༡༣གི་འབྲེལ་བ་གི་སབ་ཁྲ་འདི་ གཞན་མི་རིགས་མཚན་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ཡོད་མི་འདི་ རིགས་མཚན་༥༦ལས་ བཟོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་ལག་ཆས་ StringDBལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ལྗང་ཁུ། རིགས་མཚན་འདི་ རིགས་མཚན་གནས་ལུགས་རིག་པ་ལུ་ སབ་ཁྲ་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། (GO) ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཆ་ཤེས་ mitochondria (GO:0005739) AKT1འདི་ གནས་སྡུད་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ གཞན་མི་འཚོ་བཅུད་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་པའི་སྐབས་ལུ་ སྐུགས་མཐོ་ཤོས་(༠.༩༠༠)ཐོབ་མི་ འཚོ་བཅུད་ཅིག་ཨིན། ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མཐུད་མཚམས་ཚུ་གིས་ ཇུ་རྩི་གི་ངོ་བོ་སྟོནམ་ཨིནམ་ད་ མཐའམ་ཚུ་གིས་ ཇུ་རྩི་གི་བར་ནའི་འབྲེལ་བ་ཚུ་ ངོ་བཏོནམ་ཨིན་མས།
མཆིནམ་གྱི་ཕྲ་འབུཔ་གི་རྫས་སྦྱོར་འདི་གིས་ DNA methylationབརྒྱུད་དེ་ epigeneticགི་གྲུབ་ཆ་འདི་ ཚད་འཛིན་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་འདི་ མཆིནམ་གྱི་DNA methylationདང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྲག་ཤེད་ཀྱི་IPA གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བའི་ methylation ས་ཁོངས་གཙོ་བོ་གཉིས་ proline-serine-rich region 3 (C19orf55) དང་ ཚ་དྲོད་ཀྱི་ཟས་བཅུད་བཟའ་ཚང་ B (ཆུང་ཀུ) འཐུས་མི་ 6 (HSPB6) (ཁ་སྐོང་ཡིག་སྣོད་ 3) གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ཡི། 4350 CpG (p < 0.01) གི་ DNA methylation འདི་ serum IPA གི་གནས་ཚད་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ལས་ མི་ཚེ་རིང་བའི་ལམ་ལུགས་ནང་ལུ་ མཐོ་དྲགས་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། (p = 0.006) (པར་རིས་ ༡A དང་ ཐིག་ཁྲམ་ ༢ དེ་ལས་ ལྷན་ཐབས་པར་རིས་ ༡C)
སྐྱེ་ལྡན་རིག་པའི་ཐབས་ལམ་འདི་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPAགི་གནས་ཚད་དང་ འཛམ་གླིང་ཡོངས་ཁྱབ་ཀྱི་ཡིག་ཆ་ དེ་ལས་ mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ཡིག་ཆ་དང་ མི་གི་མཆིནམ་ནང་ལུ་ DNA methylationགི་བར་ན་ལུ་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་ཧ་གོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ཧེ་མའི་ལམ་ལུགས་དབྱེ་དཔྱད་ནང་ལུ་ ངོས་འཛིན་འབད་དེ་ཡོད་མི་རིགས་མཚན་ཚུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཏེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡི། རིགས་མཚན་༥༦ གི་ལམ་ལུགས་ཕྱུགཔོ་བཟོ་ནི་གི་གྲུབ་འབྲས་ནང་ ༼པར་རིས་༡ཀ་ནང་ ཐིག་ནགཔོ་གི་ནང་ན༽ apoptosis ལམ་ལུགས་(p = ༠.༠༠༠༢༩) གིས་ དབྱེ་དཔྱད་གསུམ་གྱི་ནང་ལུ་ སྤྱིར་བཏང་གི་རིགས་མཚན་གཉིས་ གསལ་སྟོན་འབད་ནུག ༡ཀ)། ང་བཅས་ཀྱིས་ AKT1 (cg19831386) དང་ YKT6 (cg24161647) གཉིས་ ཁྲག་རྩའི་ IPA གནས་ཚད་དང་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། རིགས་མཚན་གྱི་ཐོན་སྐྱེད་ཚུ་གི་བར་ན་ འཚོ་བཅུད་ཀྱི་འབྲེལ་བ་ངོས་འཛིན་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ རིགས་མཚན་༥༦གི་ནང་ལས་ སྤྱིར་བཏང་གི་ལུང་ཕྱོགས་སྐུགས་མཐོ་ཤོས་ཡོད་མི་ རིགས་མཚན་༡༣གདམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ འབྲེལ་བ་གི་སབ་ཁྲ་བཟོ་ཡི། བློ་གཏད་གནས་ཚད་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ (marginal confidence) AKT1 རིགས་མཚན་མཐོ་ཤོས་ (༠.༩༠༠) ཐོབ་མི་འདི་ མཐོ་ཤོས་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་༡ཁ)
ལམ་ལུགས་དབྱེ་དཔྱད་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ apoptosis འདི་ ལམ་ལུགས་གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་མཐོང་ཡོདཔ་ལས་ IPA སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ HSCs གི་ apoptosis ལུ་ གནོད་པ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། ང་བཅས་ཀྱིས་ཧེ་མ་ IPA གི་ཚད་གཞི་སོ་སོ་ (10 μM, 100 μM, དང་ 1 mM) འདི་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ལུ་ དུག་མེདཔ་སྦེ་ གསལ་སྟོན་འབད་ཡི། [15] ཞིབ་འཇུག་འདི་གིས་ 10 μM དང་ 100 μM ལུ་ IPA སྨན་བཅོས་འབད་བའི་སྐབས་ འཚོ་ཐབས་དང་ ནད་འབུབ་ཀྱི་ཁམས་ཕྲན་གྱི་གྱངས་ཁ་ཡར་སེང་འགྱོ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། ཨིན་རུང་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་འཚོ་ཐབས་འདི་ ༡ mM IPA གི་ཚད་གཞི་ནང་ མར་ཕབ་འགྱོ་ཡོདཔ་ད་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ ཤི་ཚད་འདི་ འགྱུར་བ་མེད་པར་ ལུས་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ apoptosis བསྐུལ་མ་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ཆ་ཚད་མཐོ་ཤོས་འཚོལ་ནིའི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ 10 μM དང་ 100 μM དེ་ལས་ 1 mM IPA ཚུ་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡི། མགུ་འཐོམ་དགོཔ་འདི་ IPA 10 μM དང་ 100 μM གིས་ apoptosis གི་ཚད་གཞི་(%) མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ IPA 1 mM གིས་ ཚད་འཛིན་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ late apoptosis དང་ apoptosis གི་ཚད་གཞི་(%) ཡར་སེང་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ལས་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་ནུག(པར་རིས་ ༢A–D)
