ཁམས་ཕྲན་གྱི་དབྱེ་བ་དང་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ བདག་འཛིན་འཐབ་ནི་གི་དོན་ལུ་ secretory pathwayནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་འདི་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིན་མས། ཕྱི་ཤུན་གྱི་ཐོག་ལས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ རྫས་སྦྱོར་སྐྱེལ་འདྲེན་གྱི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ kinesinདབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ནང་ལུ་ lipidsགི་འགན་ཁུར་འདི་ ད་ལྟོ་ཡང་ ལན་མ་ཐོབ་པའི་ གཞི་རྟེན་དྲི་བ་ཅིག་ཨིན་མས། འདི་ནང་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ glycosylphosphatidylinositol-immobilized ཟས་བཅུད་ཚུ་ ceramide lipid གི་ཆ་ཤས་རིངམོ་སྦེ་ཡོད་མི་ཚུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཏེ་ དམིགས་བསལ་གྱི་ endoplasms ལུ་དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། འདི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ endoplasmic reticulum membrane ནང་ལུ་ ceramide གི་རིམ་སྒྲིག་རིང་ཚད་འདི་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་གདམ་ཁ་འདི་ ཁག་ཆེ་ཤོས་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱི་ཞིབ་འཇུག་འདི་གིས་ འཚོ་བཅུད་ཀྱི་ཅ་ཆས་ཚུ་ མར་ཁུ་གི་རིང་ཚད་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ ཕྱིར་ཚོང་གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ཚུགས་པའི་ སྒྲུབ་བྱེད་འགོ་དང་པ་ཅིག་ཨིན་མས།
eukaryoticགི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ endoplasmic reticulum(ER)ནང་ལུ་ མཉམ་སྦྱོར་འབད་མི་ ཇུ་རྩི་འདི་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ སྐྱེལ་འདྲེན་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཁ་སྐོང་ལུ་ མར་ཁུ་ལ་ལུ་ཅིག་གིས་ དམིགས་བསལ་གྱི་ཇུ་རྩི་གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཏེ་ ཐོན་ཁུངས་ཅིག་སྦེ་ཡང་ ལཱ་འབད་ཚུགས་ཟེར་ཨིན་མས།(༢ལས་༥) ཨིན་རུང་ འ་ནི་མར་ཁུ་ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ཐབས་ལམ་འདི་ བདེན་ཁུངས་བཀལ་ནི་གི་དོན་ལས་ ཐད་ཀར་དུ་ སྒྲུབ་བྱེད་མེདཔ་ཨིན་མས། འ་ནི་གཞི་རྟེན་དཀའ་ངལ་འདི་སེལ་ཐབས་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཕབས་ནང་ལུ་ glycosylphosphatidylinositol (GPI) གི་ཟས་བཅུད་ཚུ་ ER ལས་ ཁྱད་པར་ཕྱེ་སྟེ་ ཕྱིར་ཚོང་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་ ཞིབ་འཇུག་འབད་ཡི། GPI-APs ནི་ མར་ཁུ་དང་འབྲེལ་བའི་ཁམས་ཕྲན་ཁ་ཐོག་གི་ཟས་བཅུད་སྣ་ཚོགས་ཡིན། ( 6, 7) GPI-APའདི་ glycolipid moiety(GPI anchor)བརྒྱུད་དེ་ plasma membraneགི་ཕྱི་ཁར་ཡོད་པའི་ འཚོ་བཅུད་ཅིག་ཨིན་མས། ཁོང་གིས་ GPI anchors འདི་ ER lumen (8) ནང་ལུ་ སྐད་སྒྱུར་གྱི་ཤུལ་ལས་ བཟོ་བཅོས་འབད་མི་ཅིག་སྦེ་ ངོས་ལེན་འབདཝ་ཨིན། མཐུད་པའི་ཤུལ་ལས་ GPI-AP འདི་ ER ལས་ plasma membrane ལུ་ Golgi apparatus (5, 9) བརྒྱུད་དེ་འགྱོཝ་ཨིན། GPI anchorsཡོད་མི་འདི་གིས་ GPI-APའདི་ ཕྱི་ཁར་ཐོན་མི་ཟས་བཅུད་ལས་ སོ་སོ་སྦེ་ སྐྱེལ་འདྲེན་འབད་དགོཔ་ཐོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ཕབས་ཀྱི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ GPI-APsའདི་ endoplasmic reticulumནང་ལུ་ཡོད་པའི་ གཞན་མི་ཇུ་རྩི་ཚུ་ལས་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ ཇུ་རྩི་གི་མགུ་རྙོག་དྲགས་ II(COPII)གིས་ བཀབ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ERཕྱིར་ཚོང་གི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་བྱ་རིམ་འདི་ གསལ་ཏོག་ཏོ་ཅིག་མེད་རུང་ ཐབས་ལམ་འདི་ལུ་ མར་ཁུ་དགོཔ་འོང་ཟེར་ཨིན་མས། ཕབས་ནང་ལུ་ GPI lipid remodelingའདི་ GPIམཐུད་པའི་ཤུལ་ལས་ འགོ་བཙུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ གནད་དོན་མང་ཤོས་ཅིག་ནང་རང་ ceramideའདི་ 26-carbon long-chain saturated fatty acid(C26:0)(11, 12)ལུ་ མཐུད་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ད་ལྟོ་ཚུན་ཚོད་ C26 ceramide འདི་ ཕབས་ཁམས་ཕྲན་གྱིས་བཟོ་མི་ ceramide ངོ་མ་ཅིག་ཨིན། ER ནང་ལུ་ མཉམ་སྦྱོར་འབད་དེ་ མང་ཤོས་ཅིག་རང་ COPII vesicles (13) བརྒྱུད་དེ་ Golgi apparatus ལུ་ ཕྱིར་ཚོང་འཐབ་ཨིན། GPI-APགི་ ERཕྱིར་ཚོང་ལུ་ དམིགས་བསལ་གྱིས་ ceramideམཉམ་སྦྱོར་དགོཔ་ཨིན་མས། བཅོས་མའི་གདོང་ཁེབས་དང་གཅིག་ཁར་ སྐྱེ་ལྡན་དངོས་ཁམས་རིག་པའི་ཞིབ་འཇུག་གིས་ རིངམོ་སྦེ་ཡོད་མི་ acyl chain ceramidesགིས་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཏེ་ གཟུགས་ཀྱི་ཁྱད་ཆོས་གཞན་དང་མ་འདྲཝ་སྦེ་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།(༡༧དང་༡༨) གནས་སྡུད་འདི་གིས་ C26 ceramideདང་ GPI-APགིས་ ཁོང་རའི་གཟུགས་ཀྱི་ཁྱད་ཆོས་ཚུ་ ལུང་ཕྱོགས་དང་ ཡང་ན་ ER membrane lipidགི་མཐའ་འཁོར་ནང་ལུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་ཡང་ གཙོ་བོ་ ཐུང་ཀུ་དང་ མ་ཚང་བའི་ གྷི་ལི་སི་རོ་ལི་པིཌ་ (C16:1 དང་ C18:1) (19, 20) ལས་གྲུབ་ཡོདཔ་ཨིན། འ་ནི་ལུང་ཕྱོགས་ཚུ་ དམིགས་བསལ་ ER གི་ཐོན་ཁུངས་ས་ཁོངས་ཚུ་ལུ་ གཙོ་བོར་བསྟེན་ནི་ཨིནམ་ད་ འདི་ནང་ལུ་ ceramide དང་ ceramide ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ GPI-AP འདི་ Golgi ལུ་ མཉམ་རུབ་ཐོག་ལས་ COPII vesicle (༥) ནང་ལུ་ སྐྱེལ་འདྲེན་འབད་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས།
འ་ནི་ཞིབ་འཇུག་ནང་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ མར་ཁུ་ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ཐབས་ལམ་འདི་ ཐད་ཀར་དུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ཕྲ་གཟུགས་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་ཐབས་ལམ་ཅིག་ཨིནམ་ད་ འདི་གིས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཐབས་ལམ་འདི་ དུས་མཉམ་དུ་ འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ཚུ་ བལྟ་ཚུགསཔ་ཨིན་མས། (༢༡, ༢༢).