IPA གིས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་གྱི་ apoptosis འབྱུང་བཅུགཔ་ཨིན། Annexin V དང་ 7-AAD གི་ཐབས་ལམ་འདི་ apoptotic གི་ཚད་གཞི་དང་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་ཚུ་ flow cytometry གི་ཐོག་ལས་ འཇལ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ནུག BA ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ ༡༠ μM དང་ ༡༠༠ μM དེ་ལས་ ༡ mM IPA དང་ ཡང་ན་ F–H TGF-β1 (༥ ng/ml) དང་ ༡ mM IPA དང་ཅིག་ཁར་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། A: སྲོག་ལྡན་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ (Annexin V -/ 7AAD-); B: ནད་འབུབ་ཁམས་ཕྲན་ (Annexin V -/ 7AAD+); C, F: སྔ་མོ་ (ཟུར་སྦྲགས་ V +/ 7AAD-); D, G: ཕྱི་རུ་ (ཟུར་སྦྲགས་ V+/7AAD.+); E, H: apoptotic ཚད་གཞི་ནང་ apoptotic ཁམས་ཕྲན་ཡོངས་བསྡོམས་ཀྱི་བརྒྱ་ཆ། (%) གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± SD, n = 3 རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་སྦེ་བཀོད་ཡོདཔ་ཨིན། རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་ག་བསྡུར་འདི་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་དང་གཅིག་ཁར་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། *p < ༠.༠༥; ****p < ༠.༠༠༠༡
ང་བཅས་ཀྱིས་ཧེ་མ་སྟོན་ཡོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ 5 ng/ml TGF-β1གིས་ སྔར་ལུགས་ཀྱི་རྟགས་མཚན་རིགས་མཚན་གྱི་བརྡ་སྟོན་ཡར་སེང་འབད་དེ་ HSCཤུགས་བཏོན་ཚུགས། LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ 5 ng/ml TGF-β1 དང་ 1 mM IPA མཉམ་སྡེབ་འབད་དེ་ སྨན་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༢E–H) TGF-β1 སྨན་བཅོས་ཀྱིས་ apoptosis གི་ཚད་གཞི་འགྱུར་བ་མ་བཏང་རུང་ IPA མཉམ་འབྲེལ་སྨན་བཅོས་ཀྱིས་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་དང་ཕྱདཔ་ད་ apoptosis དང་ apoptosis གི་ཚད་གཞི་ (%) ཡར་སེང་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། (Fig. 2E–H) འ་ནི་གྲུབ་འབྲས་ཚུ་གིས་ 1 mM IPA གིས་ TGF-β1 གི་འབྱུང་ཁུངས་ལས་ རང་དབང་ཅན་སྦེ་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ apoptosis ཡར་དྲག་གཏང་ཚུགས་པའི་ བརྡ་མཚོན་སྟོནམ་ཨིན།
ང་བཅས་ཀྱིས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལུ་ IPA གི་ནུས་པ་འདི་ ལྷག་པར་དུ་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ 1 mM IPA གིས་ སྲོག་རླུང་སྤྱོད་ཚད་(OCR) གི་ཚད་གཞི་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ནུག
IPA གིས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་མར་ཕབ་འབདཝ་ཨིན། mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་གུག་ཀྱོག་འདི་ mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཚད་གཞི་ཅིག་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབདཝ་ཨིན་མས། ཁམས་ཕྲན་A དང་B ཚུ་ 10 μM དང་ 100 μM དེ་ལས་ 1 mM IPA དང་ཅིག་ཁར་ ཆུ་ཚོད་ ༢༤ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཁམས་ཕྲན་C དང་ D གཉིས་ TGF-β1 (5 ng/ml) དང་ 1 mM IPA དང་ཅིག་ཁར་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ ཆུ་ཚོད་ ༢༤ གི་རིང་ལུ་ གོ་རིམ་བཞིན་དུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། འཇལ་ཚད་ཚུ་ག་ར་ CyQuant ཅ་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ DNA གི་ནང་དོན་ལུ་ སྤྱིར་བཏང་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། BHI: སྐྱེ་ལྡན་ནུས་ཤུགས་གསོ་བའི་ཟུར་ཐོ།; SRC: དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་གསོག་འཇོག་ནུས་ཤུགས། OCR: སྲོག་རླུང་སྤྱོད་ཚད། གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± ཚད་ལྡན་ཐ་དད་ (SD), n = 5 རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་ག་བསྡུར་འདི་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA དང་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། *p < ༠.༠༥; **p < ༠.༠༡; དང་ ***p < ༠.༠༠༡ ཡིན།
IPAགིས་ TGF-β1-activated LX-2ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྐྱེ་ལྡན་ནུས་ཤུགས་ཀྱི་གནས་སྡུད་ལུ་ ཕན་གནོད་ག་དེ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ཧ་གོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ OCRགིས་ mitochondrial oxidative phosphorylationའདི་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡི། གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ མཐོ་ཤོས་དང་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ གསོག་འཇོག་ནུས་ཤུགས་ (SRC) དེ་ལས་ BHI ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགསཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ མཉམ་སྡེབ་ཀྱི་སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ གཞི་རྟེན་དབུགས་གཏོང་ལེན་དང་ གློག་ལྡན་རྡུལ་ཕྲན་འཛག་ཐངས་ དེ་ལས་ ATP ཐོན་སྐྱེད་ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ SRC དང་ BHI འདི་ TGF-β1 གིས་སྨན་བཅོས་འབད་མི་ཚུ་དང་ཕྱདཔ་ད་ མཐོ་དྲགས་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན།