ང་བཅས་ཀྱིས་ འགོ་དང་པ་ར་ SCLIM འཕྲུལ་རིག་འདི་ S. cerevisiae ནང་ལུ་ ER བཞག་པའི་ཤུལ་ལས་ C26 ceramide སྡེ་ཚན་དང་གཅིག་ཁར་ སྤྱིར་བཏང་གི་ GPI-AP འདི་ ག་དེ་སྦེ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན་ན་ གསལ་བཀོད་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ERགི་དབྱེ་བ་བརྟག་དཔྱད་འབད་ནི་གི་དོན་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ རིགས་མཚན་གྱི་ལམ་ལུགས་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ERES in vivoནང་ལུ་ མཉམ་སྦྱོར་གསརཔ་འབད་མི་ ཅ་ཆས་ཚུ་ ཐད་ཀར་དུ་ མཐོང་ཚུགསཔ་ཨིན། (7, 23) ང་བཅས་ཀྱིས་ C26 ceramide-based GPI-AP Gas1 འདི་ འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ལྗང་ཁུ་དང་ འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ Mid2 འདི་ འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ཀྱི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོད་མི་ Mid2 འདི་གཉིས་ཆ་ར་ དམིགས་གཏད་བསྐྱེད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། sec31-1གི་དྲོད་ཤུགས་ལུ་ཚོར་ཤུགས་ཅན་གྱི་རིགས་འགྱུར་ནང་ལུ་ འ་ནི་སྐྱེལ་འདྲེན་གཉིས་འདི་ galactose-inducible promoterདང་ ERESགི་རྟགས་མཚན་གྱི་འོག་ལུ་ བཏོནམ་ཨིན་མས། དྲོད་ཚད་མཐོ་ཤོས་(༣༧°C)ལུ་ sec31-1རིགས་འགྱུར་གྱིས་ COPIIགི་ཆ་ཤས་ Sec31གི་ལཱ་འགན་ལུ་ ཐོ་ཕོགཔ་ལས་ COPIIགི་ལྕུག་གུ་དང་ ERཕྱིར་ཚོང་འདི་ བཀག་ཐབས་འབདཝ་ལས་ གསརཔ་སྦེ་བཟོ་མི་ ཅ་ཆས་ཚུ་ ER(༢༣)ལུ་ བསྡུ་གསོག་འབདཝ་ཨིན་མས། དྲོད་ཚད་དམའ་ཤོས་ལུ་བསིལ་དྲགས་སྦེ་འགྱོ་བའི་ཤུལ་ལས་ sec31-1 རིགས་འགྱུར་གྱི་ཁམས་ཕྲན་འདི་ secretory གི་ས་སྒོ་ནང་ལས་ ལོག་ཐོབ་སྟེ་ བསྡུ་གསོག་འབད་མི་ བཅོས་མའི་ཅ་ཆས་གསརཔ་འདི་ ER ལས་ཕྱིར་ཚོང་འཐབ་ནི་འགོ་བཙུགས་ནུག CLIM གི་མཐོང་སྣང་གིས་ མཉམ་སྦྱོར་གསརཔ་འབད་མི་ Gas1-GFP དང་ Mid2-iRFP མང་ཤོས་ཅིག་རང་ ༣༧°C ལུ་ འཕྱེལ་འགྱོ་བའི་ཤུལ་ལས་ sec31-1 འགྱུར་བཅོས་ཁམས་ཕྲན་གྱི་ ER ནང་ལུ་ བསྡུ་གསོག་འབད་དེ་ སྐར་མ་༥ གི་རིང་ལུ་ ༢༤°C ལུ་ བཏོན་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། Mid2-iRFP འདི་ ER གི་གདོང་ཕྱོགས་ཆ་མཉམ་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ Gas1-GFP འདི་ ER གི་གདོང་ཕྱོགས་ལུ་ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ བཀྲམ་སྤེལ་འདི་ མ་འདྲཝ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ པར་རིས་ ༡ ཌི་ནང་སྟོན་ཡོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ Gas1-GFP ཀླད་ཀོར་ནང་ Mid2-iRFP མེད། འ་ནི་གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ GPI-APདང་ transmembraneཟས་བཅུད་ཚུ་ ཧེ་མ་ལས་རང་ ER membraneགི་ས་སྒོ་སོ་སོ་ནང་ལུ་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན་མས། Gas1-GFP ཆ་ཚན་འདི་ mCherry's COPII coat protein Sec13 (པར་རིས་༡པ་དང་ E དེ་ལས་ F དེ་ལས་ གློག་བརྙན་S1) དང་ཅིག་ཁར་ དམིགས་བསལ་གྱི་ERES གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ཡོདཔ་ཨིན།
sec31-1ཁམས་ཕྲན་གྱིས་ galactose-induced ཕྱིར་ཐོན་དང་ acylརིམ་སྒྲིག་རིངམོ་(C26) ceramide GPI-AP Gas1-GFP(GPI-AP, ལྗང་ཁུ) དེ་ལས་ transmembrane protein Mid2-iRFP(TMP, blue) དེ་ལས་ བཟོ་བཀོད་ཅན་གྱི་ERESགི་ཁ་ཡིག་ Sec13-mES3, སྐར་མ་ ༢༤ ལས་ ༢༤°C ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ཞིནམ་ལས་ སྐར་མ་ ༥ གི་ཤུལ་ལས་ SCLIM གིས་པར་བཏབ་ཡོདཔ་ཨིན། ༼ཀ་ལས་ག༽ གིས་ ངོ་ཚབ་མཉམ་བསྡོམ་འབད་མི་དང་ ཡང་ན་ ཁོད་སྙོམས་ཀྱི་ ༢ཌི་པར་རིས་རྐྱངམ་ཅིག་སྟོནམ་ཨིན། ༼ཀ༽ z-sections ༡༠ གི་ ༢ཌི་པར་བརྙན་ ༼ཁ༽ ཡང་ན་ སྐྱེལ་འདྲེན་དང་ ERES རྟགས་བཀོད་མི་གི་ ༣ཌི་ཁམས་ཕྲན་ཕྱེད་ཀའི་པར་རིས་ ༼ག༽ ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་ ༡μm (A དང་ B)། འཇལ་ཚད་ཚད་གཞི་འདི་ ༠.༥༥༡μm (C) ཨིན། Gas1-GFP འདི་ ER ལུང་ཕྱོགས་དང་ ཡང་ན་ སྡེ་ཚན་སོ་སོ་ནང་ལུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ད་ Mid2-iRFP འདི་ ER membrane (C) ནང་ལུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་དེ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ནུག (D) ཐིག་ཁྲམ་འདི་གིས་ མདའ་རྟགས་དཀརཔོ་གི་ཐིག་བདའ་སྟེ་ Gas1-GFP དང་ Mid2-iRFP གི་ འབྲེལ་བའི་འོད་མདངས་ཤུགས་ཚད་སྟོནམ་ཨིན། AU, གང་བྱུང་ཚད་གཞི། (E དང་ F) གིས་ ཅ་ཆས་དང་ ERES རྟགས་མཉམ་བསྡོམས་འབད་མི་ 3D པར་རིས་འདི་སྟོནམ་ཨིན། Gas1-GFP ཚོགས་པ་ཚུ་ དམིགས་བསལ་གྱི་ ERES གི་ཉེ་འདབས་ལུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འཇལ་ཚད་ཚད་གཞི་འདི་ ༠.༥༥༡μm ཨིན། (F) མདའ་རྟགས་དཀརཔོ་འདི་གིས་ ERES དང་འབྲེལ་བའི་ Gas1-GFP ཚོགས་སྡེ་འདི་རྟགས་བཀལཝ་ཨིན། བར་མཚམས་དང་གཡས་ཕྱོགས་ཀྱི་པེ་ནཱལ་ཚུ་གིས་ མཉམ་བསྡོམས་འབད་ཡོད་པའི་སྦོམ་བཟོ་ཡོད་པའི་ ༣ཌི་གཟུགས་བརྙན་དང་ སེལ་འཐུ་འབད་ཡོད་པའི་ གཱསི་༡-ཇི་ཨེཕ་པི་ཀླད་ཀོར་གྱི་ བསྒྱིར་མཐོང་སྣང་སྟོནམ་ཨིན།
Gas1-GFP ཀླད་ཀོར་དང་ དམིགས་བསལ་གྱི་ ERES གི་བར་ནའི་ ས་སྒོའི་འབྲེལ་བ་འདི་གིས་ Gas1-GFP གིས་ ERES ནང་ལས་ ཐོན་འགྱོ་ནི་གི་དོན་ལུ་ Mid2-iRFP གིས་ ལག་ལེན་འཐབ་མི་ དམ་ཁ་ཅན་ལས་ སོ་སོ་ཅིག་ཨིན་མས། འདི་བཟུམ་གྱི་འོས་འབབ་འདི་ བསལ་ཐབས་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཅ་ཆས་གཅིག་དང་གཉིས་ཀྱི་དོན་ལུ་ ERES ཆ་ཚད་འདི་ ཚད་འཇལ་ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ ERES མང་ཤོས་ཅིག་ནང་ (བརྒྱ་ཆ་༧༠) ཅ་ཆས་རིགས་གཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ཡི། པར་རིས་ ༢C གི་འོག་ལུ་ཡོད་པའི་པར་རིས་འདི་གིས་ Gas1-GFP (པར་རིས་ ༡) ཡང་ན་ Mid2-iRFP (པར་རིས་ ༢) རྐྱངམ་ཅིག་ཡོད་པའི་ ERES གི་དཔེ་མཚོན་གཉིས་སྟོནམ་ཨིན། དེ་དང་ཕྱདཔ་ད་ ERES གི་བརྒྱ་ཆ་༢༠ དེ་ཅིག་ནང་ ས་ཁོངས་གཅིག་ནང་ ཅ་ཆས་གཉིས་ གཅིག་ཁར་འཛོམས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན་པས། ERES ལ་ལུ་ཅིག་ (བརྒྱ་ཆ་༡༠) ནང་ ཅ་ཆས་རིགས་གཉིས་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ ས་ཁོངས་སོ་སོ་ཚུ་ནང་ གསལ་ཏོག་ཏོ་སྦེ་ སོ་སོ་སྦེ་ བཞག་ཡོདཔ་ཨིན་པས། དེ་འབདཝ་ལས་ གནས་སྡུད་དབྱེ་དཔྱད་འདི་གིས་ ER ཕྱིར་ཚོང་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ GPI-AP Gas1-GFP དང་ transmembrane cargo Mid2-iRFP གཉིས་ ERES སོ་སོ་ལུ་དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན།(པར་རིས་ ༢D) འ་ནི་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཇོན་ཐངས་འདི་ ཧེ་མའི་སྐྱེ་ལྡན་རྫས་སྦྱོར་གྱི་དབྱེ་དཔྱད་ (༦) དང་ རིགས་མཚན་གྱི་གཏན་འབེབས་ (༧) དང་ཅིག་ཁར་ ཧ་ཅང་གིས་ མཐུན་སྒྲིག་ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ ERES ནང་འཛུལ་མི་ ཟུར་བཞག་ཁང་ནང་ ཅ་ཆས་ཚུ་གི་ སྤྱོད་ལམ་ཡང་ བལྟ་ཚུགས།(པར་རིས་ ༢E དང་ གློག་བརྙན་ S2) པར་རིས་ ༢E ནང་ Gas1-GFP (panel 3) ཡང་ན་ Mid2-iRFP (panel 4) གི་ཆ་ཤས་ཆུང་ཀུ་ཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་ ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ ERES ནང་འཛུལ་ཏེ་ ས་ཁོངས་སོ་སོ་ཅིག་ནང་ བཀག་བཞག་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན། པར་རིས་༢པའི་ནང་ལུ་ Gas1-GFPདང་ Mid2-iRFPའདི་ འཕྲལ་འཕྲལ་སྐབས་ ERESགཅིག་ནང་ལུ་མཐོངམ་ཨིན་རུང་ ཕྱོགས་སོ་སོ་ལས་འཛུལ་ཏེ་ COPII vesiclesསོ་སོ་ཚུ་ངོ་བཏོན་ཚུགས་པའི་ ལུང་ཕྱོགས་སོ་སོ་ནང་ལུ་ བསྡུ་བསྒྱོམ་འབདཝ་ཨིན་མས། ད་རུང་ ང་བཅས་ཀྱིས་ C26 ceramide-based GPI-AP Gas1 འདི་ ERES གི་དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་མི་འདི་ དམིགས་བསལ་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་ ངེས་གཏན་བཟོ་ཡི། (པར་རིས་S1 དང་གློག་བརྙན་S3)། གསརཔ་སྦེ་བཟོ་མི་ Axl2-GFPའདི་ Mid2-iRFPབཟུམ་གྱི་ ERགི་ཆ་རྐྱེན་བརྒྱུད་དེ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ ERESམང་ཤོས་ཅིག་ནང་རང་ Mid2-iRFPདང་གཅིག་ཁར་ མཉམ་འབྲེལ་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། པར་རིས་ ༡ དང་ ༢ པའི་པར་རིས་ ༡ པ། S1C གིས་ ERES གི་དཔེ་གཉིས་སྟོནམ་ཨིན། གནད་དོན་འདི་ཚུ་ནང་ ཅ་ཆས་གཉིས་ཆ་ར་ ERES ནང་གཅིག་ཁར་འཛུལཝ་ཨིན།(པར་རིས་ S1E, Panel 3 དང་ Movie S3)