ང་བཅས་ཀྱིས་ Seahorse མཉེན་ཆས་ཀྱིས་བྱིན་མི་ “Cellular Energy Phenotype Test” ཡང་འབད་ཡི། ལྷན་ཐབས་པར་རིས་ ༣ བི་ནང་ སྟོན་དོ་བཟུམ་སྦེ་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ OCR དང་ ECAR གཉིས་ཆ་ར་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་ནུས་པ་མར་ཕབ་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ མཉམ་སྡེབ་དང་ IPA སྨན་བཅོས་སྡེ་ཚན་ནང་ ཁྱད་པར་ག་ནི་ཡང་མ་མཐོང་པས། དེ་མ་ཚད་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ མཉམ་སྡེབ་དང་ IPA སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ OCR གི་ གཞི་རྟེན་དང་ གནོན་ཤུགས་གཉིས་ཆ་ར་ མར་ཕབ་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན་པས། མགུ་འཐོམ་དགོཔ་འདི་ མཉམ་སྡེབ་སྨན་བཅོས་དང་གཅིག་ཁར་ དཔེ་རིས་ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་མཐོང་ཡོདཔ་ད་ དེ་བསྒང་ ECAR གི་གཞི་རྟེན་དང་ གནོན་ཤུགས་གནས་ཚད་ནང་ འགྱུར་བ་མེདཔ་སྦེ་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་དང་ཕྱདཔ་ད་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། HSCsནང་ལུ་ mitochondrial oxidative phosphorylationམར་ཕབ་འགྱོ་མི་དང་ TGF-β1སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ SCRདང་BHIསླར་གསོ་འབད་ཚུགས་པའི་ མཉམ་སྡེབ་སྨན་བཅོས་འབད་མི་འདི་གིས་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་འོས་འབབ་ལུ་ འགྱུར་བ་མ་འགྱོ་བས།(OCRདང་ECAR) གྲུབ་འབྲས་འདི་ཚུ་གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཏེ་ IPAགིས་ HSCsནང་ལུ་ སྐྱེ་ལྡན་ནུས་ཤུགས་མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་ལས་ IPAགིས་ HSCགི་ཕེ་ནོ་ཀྲའིཔ་འདི་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་སྦེ་འགྱོ་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
mitochondrial dynamicsལུ་ IPAགི་གནོད་པ་འདི་ mitochondrialགི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་དང་ ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མཐུད་ལམ་ དེ་ལས་ MTRགི་ཚོས་གཞི་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ནུག(པར་རིས་༤དང་ ལྷན་ཐབས་ཀྱི་པར་རིས་༥) པར་རིས་༤ པའི་ནང་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ ཁ་ཐོག་གི་རྒྱ་ཁྱོན་དང་ ཡན་ལག་གི་གྱངས་ཁ་ ཡན་ལག་གི་རིང་ཚད་ཡོངས་བསྡོམས་ དེ་ལས་ ཡན་ལག་གི་མཐུད་མཚམས་གྱངས་ཁ་ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་དེ་ སྒོར་སྒོར་ལས་ བར་མཚམས་ལུ་ mitochondria གི་ཚད་གཞི་འདི་ འགྱུར་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mitochondrialགི་འབོར་ཚད་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་མ་ཚད་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ mitochondriaགི་ཚད་གཞི་འདི་ སྒོར་སྒོ་ལས་ བར་མཚམས་ལུ་འགྱུར་བཅོས་འགྱོ་ནུག(པར་རིས་༤ཀ) འདི་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ སྒོར་སྒོར་དང་ ཡན་ལག་གི་རིང་ཚད་ དེ་ལས་ mitochondrialགི་ལས་སྣ་ཚུ་ mitochondrial membrane potential-dependent MTR(པར་རིས་༤Aདང་E)གིས་ འགྱུར་བ་མེད་པར་ལུས་ཡོདཔ་ལས་ སྡེ་ཚན་ཚུ་གི་བར་ན་ ཁྱད་པར་མ་བྱུངམ་ཨིན་མས། གྲུབ་འབྲས་འདི་ཚུ་གིས་ TGF-β1དང་IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mitochondrialགི་དབྱིབས་དང་སྦོམ་ཆུང་ དེ་ལས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མགུ་རྙོག་དྲགས་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
IPAགིས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ mitochondrialགི་འཕེལ་འགྱུར་དང་ mitochondrialགི་DNAམང་སུ་སྦེ་ཡོད་མི་འདི་ བསྒྱུར་བཅོས་འབདཝ་ཨིན་མས། ཀ༽ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ལུ་ TGF-β1 (5 ng/ml) དང་ 1 mM IPA གཉིས་དང་གཅིག་ཁར་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཏེ་ཡོད་མི་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་གྱི་ངོ་ཚབ་ཀྱི་ པར་རིས་ཚུ་ MitotrackerTM Red CMXRos དང་ DAPI དང་ཅིག་ཁར་ རྡུལ་ཕྲན་ཚུ་ ཧོནམ་སྦེ་བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། གནད་སྡུད་ཆ་མཉམ་ནང་ སྡེ་ཚན་རེ་ལུ་ ཉུང་མཐའ་ པར་རིས་༡༥ ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་དཔེ་ཚད་དབྱེ་བ་རེ་རེ་གི་དོན་ལུ་ Z-stack པར་རིས་༡༠ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། Z-axis རིམ་པ་རེ་ལུ་ ཆ་ཤས་ ༣༠ རེ་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཚུ་གི་མཐུག་ཚད་ ༩.༨༦ μm རེ་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་: 10 μm. ཁ༽ ངོ་ཚབ་དངོས་པོ་ (mitochondria only) པར་རིས་ལུ་ མཐུན་སྒྲིག་ཚད་གཞི་བཀོལ་སྤྱོད་འབད་དེ་ངོས་འཛིན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། སྡེ་ཚན་རེ་རེ་ནང་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་ཆ་མཉམ་གྱི་དོན་ལུ་ འབོར་ཚད་དབྱེ་དཔྱད་དང་ mitochondrial morphological networkགི་མཐུན་འབྲེལ་ཚུ་ ག་བསྡུར་འབད་ནུག C. mitochondrial དབྱིབས་ཀྱི་ཆ་ཚད་ཀྱི་བསྐྱར་འབྱུང་། ༠ གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་པའི་གནས་གོང་ཚུ་གིས་ སྒོར་སྒོར་གྱི་དབྱིབས་ཚུ་སྟོནམ་ཨིནམ་དང་ ༡ གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་པའི་གནས་གོང་ཚུ་གིས་ ཕི་ལ་མེནཊ་དབྱིབས་ཚུ་སྟོནམ་ཨིན། D Mitochondrial DNA (mtDNA) གི་ནང་དོན་འདི་ དངོས་པོ་དང་ཐབས་ལམ་ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ གཏན་འབེབས་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། E MitotrackerTM Red CMXRos དབྱེ་དཔྱད་འདི་ རྒྱུ་ཆ་དང་ཐབས་ལམ་ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ ཕོལོ་སའི་ཊོ་མི་ཊི་རི་ (བྱུང་རིམ་༣༠༠༠༠) གི་ཐོག་ལས་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± SD, n = 3 རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་ག་བསྡུར་འདི་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA དང་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། *p < ༠.༠༥; **p < ༠.༠༡; ***p < ༠.༠༠༡; ****p < ༠.༠༠༠༡
དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ mtDNA གི་ནང་དོན་འདི་ mitochondrial གྱངས་ཁ་གི་བརྡ་མཚོན་ཅིག་སྦེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡི། ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ mtDNA གི་ནང་དོན་འདི་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འབད་མི་སྡེ་ཚན་ནང་ ཡར་སེང་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན།(པར་རིས་ ༤D) TGF-β1-treated group དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ mtDNA གི་ནང་དོན་འདི་ མཉམ་སྡེབ་སྨན་བཅོས་འབད་མི་སྡེ་ཚན་ནང་ལུ་ མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ལས་ IPA གིས་ mtDNA གི་ནང་དོན་དང་ mitochondrial གི་གྱངས་ཁ་ དེ་ལས་ mitochondrial གི་དབུགས་གཏོང་ལེན་ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། འདི་མ་ཚད་ IPAགིས་ མཉམ་སྡེབ་ཀྱི་སྨན་བཅོས་ནང་ལུ་ mtDNAགི་ནང་དོན་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ MTR-mediated mitochondrialགི་ལས་སྣ་ལུ་ ཐོ་མ་ཕོགཔ་ཨིན་མས།
ང་བཅས་ཀྱིས་ IPAགི་འབྲེལ་བ་འདི་ mRNAགི་གནས་ཚད་དང་གཅིག་ཁར་ fibrosisདང་apoptosis དེ་ལས་ མི་ཚེ་གནས་ཐབས་དང་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ mitochondrialགི་འཕེལ་འགྱུར་ཚུ་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི།(པར་རིས་༥Aལས་D) ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འབད་མི་སྡེ་ཚན་གྱིས་ རིགས་མཚན་གྱི་བརྡ་སྟོན་ཡར་སེང་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ དེ་ཡང་ ཀོ་ལ་ཇེན་དབྱེ་བ་ I α2 རིམ་སྒྲིག་ (COL1A2) དང་ α-smooth muscle actin (αSMA) དེ་ལས་ matrix metalloproteinase 2 (MMP2) དང་ tissue inhibiting of metalloproteinase (dy-RP1) ཕིབ་རོ་སི་དང་ ཤུགས་སྣོན་ཡར་སེང་། དེ་མ་ཚད་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mRNA གི་གནས་ཚད་འདི་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ རྡུལ་ཕྲན་ཕྲ་འབུཔ་གི་ mRNA གི་གནས་ཚད་འདི་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་མས། β (IKBKB) (པར་རིས་ ༥A–D) ཡིན། TGF-β1 སྨན་བཅོས་དང་ག་བསྡུར་འབད་བ་ཅིན་ TGF-β1 དང་ IPA མཉམ་སྡེབ་ཀྱི་སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ COL1A2 དང་ MMP2 གི་བརྡ་སྟོན་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ PXR, TIMP1, B-cell lymphoma-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκβB,IK-1- གི་ mRNA གནས་ཚད་ཡར་སེང་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ MMP2དང་Bcl-2དང་འབྲེལ་བའི་ཟས་བཅུད་X(BAX) དེ་ལས་ AKT1དང་ optic atrophyཟས་བཅུད་༡(OPA1) དེ་ལས་ mitochondrial fusionཟས་བཅུད་༢(MFN2)ཚུ་ མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ CASP8དང་NFκB1A དེ་ལས་ NFκB1Bདང་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ ཡར་སེང་འགྱོ་ནུག ཨིན་རུང་ caspase-3དང་ apoptotic peptidase activating factor 1 དེ་ལས་ mitochondrial fusion protein 1 དང་ fission protein 1 ཚུ་གི་ནང་ལུ་ ཁྱད་པར་ག་ནི་ཡང་མ་མཐོང་པས། མཉམ་སྡེབ་འབད་བ་ཅིན་ གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ IPAསྨན་བཅོས་འདི་གིས་ fibrosisདང་apoptosis དེ་ལས་ མི་ཚེ་གནས་ཐབས་དང་ mitochondrial dynamicsདང་འབྲེལ་བའི་རིགས་མཚན་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབདཝ་ཨིནམ་སྦེ་བཀོད་ནུག ང་བཅས་ཀྱི་གནས་སྡུད་ཚུ་གིས་ IPA སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ fibrosis མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་པའི་བསམ་འཆར་བཀོདཔ་ཨིན། དེ་དང་གཅིག་ཁར་ འདི་གིས་ ཕི་ནོ་ཀྲའིཔ་འདི་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་པའི་ཕྱོགས་ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་དེ་ མི་ཚེ་གནས་ནི་ལུ་ སེམས་ཤུགས་བྱིནམ་ཨིན་མས།
IPAགིས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ fibroblastདང་apoptotic དེ་ལས་ viabilityདང་ mitochondrialགི་རིགས་མཚན་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབདཝ་ཨིན་མས། LX-2ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ TGF-β1དང་ IPAགིས་ ཆུ་ཚོད་༢༤གི་རིང་ལུ་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ལུ་ བཙུགས་པའི་ཤུལ་ལས་ Histogramsགིས་ mRNAགི་རྣམ་པ་སྟོནམ་ཨིན་མས། Aགིས་ fibroblastsདང་ Bགིས་ apoptoticཁམས་ཕྲན་ཚུ་སྟོནམ་ཨིནམ་མ་ཚད་ Cགིས་ ཁམས་ཕྲན་མ་ཤི་བར་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན་མས། གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± ཚད་ལྡན་ཐ་དད་ (SD), n = 3 རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་ག་བསྡུར་འདི་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA དང་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། *p < ༠.༠༥; **p < ༠.༠༡; ***p < ༠.༠༠༡; ****p < ༠.༠༠༠༡