sec31-1 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་གིས་ galactose བཏོན་ཚུགས་པའི་ ཕྱི་ཁར་ཐོན་མི་དང་ Gas1-GFP (GPI-AP, green) དེ་ལས་ Mid2-iRFP (TMP, blue) དང་ ERES གི་ཁ་ཡིག་ Sec13-mCherry (ERES, magenta) ཚུ་ ༣༧ ལུ་བཞག་སྟེ་ སྐར་མ་༣༠ ལས་ °C ལས་ སྐར་མ་༣༠ གི་བར་ན་ གསང་བའི་གནས་སྟངས་ནང་ བཙུགས་ཏེ་ བཞག་ནུག། block, དང་ སྐར་མ་༢༠ གི་ཤུལ་ལས་ SCLIM དང་ཅིག་ཁར་པར་རིས། (A to C) ངོ་ཚབ་ 2D པར་བརྙན་པར་རིས་ (A; scale bar, 1μm) ཡང་ན་ 3D ཁམས་ཕྲན་ hemisphere གི་པར་རིས་ (B དང་ C; scale unit, 0.456μm) གི་ ཅ་ཆས་དང་ ERES གིས་རྟགས་བཀོད་མི་ z-sections 10 ཚུ། ༼ཁ༽ གི་འོག་ལུ་ཡོད་པའི་ པེ་ནཱལ་དང་ ༼ག༽ ནང་གི་ པེ་ནཱལ་འདི་གིས་ ERES (magenta) [Gas1-GFP (gray) དང་ Mid2-iRFP (light blue)] ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ཅ་ཆས་ཚུ་རྐྱངམ་ཅིག་བཀྲམ་སྟོན་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལས་སྦྱོར་འབད་ཡོད་པའི་པར་ཚུ་བཀྲམ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན། (C) མདའ་རྟགས་ཁ་ཕྱེ་: ERES གིས་ ཅ་ཆས་གཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་འབག་འོང་ (༡ ལས་ ༤)། མདའ་རྟགས་སྐྱ་བོ་: ERES ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོད་པའི་ ཅ་ཆས་ཚུ་ཡོདཔ་ཨིན། (༥) མདའ་རྟགས་དཀརཔོ་: མཉམ་འབྲེལ་གནས་སའི་ཅ་ཆས་ཡོད་པའི་ ERES ཚུ། འོག་ལུ་: སེལ་འཐུ་འབད་ཡོད་པའི་ ERES རྐྱང་པ་དེ་ནང་ Gas1-GFP (1) ཡང་ན་ Mid2-iRFP (2) རྐྱངམ་ཅིག་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་ ༡༠༠ nm. (D) (C) ནང་གསལ་བཀོད་འབད་ཡོད་པའི་པར་རིས་ཕྲ་གཟུགས་ཀྱི་ཚད་གཞི། ERES གི་སྤྱིར་སྙོམས་བརྒྱ་ཆའི་ནང་ སྐྱེལ་འདྲེན་གཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་ཡོད་མི་ (Gas1-GFP ཡང་ན་ Mid2-iRFP) སོ་སོ་སྦེ་བཞག་མི་ སྐྱེལ་འདྲེན་དང་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་པའི་སྐྱེལ་འདྲེན་ཚུ་ཨིན། རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་གསུམ་ནང་ ཁམས་ཕྲན་༥༤ ནང་ n=༤༣༢ ཡོདཔ་ཨིན། འཛོལ་བའི་ཕྲ་རིང་ = ཨེསི་ཌི། མཇུག་མ་གཉིས་ཀྱི་ཆ་མེད་ t བརྟག་དཔྱད། *** P = ༠.༠༠༠༢། (E) ཟུར་བཞག་ཅ་ཆས་ཚུ་གི་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་ཡོད་པའི་ ERES གི་ 3D པར་རིས། (C) གིས་རྟགས་བཀོད་ཡོདཔ། Gas1-GFP (ལྗང་ཁུ་) (༣) ཡང་ན་ Mid2-iRFP (ཧོནམ) (༤) ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ ERES (magenta) ནང་འཛུལ་ཏེ་ ERES ནང་འཁོད་ཀྱི་ས་ཁོངས་ཆུང་ཀུ་ཅིག་ནང་ བཀག་ཆ་འབདཝ་ཨིན། འཕྲལ་འཕྲལ་སྐབས་ ཅ་ཆས་གཉིས་ཆ་ར་ ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ ERES (༥) གཅིག་ནང་འཛུལ་ཏེ་ ERES ནང་འཁོད་ལུ་ སོ་སོ་སྦེ་ཡོད་པའི་ས་ཁོངས་ནང་ བཀག་བཞགཔ་ཨིན། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་ ༡༠༠ nm.
འདི་གི་ཤུལ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ER གི་ཆ་རྐྱེན་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ acyl chain ceramide (C26) གིས་ Gas1 འདི་ ERES གི་ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ཚུགས་ཟེར་བའི་ རིག་ཚོད་བརྟག་དཔྱད་འབད་ཡི། འདི་གི་དོན་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ བཟོ་བཅོས་འབད་བའི་ཕབས་རིགས་ GhLag1 ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ནང་ལུ་ endogenous ceramide synthases Lag1 དང་ Lac1 གཉིས་ GhLag1 གིས་ཚབ་བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། Mass spectrometry (MS) གིས་ རི་དྭགས་ཀྱི་ རིགས་མཚན་ནང་ བརྒྱ་ཆ་༩༥ དེ་ཅིག་ རིངམོ་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ད་ GhLag1 ནང་ལུ་ བརྒྱ་ཆ་༨༥ དེ་ཅིག་ རིངམོ་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ནུག ), སེ་ར་མའིཌ་གི་བརྒྱ་ཆ་ ༢ རྐྱངམ་གཅིག་ཧ་ཅང་རིང་བའི་ (C26) རིམ་སྒྲིག་སེ་ར་མའིཌ་ཨིན། ད་ལྟོ་ཚུན་ཚོད་ GhLag1 གི་ཆ་རྐྱེན་ནང་ལུ་ C18 དང་ C16 ceramides འདི་ ceramides ངོ་མ་ཅིག་ཨིན་རུང་ MS དབྱེ་དཔྱད་ཀྱིས་ GhLag1 གི་རིགས་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ Gas1-GFP གི་ GPI anchor ནང་ལུ་ C26 ceramide ཡོདཔ་སྦེ་ ངེས་གཏན་བཟོ་ནུག སྤུས་ཚད་དེ་གཅིག་པ་ཡིན།(པར་རིས་ ༣ཀ) (༢༦) དེ་འབདཝ་ལས་ འདི་གིས་ ceramide remodeling enzyme Cwh43 འདི་ C26 ceramide གི་དོན་ལུ་ གདམ་ཁ་ཅན་སྦེ་ཡོདཔ་ལས་ པར་རིས་༢༦ པའི་ནང་ སྟོན་ཡོདཔ་ད་ དེ་གིས་ GhLag1 གི་རིགས་ནང་ C26 ceramide ཆུང་ཀུ་ཅིག་ལས་ GPI གི་གཞི་བཙུགས་འདི་ གདམ་ཁ་ཅན་སྦེ་ བཙུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན། S2 (༢༩). དེ་འབདཝ་ད་ GhLag1གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ C18-C16 ceramideརྐྱངམ་ཅིག་ཡོདཔ་ད་ Gas1-GFPནང་ལུ་ ད་ལྟོ་ཡང་ C26 ceramideཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་གིས་ ERནང་ལུ་ཡོད་པའི་ membrane ceramideགི་ acyl chain lengthགི་དཀའ་ངལ་འདི་ དམིགས་བསལ་གྱིས་བསལ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ཆས་ལེགས་ཤོམ་ཅིག་སྦེ་བཟོཝ་ཨིན་མས། དབྱེ་རིམ་དང་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་རིག་ཚོད་ཀྱི་འགན་ཁུར། དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ འགོ་དང་པ་རང་ C26 Gas1-GFP འདི་ GhLag1 ནང་ལུ་ བསྡུ་གསོག་འབད་ཚུགས་པའི་ ལྕོགས་གྲུབ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཞིབ་འཇུག་འབད་ཡི། ང་བཅས་ཀྱིས་ sec31-1ནང་ལུ་ Gas1-GFPམང་ཤོས་ཅིག་རང་ སྡེ་ཚན་ནང་ལུ་བསྡུ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ཡོདཔ་ད་ sec31-1 GhLag1ནང་ལུ་ Gas1-GFPའདི་ རིངམོ་སྦེ་ཡོདཔ་ཨིན། གཏན་གཏན་སྦེ་སླབ་དགོ་པ་ཅིན་ C26 ceramideལུ་གཞི་བཞག་པའི་ སྡེ་ཚན་འདི་ ERESདང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་ཡོདཔ་ལས་ ཤུལ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ འ་ནི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ ERཕྱིར་ཚོང་གི་ཟས་བཅུད་ཐབས་ལམ་གྱི་ལཱ་འགན་ཡང་ འབྲེལ་གཏོགས་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ ཞིབ་དཔྱད་འབད་ཡི། GPI-AP གིས་ ER ཕྱིར་ཚོང་གི་དོན་ལུ་ དམིགས་བསལ་གྱི་ COPII ལམ་ལུགས་ལག་ལེན་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ Ted1′s གི་བཟོ་བཀོད་བསྐྱར་བཟོ་གིས་ GPI anchor གི་ glycan ཆ་ཤས་ལུ་ ཤུགས་སྦེ་ར་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིན། (30, 31) recombinant GPI-glycanའདི་ transmembrane cargo receptor p24གིས་ངོས་འཛིན་འབདཝ་ཨིནམ་ད་ འདི་གིས་ Lst1འདི་ དམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ བཙུགས་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ COPIIགི་ཅ་ཆས་གཙོ་བོ་ཅིག་ཨིན་མི་ Sec24གི་ཆ་ཤེས་ཅིག་ཨིནམ་ལས་ GPI-AP-rich COPII Vesicles(31)འདི་ ཁག་ཆེཝ་སྦེ་ཐོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ རིགས་འགྱུར་གཉིས་སྦེ་བཟོ་སྟེ་ འ་ནི་འཚོ་བཅུད་རྐྱངམ་ཅིག་བཏོན་བཏང་མི་འདི་ མཉམ་སྡེབ་འབད་དེ་ བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ sec31-1emp24Δ དང་ sec31-1ted1Δ ནང་ལུ་ Gas1-GFP འདི་ ER གི་གདོང་ཕྱོགས་ནང་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་དེ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། གྲུབ་འབྲས་འདི་གིས་ ER གི་ཆ་རྐྱེན་ནང་ལུ་ C26 ceramide ཡོད་པའི་ཁར་ Gas1-GFP གི་སྡེ་ཚན་འདི་ཡང་ p24 གི་མགུ་རྙོག་དྲགས་ལུ་ མཐུད་དགོཔ་ཨིནམ་ལས་ དམིགས་བསལ་གྱི་ Lst1 བཙུགས་དགོཔ་མེདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ER membraneནང་ལུ་ཡོད་པའི་ ceramideགི་རིང་ཚད་འདི་གིས་ Gas1-GFPདང་p24གི་བར་ན་ལུ་ མཐུད་དེ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་འབདཝ་ད་ ང་བཅས་ཀྱིས་ གྱིབ་མ་ནང་ C18-C16 ceramide ཡོད་མི་འདི་གིས་ p24 མགུ་རྙོག་དྲགས་ཀྱིས་ བསྐྱར་བཟོ་འབད་མི་ GPI-glycans ལུ་ གནོད་པ་མེདཔ་སྦེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། ལྕོགས༌གྲུབ། COPII ཡན་ལག་དབྱེ་བ་ Lst1 (པར་རིས་ S4C) བསྡུ་ལེན་འབད། འདི་འབདཝ་ལས་ C26 ceramideལུ་བརྟེན་པའི་སྡེ་ཚན་འདི་ ERཕྱིར་ཚོང་གི་ཐབས་ལམ་མ་འདྲཝ་ཚུ་དང་གཅིག་ཁར་ ཟས་བཅུད་ཀྱི་འབྲེལ་བ་འཐབ་དགོཔ་མེད་རུང་ མར་ཁུ་གི་རིང་ཚད་ལས་བརྟེན་ཏེ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཐབས་ལམ་གཞན་མི་ཅིག་ལུ་ རྒྱབ་སྐྱོར་འབདཝ་ཨིན་མས། དེ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ER membrane ནང་ལུ་ ceramide acyl chain length འདི་ Gas1-GFP འདི་ ERES དམ་ཁ་ཅན་སྦེ་ དབྱེ་ཁག་བཟོ་ནི་ལུ་ ཁག་ཆེཝ་ཨིན་ན་མེན་ན་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡི། GhLag1གི་རིགས་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ Gas1གིས་ ERལས་ཐོན་ཏེ་ plasma membraneནང་ལུ་འཛུལ་དོ་ཡོདཔ་ལས་ (པར་རིས་S5) ང་བཅས་ཀྱིས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་འདི་ ceramide acylགི་རིམ་སྒྲིག་གི་རིང་ཚད་ཀྱིས་ འདྲུད་བདའ་བ་ཅིན་ GhLag1གི་རིགས་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ Gas1འདི་ ལོག་སྟེ་རང་ ཕྱོགས་སྟོན་འབད་དེ་ བརྒལ་ཚུགས་ཟེར་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཡིད་ཆེས་བསྐྱེདཔ་ཨིན་མས། ERES ཅ་ཆས་ཚུ་ གྱིབ་མ་གཅིག་མཚུངས་ཡོདཔ་ཨིན།
(ཀ) GhLag1 གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ ངོ་མ་རང་ C18-C16 ceramides ཐུང་ཀུ་ཡོདཔ་ད་ Gas1-GFP གི་ GPI anchor ལུ་ ད་ལྟོ་ཡང་ རི་དྭགས་ཁམས་ཕྲན་བཟུམ་སྦེ་ C26 IPC ཡོདཔ་ཨིན། གོང་ལུ་ རི་དྭགས་ཀྱི་དབྱེ་བ་(Wt)དང་ GhLag1pགི་རིགས་མཚན་ནང་ལུ་ ceramideགི་རིང་ཚད་དབྱེ་དཔྱད་འབད་མི་འདི་ mass spectrometry(MS)གི་ཐོག་ལས་ཨིན་མས། གནས་སྡུད་འདི་གིས་ སེ་ར་མའིཌ་ཡོངས་བསྡོམས་ཀྱི་བརྒྱ་ཆ་སྟོནམ་ཨིན། རང་དབང་ཅན་གྱི་ཚོད་ལྟ་གསུམ་གྱི་ཆ་སྙོམས། འཛོལ་བའི་ཕྲ་རིང་ = ཨེསི་ཌི། མཇུག་མ་གཉིས་ཀྱི་ཆ་མེད་ t བརྟག་དཔྱད། **** P <༠.༠༠༠༡. འོག་ལུ་ཡོད་པའི་ པེ་ནཱལ་: MS དབྱེ་དཔྱད། Gas1-GFP (GPI-IPC) GPI anchor ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ IPC གི་ acyl རིམ་སྒྲིག་རིང་ཚད་འདི་ རི་དྭགས་དབྱེ་བ་དང་ GhLag1p རིགས་མཚན་ནང་ལུ་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། གནད་སྡུད་འདི་གིས་ ཡོངས་བསྡོམས་ཨའི་པི་སི་བརྡ་རྟགས་ཀྱི་བརྒྱ་ཆ་སྟོནམ་ཨིན། རང་དབང་ཅན་གྱི་བརྟག་དཔྱད་ལྔ་གི་ཆ་སྙོམས། འཛོལ་བའི་ཕྲ་རིང་ = ཨེསི་ཌི། མཇུག་མ་གཉིས་ཀྱི་ཆ་མེད་ t བརྟག་དཔྱད། ns, གལ་ཆེ་མིན། P = ༠.༩༡༣༤། ༼ཁ༽ sec31-1, sec31-1 GhLag1, sec31-1emp24Δ, sec31-1ted1Δ དང་ sec31-1lst1Δ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་གིས་ galactose-induced Gas1-GFP ཚུ་ 37°C ལུ་ མར་ཕབ་འབད་དེ་ སྐར་མ་༣༧ གྱི་རིང་ལུ་ འཕྱེལ་འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། 24°C རྗེས་སུ། མདའ་རྟགས་དཀརཔོ་: ER Gas1-GFP ཆ་ཚན། མདའ་རྟགས་ཁ་ཕྱེ།: མཉམ་བསྡོམས་མེད་པའི་ Gas1-GFP འདི་ ER གི་གདོང་ཕྱོགས་ཆ་མཉམ་ལུ་བཀྲམ་སྤེལ་འབད་དེ་ ER གི་ཁྱད་ཆོས་ཅན་གྱི་རྡུལ་ཕྲན་སྒོར་སྒོར་གྱི་ཚོས་གཞི་སྟོནམ་ཨིན། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་།, 5μm. (C) (B) ནང་གསལ་བཀོད་འབད་ཡོད་པའི་པར་རིས་ཕྲ་གཟུགས་ཀྱི་ཚད་གཞི། ཁམས་ཕྲན་གྱི་སྤྱིར་སྙོམས་བརྒྱ་ཆའི་ནང་ punctate Gas1-GFP གཞི་བཀོད་ཡོད། རང་དབང་གི་ཚོད་ལྟ་གསུམ་ནང་ n≥300 ཁམས་ཕྲན། འཛོལ་བའི་ཕྲ་རིང་ = ཨེསི་ཌི། མཇུག་མ་གཉིས་ཀྱི་ཆ་མེད་ t བརྟག་དཔྱད། **** P <༠.༠༠༠༡.
དཀའ་ངལ་འདི་ཐད་ཀར་དུ་སེལ་ཐབས་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ GhLag1 ནང་ལུ་ Gas1-GFP དང་ Mid2-iRFP གི་ SCLIM མཐོང་སྣང་འདི་ sec31-1 དྲོད་ཚད་ལུ་ཚོར་ཤུགས་ཅན་གྱི་རིགས་འགྱུར་ allele དང་གཅིག་ཁར་ འབད་ཡི། ER འདི་ ༣༧°C ལུ་བཞག་ཞིནམ་ལས་ ༢༤°C ལུ་བཏོན་པའི་ཤུལ་ལས་ གསརཔ་སྦེ་བཟོ་མི་ Gas1-GFP མང་ཤོས་ཅིག་རང་ ER གི་ཆ་རྐྱེན་ནང་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་མ་འབད་བར་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། དེ་མ་ཚད་ ERES གི་བརྒྱ་ཆ་སྦོམ་ཅིག་ (བརྒྱ་ཆ་༦༧) དེ་ནང་ མཉམ་འབྲེལ་གྱི་ ཅ་ཆས་རིགས་གཉིས་ ཚུད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན་པས།(པར་རིས་༤D) པར་རིས་ ༤ སི་ གི་ པེ་ནཱལ་ ༡ དང་ ༢ ནང་ ERES གི་དཔེ་གཉིས་ Gas1-GFP དང་ Mid2-GFP གཉིས་གཅིག་ལུ་གཅིག་བརྩེགས་འབད་དེ་སྟོནམ་ཨིན། དེ་མ་ཚད་ ཅ་ཆས་གཉིས་ཆ་ར་ ERES གཅིག་ནང་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན་པས།(པར་རིས་ ༤E དང་ པེ་ནཱལ་ ༣ དེ་ལས་ གློག་བརྙན་ S4) དེ་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱི་གྲུབ་འབྲས་ཚུ་གིས་ ER membrane ནང་ལུ་ ceramide acyl chain གི་རིང་ཚད་འདི་ ER ཟས་བཅུད་བསྡུ་སྒྲིག་དང་དབྱེ་ཁག་བཟོ་ནི་ལུ་ ཁག་ཆེ་བའི་ ཐག་བཅད་མི་ཅིག་ཨིནམ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན།
Sec31-1 GhLag1 ཁམས་ཕྲན་ཚུ་གིས་ གཱ་ལག་ཊོས་ལས་བརྟེན་པའི་ ཕྱི་ཁར་བཏོན་མི་དང་ Gas1-GFP (GPI-AP, ལྗང་ཁུ་) དེ་ལས་ Mid2-iRFP (TMP, ཧོནམ་) དེ་ལས་ ERES-labeled Sec13-mCherry (ERES, magenta) ཚུ་ ༣༧°C ལུ་ འཕྱེལ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན། སྐར་མ་ ༣༠ འཕྲོ་མཐུད་དེ་ ༢༤°C ལུ་མར་ཕབ་འབད་དེ་ བཙོག་པ་བཏོན་ཞིནམ་ལས་ སྐར་མ་ ༢༠ གི་ཤུལ་ལས་ SCLIM དང་ཅིག་ཁར་པར་བཏབ། (A to C) ངོ་ཚབ་ 2D པར་བརྙན་པར་རིས་ (A; scale bar, 1μm) ཡང་ན་ 3D ཁམས་ཕྲན་ hemisphere གི་པར་རིས་ (B དང་ C; scale unit, 0.45μm) གི་ ཅ་ཆས་དང་ ERES གིས་རྟགས་བཀོད་མི་ z-sections 10 གི་པར་རིས་ཚུ་ཨིན། ༼ཁ༽ གི་འོག་ལུ་ཡོད་པའི་ པེ་ནཱལ་དང་ ༼ག༽ ནང་གི་ པེ་ནཱལ་འདི་གིས་ ERES (magenta) [Gas1-GFP (gray) དང་ Mid2-iRFP (light blue)] ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ཅ་ཆས་ཚུ་རྐྱངམ་ཅིག་བཀྲམ་སྟོན་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལས་སྦྱོར་འབད་ཡོད་པའི་པར་ཚུ་བཀྲམ་སྟོན་འབདཝ་ཨིན། (C) དཀརཔོ་བཀང་བའི་མདའ་: ERES, ཅ་ཆས་ཚུ་ གཅིག་ཁར་བཀང་ཡོདཔ། མདའ་རྟགས་ཁ་ཕྱེ་: ཨི་ཨར་ཨི་ཨེསི་ནང་རྣམ་གྲངས་གཅིག་རྐྱངམ་ཅིག་ཡོདཔ་ཨིན། འོག་གི་པེ་ནཱལ་: སེལ་འཐུ་འབད་ཡོད་པའི་ཨི་ཨར་ཨི་ཨེསི་ལུ་ (སི་) ནང་རྟགས་བཀོད་ཡོད་པའི་ ཅ་ཆས་ཚུ་ (༡ དང་༢) གཅིག་ཁར་བསྡོམས་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་ ༡༠༠ nm. (D) (C) ནང་གསལ་བཀོད་འབད་ཡོད་པའི་པར་རིས་ཕྲ་གཟུགས་ཀྱི་ཚད་གཞི། sec31-1 དང་ sec31-1 GhLag1 ཡན་ལག་ནང་ སྐྱེལ་འདྲེན་གཅིག་རྐྱངམ་གཅིག་ (Gas1-GFP ཡང་ན་ Mid2-iRFP) ཚུད་དེ་ཡོདཔ་ད་ སོ་སོ་སྦེ་བཞག་མི་ སྐྱེལ་འདྲེན་དང་ གཅིག་ཁར་བཀལ་བའི་ སྐྱེལ་འདྲེན་གྱི་དོན་ལུ་ ERES གི་ སྤྱིར་སྙོམས་བརྒྱ་ཆ་དེ་ ཚུད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན་པས། རང་དབང་གི་བརྟག་དཔྱད་གསུམ་ནང་ ཁམས་ཕྲན་༥༤ ནང་ n = ༤༣༢ (sec31-1) དང་ ཁམས་ཕྲན་༤༧ ནང་ n = ༤༣༠ (sec31-1 GhLag1) ཐོན་ཡོད། འཛོལ་བའི་ཕྲ་རིང་ = ཨེསི་ཌི། མཇུག་མ་གཉིས་ཀྱི་ཆ་མེད་ t བརྟག་དཔྱད། *** P = ༠.༠༠༠༢ (sec31-1) དང་ ** P = ༠.༠༠༣༡ (sec31-1 GhLag1) བཅས་ཡིན། (E) གདམ་ཁ་རྐྱབ་ཡོད་པའི་ ERES གི་ 3D པར་རིས་འདི་ གཅིག་ཁར་བཀབ་པའི་ ཅ་ཆས་ (3) དང་གཅིག་ཁར་ (C) རྟགས་བཀོད་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP (ལྗང་ཁུ) དང་ Mid2-iRFP (ཧོནམ) ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ ERES (magenta) ལུ་འབྱོན་ཏེ་ ERES བཀག་ཆ་འབད་བའི་ས་ཁོངས་གཅིག་ནང་སྡོད་དགོ། ཚད་འཇལ་ཕྲ་རིང་ ༡༠༠ nm.
ཞིབ་འཇུག་འདི་གིས་ མར་ཁུ་ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ ཟས་བཅུད་ཚུ་ ཕྱིར་ཚོང་གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཐད་ཀར་དུ་ སྒྲུབ་བྱེད་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་དོན་ལུ་ acyl chainགི་རིང་ཚད་འདི་ ཁག་ཆེཝ་སྦེ་མཐོང་ནུག SCLIMཟེར་མི་ ཕྲ་གཟུགས་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་ཐབས་ལམ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ གསརཔ་སྦེ་མཉམ་སྦྱོར་འབད་མི་ Gas1-GFPའདི་ གསལ་སྟོན་འབད་ཡི། ER གི་གདོང་ཕྱོགས་ (པར་རིས་ ༡)། དེ་མ་ཚད་ ཅ་ཆས་འདི་གཉིས་ ERES སོ་སོ་ནང་ དམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ འཛུལཝ་ཨིན། (པར་རིས་ ༢) ཁམས་ཕྲན་གྱི་རིང་ཚད་འདི་ C26ལས་ C18-C16ལུ་མར་ཕབ་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ད་ Gas1-GFPའདི་ ERལུང་ཕྱོགས་ནང་ལུ་ བར་ཆད་རྐྱབ་སྟེ་ཡོདཔ་ད་ Gas1-GFPའདི་ ERལས་ ERESགཅིག་བརྒྱུད་དེ་ transmembraneཟས་བཅུད་དང་གཅིག་ཁར་ འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ༤)།
GPI-APགིས་ ERལས་ཐོན་ནི་གི་དོན་ལུ་ དམིགས་བསལ་གྱི་ཟས་བཅུད་ཐབས་ལམ་ལག་ལེན་འཐབ་དོ་ཡོད་རུང་ C26 ceramideལུ་བརྟེན་པའི་དབྱེ་བ་ཕྱེ་མི་འདི་གིས་ ERESགི་དམིགས་བསལ་གྱི་ཟས་བཅུད་ལུ་བརྟེན་མི་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས།(པར་རིས་S4དང་S5) ང་བཅས་ཀྱིས་ ཞིབ་འཇུག་འབད་མི་འདི་གིས་ མར་ཁུ་ལུ་གཞི་བཞག་པའི་ ཟས་བཅུད་ཀྱི་སྡེ་ཚན་དང་ གཞན་མི་ཅ་ཆས་ཚུ་ ཕྱིར་བཏོན་འབད་མི་འདི་གིས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཐབས་ལམ་གཞན་མི་ཅིག་ལུ་ རྒྱབ་སྐྱོར་འབདཝ་ཨིན་མས། ང་བཅས་ཀྱིས་ བལྟ་བརྟོག་འབད་མི་དང་འཁྲིལ་བ་ཅིན་ Gas1-GFP ལུང་ཕྱོགས་དང་ ཡང་ན་ དམིགས་བསལ་གྱི་ ERES དང་འབྲེལ་བའི་ སྡེ་ཚན་ལུ་ transmembrane secreted protein Mid2-iRFP མེདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ༢). འདི་དང་ཕྱདཔ་ད་ལུ་ ER membraneནང་ལུ་ C18-C16 ceramidesཡོད་མི་འདི་གིས་ GPI-APགིས་ ལུང་ཕྱོགས་དང་ ཡང་ན་ སྡེ་ཚན་བཟོ་མི་ཚུགས་ནི་ཨིནམ་ལས་ ERESགཅིག་ནང་ལུ་ transmembrane secreted proteinsའདི་ ཕྱིར་བཏོན་འབད་ནི་དང་ ཡང་ན་ ཚབ་མ་བཙུགས་ནི་ཨིན་མས།(པར་རིས་༣དང་༤) . འདི་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ C26 ceramideགིས་ ERESདང་འབྲེལ་བའི་ འཚོ་བཅུད་ཚུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམས་བཅུག་སྟེ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་དང་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་ལུ་ ལྷན་ཐབས་འབདཝ་ཨིནམ་སྦེ་ གྲོས་འཆར་བཀོད་ནུག