དེ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་གི་འགྱུར་བ་(FSC-H)དང་ cytoplasmic complexity(SSC-H)ཚུ་ flow cytometry(Figure 6A,B) གིས་ དབྱེ་ཞིབ་འབད་ཡོདཔ་ད་ IPA སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་གྱི་འགྱུར་བ་ཚུ་ transmission electron microscopy (TEM) དང་ phase contrast microscopy (Supplementary Figure-B) གིས་ དབྱེ་ཞིབ་འབད་ནུག རེ་བ་བསྐྱེད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ TGF-β1-treated སྡེ་ཚན་གྱི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ ཡར་སེང་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ endoplasmic reticulum (ER*) དང་ phagolysosomes (P) གི་སྔར་སྲོལ་རྒྱ་སྐྱེད་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་འབདཝ་ད་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་འབད་མི་སྡེ་ཚན་དང་ག་བསྡུར་འབད་བ་ཅིན་ TGF-β1 དང་ IPA མཉམ་སྡེབ་སྨན་བཅོས་འབད་མི་སྡེ་ཚན་ནང་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཚད་གཞི་དང་ cytoplasmic complexity (པར་རིས་ ༦A,B) དེ་ལས་ ER* གི་ནང་དོན་ཚུ་ མར་ཕབ་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ IPA སྨན་བཅོས་ཀྱིས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཚད་གཞི་དང་ cytoplasmic complexity (Figs. 6A,B) P དང་ ER* ནང་དོན་ (Supplementary Fig. 6A) ཚུ་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ ཚད་འཛིན་སྡེ་ཚན་དང་ཕྱདཔ་ད་ IPA སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་ཤུལ་ལས་ apoptotic ཁམས་ཕྲན་གྱི་ནང་དོན་ཡར་སེང་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ 1mM IPAགིས་ HSC apoptosisལུ་ སེམས་ཤུགས་བྱིན་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་མ་ཚད་ TGF-β1གིས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་དང་མགུ་རྙོག་དྲགས་ཚུ་ ཚད་འཛིན་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས།
IPAགིས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་དང་ cytoplasmicགི་མགུ་རྙོག་དྲགས་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབདཝ་ཨིན་མས། ཕོལོ་སའི་ཊོ་མི་ཊི་རི་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་ངོ་ཚབ་པར་རིས། དབྱེ་དཔྱད་ནང་ལུ་ LX-2ཁམས་ཕྲན་གྱི་དོན་ལུ་ དམིགས་བསལ་གྱི་ཐབས་ཤེས་ཅིག་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་མི་རློབས་ངེས་ཚིག་བརྗོད་ནི་གི་དོན་ལུ་ SSC-A/FSC-Aདང་ གཉིས་ལྡན་ངོས་འཛིན་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ FSC-H/FSC-A དེ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་དང་ མགུ་རྙོག་དྲགས་དབྱེ་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ SSC-H/FSC-Hཚུ་ཨིན་མས། ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ TGF-β1 (5 ng/ml) དང་ 1 mM IPA དང་ཅིག་ཁར་ ཁྲག་མེད་པའི་བརྒྱུད་ལམ་ནང་ ཆུ་ཚོད་༢༤ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། LX-2 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་དང་ cytoplasmic complex གི་དོན་ལུ་ གཡོན་ཁ་ཐུག་གི་ དམའ་ཤོས་ (SSC-H-/FSC-H-) དང་ གཡོན་ཁ་ཐུག་གི་ ཁ་སྟོད་ (SSC-H+/FSC-H-) གཡས་ཁ་ཐུག་གི་ ཁ་སྟོད་ (SSC-H-/FSC-H+) དེ་ལས་ གཡས་ཁ་ཐུག་གི་ ཁ་སྟོད་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་འདི་ FSC-H(གདོང་ཁར་ཁ་སྟོར་འགྱོ་མི་དང་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྦོམ་ཆུང་) དེ་ལས་ SSC-H(ཕྱོགས་ཁ་སྟོར་འགྱོ་མི་དང་ cytoplasmic complexity)(བྱུང་རིམ་༣༠༠༠༠)ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ flow cytometryགིས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ནུག གནས་སྡུད་ཚུ་ སྤྱིར་སྙོམས་ ± SD, n = 3 རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་ག་བསྡུར་འདི་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་ ANOVA དང་ Bonferroni post hoc བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། *p < ༠.༠༥; **p < ༠.༠༡; ***p < ༠.༠༠༡ དང་ ****p < ༠.༠༠༠༡ ཡིན།
ཕོཝ་གི་ནང་ལུ་ རྫས་སྦྱོར་གྱི་རྫས་སྦྱོར་ཚུ་ ཞིབ་འཚོལ་གྱི་དོན་ཚན་ཅིག་ལུ་འགྱུར་ཡོདཔ་ལས་ ཕོཝ་གི་ཕྲ་འབུཔ་ནང་ལུ་ དམིགས་གཏད་གསརཔ་ཚུ་ འཚོལ་ཐོབ་འོང་ཟེར་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ མི་གི་མཆིནམ་ནང་ལུ་ ཕིབ་རོ་སིསི་ཡོད་མི་དང་འབྲེལ་བ་ཡོད་མི་ IPAའདི་ སེམས་ཅན་གྱི་དཔེ་ཚད་ནང་ལུ་ ཕིབ་རོ་ཊིག་ལུ་འགོག་པའི་ནུས་པ་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ནུག འདི་ནང་ལུ་ གུ་རམ་ནད་གཞི་མེད་མི་ཚུ་ལུ་ ཁྲག་ཤེད་ཀྱི་IPAདང་ འཛམ་གླིང་མཆིནམ་གྱི་ནད་གཞི་ དེ་ལས་ DNA methylationགི་བར་ནའི་འབྲེལ་བ་འདི་ འགོ་དང་པ་རང་ གསལ་སྟོན་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། ཞིབ་འཇུག་གི་ནང་ལུ་ གཞན་མི་གནད་དོན་གསརཔ་ཅིག་འདི་ IPAསྨན་བཅོས་འདི་ apoptosisདང་ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་ དེ་ལས་ mitochondrial bioenergeticsདང་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
ང་བཅས་ཀྱིས་ apoptosisདང་mitophagy དེ་ལས་ མི་ཚེ་རིངམོ་འདི་ མཆིནམ་གྱི་རིགས་མཚན་ནང་ལུ་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་མཐོང་ནུག mitochondrialགི་སྤུས་ཚད་ཚད་འཛིན་ལམ་ལུགས་ལུ་བར་ཆད་བྱུང་མི་འདི་གིས་ mitochondrialགི་ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་མི་དང་ mitophagy དེ་ལས་ apoptosisཚུ་ འབྱུང་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ལས་ MASLDཐོན་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ IPAའདི་ apoptosisདང་mitophagy དེ་ལས་ མཆིནམ་ནང་ལུ་ མི་ཚེ་ཡུན་རིངམོ་སྦེ་བཞག་ནི་ནང་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོདཔ་སྦེ་ ཚོད་དཔག་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱི་གནས་སྡུད་ཚུ་གིས་ རིགས་མཚན་གཉིས་ YKT6 དང་ AKT1 བརྟག་དཔྱད་གསུམ་གྱི་ནང་ལུ་ ཡོངས་གྲགས་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། YKT6 འདི་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་གདོང་ཕྱོགས་བསྲེ་སྦྱོར་གྱི་བྱ་རིམ་ནང་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོད་པའི་ SNARE ཟས་བཅུད་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ དྲན་དགོཔ་འདི་ གལ་ཆེ། འདི་གིས་ autophagosomeདང་ mitophagyནང་ལུ་ STX17དང་SNAP29གི་མགུ་རྙོག་དྲགས་བཟོ་སྟེ་ autophagosomeདང་lysosomesགཅིག་ཁར་བསྡོམས་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་མ་ཚད་ YKT6གི་ལཱ་འགན་མེད་མི་འདི་གིས་ mitophagyལུ་ གནོད་སྐྱོན་བྱུང་དོ་ཡོདཔ་ད་ YKT6གི་ཚད་འཛིན་འདི་ hepatocellular carcinoma(HCC)གི་འཕེལ་འགྱུར་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་གནས་སྟངས་ཡར་སེང་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ AKT1འདི་ རིགས་མཚན་ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིནམ་མ་ཚད་ PI3K/AKTགི་བརྡ་མཚོན་དང་ཁམས་ཕྲན་གྱི་འཁོར་རིམ་ དེ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གནས་སྤོ་འགྱོ་ནི་ དེ་ལས་ mitochondrialགི་ལཱ་འགན་དང་ collagen secretionཚུ་རྩིས་ཏེ་ མཆིནམ་ནད་གཞི་ནང་ལུ་ ཁག་ཆེ་བའི་འགན་ཁུར་འབག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། PI3K/AKTགི་བརྡ་མཚོན་འདི་གིས་ ཁམས་ཕྲན་གཞན་མི་ཚུ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ནི་གི་འགན་ཁུར་འབག་མི་ hematopoietic stem cells(HSCs)ཚུ་ ལཱ་འབད་བཅུགཔ་ཨིན་མས། འདི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ AKTའདི་ p53ལུ་བརྟེན་པའི་ཁམས་ཕྲན་ apoptosisབཀག་ཐབས་འབད་མི་ ཁམས་ཕྲན་གནས་ཐབས་ལུ་ གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིནམ་མ་ཚད་ AKTའདི་ མཆིནམ་ཁམས་ཕྲན་ apoptosisབཀག་ཐབས་འབད་མི་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། གྲུབ་འབྲས་ཐོན་མི་དང་འཁྲིལ་བ་ཅིན་ IPAའདི་ མཆིནམ་གྱི་mitochondriaདང་འབྲེལ་བའི་ apoptosisནང་ལུ་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། འ་ནི་གནོད་པ་འདི་ AKTདང་/ཡང་ན་ YKT6གི་རིགས་མཚན་གྱིས་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ མཆིནམ་གྱི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིན་མས།
ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་ཀྱིས་ 1 mM IPA གིས་ apoptosis བསྐུལ་མ་འབད་དེ་ TGF-β1 སྨན་བཅོས་ལས་རང་དབང་ཅན་གྱི་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་ནང་ mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། Apoptosisའདི་ fibrosisགི་ཐབས་ཤེས་དང་ hematopoietic stem cell(HSC)གི་ལཱ་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལམ་ལུགས་གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིནམ་མ་ཚད་ མཆིནམ་གྱི་ fibrosisགི་ལན་ལུ་ཡང་ གལ་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིན་མས། འདི་མ་ཚད་ སྨན་བཅོས་མཉམ་སྡེབ་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ BHIཉམས་གསོ་འབད་མི་འདི་གིས་ mitochondrial bioenergeticsགི་ལམ་ལུགས་ནང་ལུ་ IPAགི་འགན་ཁུར་གྱི་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་གསརཔ་བྱིན་ནུག ངལ་གསོ་དང་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་པའི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ ཁྲག་བཟོ་ཁམས་ཕྲན་གྱིས་ ATPབཟོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ mitochondrial oxidative phosphorylationལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཅུད་བསྒྱུར་གྱི་ལཱ་ཡང་ ཉུང་སུ་སྦེ་འབདཝ་ཨིན་མས། ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ HSCགིས་ mitochondrialགི་དབུགས་གཏོང་ལེན་དང་ སྐྱེ་ལྡན་སྦྱོར་རྫས་ཚུ་ ཡར་དྲག་བཏང་སྟེ་ glycolyticགི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་འཛུལ་བའི་སྐབས་ལུ་ ནུས་ཤུགས་དགོ་མི་འདི་ ཁ་གསབ་འབདཝ་ཨིན་མས། IPAགིས་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་འོས་འབབ་ལུ་ ཐོ་མ་ཕོགཔ་ལས་ ECARགིས་ glycolyticགི་ལམ་ལུགས་འདི་ གཙོ་རིམ་ཉུང་སུ་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་བཟུམ་སྦེ་ ཞིབ་འཇུག་གཞན་ཅིག་གིས་ ༡ mM IPA གིས་ cardiomyocytes དང་ མི་ཡི་ hepatocyte cell line (Huh7) དེ་ལས་ མི་གི་ མཆིན་པའི་རྩ་ཁམས་ endothelial cells (HUVEC) ཚུ་ནང་ mitochondrial respiratory chain གི་ལས་སྣ་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ཚུགསཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། ཨིན་རུང་ IPAགིས་ cardiomyocytesནང་ལུ་ glycolysisལུ་ གནོད་པ་མེདཔ་ལས་ IPAགིས་ གཞན་མི་ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྐྱེ་ལྡན་ནུས་ཤུགས་ལུ་ གནོད་པ་བརྐྱབ་འོང་ཟེར་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ 1mM IPAགིས་ mtDNAགི་འབོར་ཚད་བསྒྱུར་བཅོས་མ་འབད་བར་ fibrogenicརིགས་མཚན་དང་ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྲོག་ལྡན་རིག་པ་ དེ་ལས་ mitochondrial bioenergeticsཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། Mitochondrial uncouplersགིས་ ལམ་སྲོལ་ལས་བརྟེན་ཏེ་ fibrosisདང་HSCགི་ཤུགས་བཏོན་ནི་འདི་ བཀག་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་མ་ཚད་ mitochondrial ATPབཟོ་བསྐྲུན་འདི་ཡང་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། ཁམས་ཕྲན་གྱི་དབྱེ་བ་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ འདི་གིས་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ apoptosisལས་སྲུང་སྐྱོབ་འབད་ཚུགས་ནི་དང་ ཡང་ན་ apoptosisལུ་ ཡར་དྲག་བཏང་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ ཁྲག་འབབ་ཀྱི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ལཱ་འབད་མ་བཏུབ་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ IPAགི་འགན་ཁུར་འདི་ གསལ་ཏོག་ཏོ་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ཞིབ་འཇུག་འབད་དགོཔ་འདུག
དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ mitochondrial དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་འགྱུར་བ་འདི་ LX-2ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ mitochondrial morphologyནང་ལུ་ མཐོང་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། TGF-β1སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mitochondrialགི་ཆ་ཚད་འདི་ སྒོར་སྒོ་ལས་བར་མ་ཚུན་ཚོད་ བསྒྱུར་བཅོས་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ mitochondrialགི་ཡན་ལག་མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ DRP1གི་རྣམ་པ་ཡར་སེང་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་མ་ཚད་ mitochondrialགི་ཆ་ཤེས་འདི་ སྤྱིར་བཏང་ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མགུ་རྙོག་དྲགས་དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ད་ མཉམ་སྦྱོར་ལས་ ཁ་ཕྱེ་འགྱོ་མི་འདི་ hematopoietic stem cell(HSC)ལུ་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིན་རུང་ mitochondrialགི་ཆ་ཤེས་འདི་ བཀག་ཆ་འབད་མི་འདི་གིས་ HSC apoptosisལུ་འགྱུར་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ TGF-β1སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mitochondrialཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མགུ་རྙོག་དྲགས་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ད་རུང་ ང་བཅས་ཀྱི་གནས་སྡུད་ཚུ་གིས་ IPAགིས་ mitochondriaགི་ཚད་གཞི་འདི་ སྒོར་སྒོར་ལས་ བར་མཚམས་ལུ་འགྱུར་བཅོས་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ལས་ OPA1དང་MFN2གི་བརྡ་སྟོན་འདི་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཞིབ་འཇུག་གིས་ OPA1མར་ཕབ་འབད་མི་འདི་གིས་ mitochondrial membraneགི་འོས་འབབ་མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ apoptosisཡང་ འབྱུང་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། MFN2འདི་ mitochondrialདང་ apoptosisགི་བར་ན་ བར་འཛུལ་འབདཝ་ཨིན་མས། གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ LX-2ཁམས་ཕྲན་འདི་ TGF-β1དང་/ཡང་ན་ IPAགིས་ mitochondrialགི་དབྱིབས་དང་སྦོམ་ཆུང་ དེ་ལས་ ཤུགས་བཏོན་ནི་གི་གནས་སྟངས་དང་ ཡོངས་འབྲེལ་གྱི་མགུ་རྙོག་དྲགས་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།
ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ TGFβ-1དང་IPAམཉམ་སྡེབ་ཀྱི་སྨན་བཅོས་འདི་གིས་ mtDNAདང་ཁམས་ཕྲན་གྱི་རིགས་མཚན་ཚུ་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། IPAགིས་ AKT1དང་ COL1A2དང་MMP2བཟུམ་གྱི་ mRNAགི་གནས་ཚད་མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ apoptosisདང་འབྲེལ་བ་ཡོད་མི་ CASP8གི་གནས་ཚད་འདི་ ཡར་སེང་འགྱོ་ནུག ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་ཚུ་གིས་ IPA སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ BAX གི་བརྡ་སྟོན་འདི་ མར་ཕབ་འགྱོ་སྟེ་ TIMP1 བཟའ་ཚང་གི་ mRNA གི་བརྡ་སྟོན་འདི་ BCL-2 དང་ NF-κB ཡར་སེང་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ལས་ IPA གིས་ apoptosis ལས་ བཀག་ཐབས་འབད་མི་ hematopoietic stem cells (HSCs) ནང་ལུ་ མི་ཚེ་གནས་ཐབས་ལུ་ སེམས་ཤུགས་བྱིན་ཚུགས་ཟེར་ཨིན་མས། འ་ནི་རྡུལ་རྟེན་འདི་གིས་ ཁྲག་བཏོན་མི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ མི་ཚེ་གནས་ཚུགས་པའི་བརྡ་མཚོན་ཅིག་སྦེ་ལཱ་འབདཝ་ཨིནམ་ད་ འདི་ཡང་ anti-apoptoticཟས་བཅུད་ཡར་སེང་འགྱོ་མི་དང་ pro-apoptotic BAXམར་ཕབ་འགྱོ་མི་ དེ་ལས་ TIMPདང་NF-κBགི་བར་ན་ལུ་ མགུ་རྙོག་དྲགས་སྦེ་ཡོད་མི་ཚུ་ཨིན་མས། IPAགིས་ PXRབརྒྱུད་དེ་ ནུས་པ་བཏོན་དོ་ཡོདཔ་ད་ ང་བཅས་ཀྱིས་ TGF-β1དང་ IPAདང་གཅིག་ཁར་ སྨན་བཅོས་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ PXR mRNAགི་གནས་ཚད་ཡར་སེང་འགྱོ་སྟེ་ཡོདཔ་ལས་ HSCགི་ཤུགས་བཏོན་མི་འདི་ མར་ཕབ་འབད་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཤུགས་ལྡན་བཟོ་མི་ PXRབརྡ་མཚོན་འདི་གིས་ HSCཤུགས་ལྡན་བཟོ་ནི་འདི་ vivoདང་ vitroགཉིས་ཆ་རའི་ནང་ལུ་ བཀག་ཆ་འབདཝ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ IPAགིས་ apoptosisདང་ fibrosis དེ་ལས་ mitochondrial metabolismམར་ཕབ་འབད་དེ་ མི་ཚེ་གནས་ཐབས་ལུ་ བཅའ་མར་གཏོགས་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། Apoptosisནང་ལུ་ IPAགི་ཐབས་ལམ་དང་འགན་ཁུར་གྱི་སྐོར་ལས་ གཞན་མི་འགྲེལ་བཤད་འདི་ mitophagyདང་ extrinsic TNFགི་བརྡ་མཚོན་བརྒྱུད་དེ་ ལཱ་འབད་མ་ཚུགས་མི་ mitochondriaའདི་ བཏོན་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། མགུ་འཐོམ་དགོཔ་འདི་ IPAདང་འབྲེལ་བའི་རིགས་མཚན་ཚུ་གིས་ apoptoticགི་ལམ་ལུགས་ནང་ལུ་ pro-apoptoticདང་ pro-survivalགི་བརྡ་མཚོན་ཚུ་ བཏོན་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ལས་ IPAགིས་ འ་ནི་རིགས་མཚན་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ apoptoticགི་ལམ་ལུགས་དང་ ཡང་ན་ མི་ཚེ་གནས་ཐབས་ལུ་ བརྡ་མཚོན་ཚུ་བཏོན་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ IPAགིས་ HSCལཱ་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ apoptosisདང་ ཡང་ན་ མི་ཚེ་གནས་ཚུགསཔ་ཨིན་ན་དང་ འདི་གི་ཐབས་ལམ་ཚུ་ གསལ་ཏོག་ཏོ་ཅིག་མེདཔ་ཨིན་མས།
IPAའདི་ ཕྲ་འབུཔ་གི་རྫས་སྦྱོར་ཅིག་ཨིན་མས། ཞིབ་འཇུག་གིས་ ཕོཝ་གི་མཐའ་འཁོར་ནང་ དྲག་ཤུགས་དང་ བཙོག་པ་ དེ་ལས་ རིགས་མཚན་གྱི་ ཚད་འཛིན་གྱི་ ཁྱད་ཆོས་ཚུ་ ཡོདཔ་སྦེ་ གསལ་སྟོན་འབད་ནུག།[55] ཞིབ་འཇུག་གིས་ IPAགིས་ ཕོཝ་གི་བར་ཆད་ཀྱི་ལཱ་འགན་འདི་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་མ་ཚད་ བཙོག་རླུང་གི་གནོན་ཤུགས་འདི་ཡང་ མར་ཕབ་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། IPAའདི་ ཁྲག་རྒྱུན་བརྒྱུད་དེ་ དམིགས་གཏད་ཅན་གྱི་གཟུགས་ཀྱི་ཡན་ལག་ཚུ་ནང་ལུ་ སྐྱེལ་འདྲེན་འབདཝ་ཨིནམ་ད་ IPAགིས་ tryptophanདང་serotonin དེ་ལས་ indoleགི་རིགས་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་ལཱ་འབདཝ་ལས་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་ལཱ་ཚུ་ དོ་འགྲན་འབདཝ་ཨིན་མས།[52] IPAགིས་ tryptophanལས་ཐོན་མི་ བཅུད་གྱུར་གྱི་རྫས་སྦྱོར་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ དོ་འགྲན་འབད་དེ་ བཞུ་ཁུ་གི་ལམ་ལུགས་ལུ་ ཐོ་ཕོག་འོང་། འདི་གིས་ སྨན་བཅོས་ཀྱི་སྒོ་སྒྲིག་འདི་ ལེགས་ཤོམ་སྦེ་ཧ་གོ་ནི་གི་དོན་ལས་ སྨན་རིགས་ཀྱི་འགུལ་སྐྱོད་དང་ སྨན་རིགས་ཀྱི་གཡོ་འགུལ་རིག་པ་ཚུ་གི་སྐོར་ལས་ ཞིབ་འཇུག་འབད་དགོཔ་སྦེ་ གསལ་བཀོད་འབདཝ་ཨིན།[57] འདི་ཡང་ ཁྲག་འབབ་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ཡང་ འབྱུང་འོང་ག་ཟེར་ བལྟ་དགོཔ་ཨིན་མས།
ང་བཅས་ཀྱིས་ ང་བཅས་ཀྱི་ཞིབ་འཇུག་འདི་ལུ་ ཚད་གཞི་ལ་ལུ་ཅིག་ཡོདཔ་སྦེ་ངོས་ལེན་འབདཝ་ཨིན། དམིགས་བསལ་གྱིས་ IPA དང་འབྲེལ་བའི་མཐུན་འབྲེལ་ཚུ་བརྟག་དཔྱད་འབད་ནིའི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ གུ་རམ་ནད་གཞི་ དབྱེ་བ་༢ པ་ (T2DM) ཡོད་མི་ ནདཔ་ཚུ་ ཕྱིར་བཏོན་འབད་ཡི། ང་བཅས་ཀྱིས་ འདི་གིས་ ང་བཅས་ཀྱི་ཞིབ་འཇུག་འདི་ གུ་རམ་ནད་གཞི་ དབྱེ་བ་༢པ་དང་ མཆིནམ་ནད་གཞི་གོང་འཕེལ་འགྱོ་མི་ ནདཔ་ཚུ་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཚུགས་པའི་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིནམ་སྦེ་ ངོས་ལེན་འབདཝ་ཨིན། མི་ཡི་ཁྲག་ནང་ལུ་ IPA གི་གཟུགས་ཁམས་རིག་པའི་ཆ་ཚད་འདི་ 1–10 μM [11, 20] ཨིན་རུང་ 1 mM IPA གི་ཆ་ཚད་འདི་ དུག་མེད་པའི་ཆ་ཚད་མཐོ་ཤོས་དང་ apoptosis གི་ཚད་གཞི་མཐོ་ཤོས་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཞིབ་འཇུག་འདི་ནང་ལུ་ IPA གི་ supraphysiological གནས་ཚད་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ ད་ལྟོ་ IPA གི་ཕན་ནུས་ཅན་གྱི་ཚད་གཞི་གི་སྐོར་ལས་ མོས་མཐུན་མེདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་ཚུ་ གལ་ཅན་ཅིག་ཨིན་རུང་ IPA གི་ བཅུད་འགྱུར་གྱི་ གནས་སྟངས་རྒྱ་ཆེཝ་སྦེ་ཡོད་མི་འདི་ ཞིབ་འཚོལ་གྱི་ ས་སྒོ་ཅིག་སྦེ་ར་ ལུས་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྲག་ནང་ལུ་ IPA གི་གནས་ཚད་དང་ མཆིནམ་གྱི་ DNA methylation གི་བར་ནའི་འབྲེལ་བ་གི་སྐོར་ལས་ ཤེས་རྟོགས་བྱུང་མི་འདི་ hematopoietic stem cells (HSCs) ལས་རྐྱངམ་ཅིག་མེན་པར་ མཆིནམ་གྱི་རྩ་ཕྲན་ལས་ཡང་ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ མི་གི་ LX-2 ཁམས་ཕྲན་འདི་ ཧེ་མ་ལས་ ཤེས་རྟོགས་བྱུང་མི་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ ལག་ལེན་འཐབ་ནི་གི་དོན་ལུ་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ IPA འདི་ hematopoietic stem cell (HSC) དང་འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། མཆིནམ་འདི་ ཁམས་ཕྲན་མ་འདྲཝ་ལེ་ཤ་ཡོདཔ་ལས་ གཞན་མི་ཁམས་ཕྲན་གྱི་དཔེ་ཚད་ hepatocyte-HSC-immune cell co-culture system དང་ caspase activation དེ་ལས་ DNA གི་ཆ་ཤས་ཚུ་ མཉམ་སྡེབ་འབད་དེ་ ཇུ་རྩི་གི་གནས་ཚད་རྩིས་ཏེ་ བྱ་སྤྱོད་ཀྱི་ཐབས་ལམ་ཚུ་ བརྩི་འཇོག་འབད་དགོཔ་ཨིན་མས།