འདི་ C26 ceramide ལུ་བརྟེན་པའི་ དམིགས་བསལ་གྱི་ ER ས་ཁོངས་ནང་ ག་དེ་སྦེ་ གྲུབ་ཚུགསཔ་སྨོ? གཤེར་ཁུ་འདི་ ཕྱོགས་གཅིག་ལས་ སོ་སོ་སྦེ་འགྱོ་མི་འདི་གིས་ GPI-APདང་C26 ceramideགིས་ མར་ཁུ་ཆུང་ཀུ་སྦེ་ཐོན་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། སྤུས་ཚད་ཀྱི་སྡེ་ཚན་ (༡༧, ༡༨)། འ་ནི་གནས་སྐབས་ཀྱི་སྡེ་ཚན་ཆུང་ཀུ་ཚུ་ p24 complex(34)ལུ་མཐུད་པའི་ཤུལ་ལས་ སྡེ་ཚན་སྦོམ་དང་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་སྦེ་བཟོ་ཚུགས་ནི་ཨིན་མས། འདི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ C26 Gas1-GFP གིས་ p24 མགུ་རྙོག་དྲགས་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་སྟེ་ མཐོང་གསལ་ཅན་གྱི་ཚོགས་པ་སྦོམ་བཟོ་དགོཔ་སྦེ་ སྟོན་ཡོདཔ་ཨིན། (པར་རིས་ ༣) p24གི་སྣ་མང་འདི་ ཕབས་ནང་ལུ་ p24གི་ཟས་བཅུད་མ་འདྲཝ་བཞི་ཡོད་མི་ heterozygous oligomerཅིག་ཨིནམ་ད་ འདི་གིས་ མཐུན་རྐྱེན་མ་འདྲཝ་སྦེ་བྱིན་དོ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གིས་ GPI-APགི་ཆ་ཚན་ཆུང་ཀུ་ཚུ་ འབྲེལ་མཐུད་འབད་དེ་ Stable clusterསྦོམ་བཟོཝ་ཨིན་མས། GPI-APsགི་ཟས་བཅུད་ཀྱི་བར་ནའི་འབྲེལ་བ་འདི་གིས་ཡང་ ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ Golgiསྐྱེལ་འདྲེན་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་སྟོན་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཨིན་རུང་ C18-C16 ceramide འདི་ ER membrane ནང་ལུ་ཡོད་པའི་སྐབས་ p24 complex འདི་ Gas1-GFP དང་ཅིག་ཁར་ མཐུད་པའི་སྐབས་ལུ་ སོ་སོ་སྦེ་སྦོམ་སྦེ་མི་འཐོན་ནི་ཨིན་མས། ཐབས་ལམ་འདི་ acyl chain ceramideགི་ དམིགས་བསལ་གྱི་དངོས་ཁམས་དང་རྫས་སྦྱོར་གྱི་ཁྱད་ཆོས་ལུ་རག་ལསཔ་ཨིན་མས། བཅོས་མའི་གདོང་ཕྱོགས་ཀྱི་སྐྱེ་ལྡན་དངོས་ཁམས་རིག་པའི་ཞིབ་འཇུག་གིས་ རིངམོ་(C24)དང་ཐུང་ཀུ་(C18-C16)གཉིས་ཆ་ར་གིས་ གནས་རིམ་ཁ་ཕྱེ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ རིངམོ་སྦེ་ཡོད་མི་ acyl chain ceramides(C24)གིས་རྐྱངམ་ཅིག་ གུག་གུགཔ་མཐོ་དྲགས་སྦེ་བཟོ་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཕན་ཚུན་གཞི་བསྟུན་བརྒྱུད་དེ་ (༡༧, ༣༧, ༣༨)། TMED2གི་མི་གི་རིགས་མཚུངས་ Emp24གིས་ cytoplasmic lobulesནང་ལུ་ C18 ceramideལུ་གཞི་བཞག་པའི་ sphingomyelinདང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་དོ་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། རྡུལ་རྟེན་གྱི་སྒུལ་ཤུགས་(MD)བརྟག་དཔྱད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ C18དང་C26 ceramidesགཉིས་ཆ་ར་ Emp24 transmembrane helixགི་ cytoplasmic lobulesགི་མཐའ་འཁོར་ལུ་བསྡུ་གསོག་འབད་དེ་ཡོདཔ་ལས་ ཁོང་ལུ་ དགའ་གདམ་ཅོག་འཐདཔ་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་མཐོང་ནུག(པར་རིས་S6) འདི་གིས་ Emp24 གི་ transmembrane helix གིས་ གདོང་ཕྱོགས་ནང་ལུ་ མར་ཁུ་ཚུ་ འདྲ་མཉམ་མེད་པར་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ཚུགས་པའི་ བརྡ་མཚོན་སྟོནམ་ཨིན་མས། འ་ནི་འདི་ ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ འཕྲལ་ཁམས་ཅིག་གི་གྲུབ་འབྲས་ཅིག་ཨིན། འདི་བཟུམ་གྱི་ MD བརྡ་སྟོན་ཚུ་གིས་ཡང་ ether lipids (40) ཡོདཔ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན། དེ་འབདཝ་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ER26 གི་ lobules གཉིས་ཀྱི་ནང་ལུ་ C26 ceramide འདི་ ས་གནས་ནང་ མཐོ་དྲགས་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་ ཚོད་དཔག་འབདཝ་ཨིན། GPI-APའདི་ luminal lobulesནང་ལུ་ཐད་ཀར་དུ་ multivalentp24དང་ཅིག་ཁར་ འབྲེལ་འཐབ་སྟེ་ C26 ceramideའདི་ cytoplasmic lobulesནང་ལུ་ p24གི་མཐའ་འཁོར་ལུ་བསྡུ་གསོག་འབད་བའི་སྐབས་ལུ་ འདི་གིས་ ཇུ་རྩི་བསྡུ་གསོག་དང་ ལགཔ་གི་མཛུབ་མོ་བརྒྱུད་དེ་ གུག་གུགཔ་སྦེ་ཐོན་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། ER གཤེར་ཁུའི་ས་ཁོངས། (42). ཧེ་མའི་སྙན་ཞུ་ཚུ་གིས་ གྲོས་འཆར་བཀོད་མི་ཐབས་ལམ་ལུ་རྒྱབ་སྐྱོར་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། (༤༣, ༤༤) oligolectinsདང་ནད་འབུཔ་ དེ་ལས་ ceramideལུ་གཞི་བཞག་པའི་ glycosphingolipids(GSL)ལུ་ ནུས་གཟུགས་ཚུ་ མཉམ་སྦྲགས་འབད་མི་འདི་གིས་ GSLསྦོམ་སྦེ་བསྡུ་སྟེ་ གནས་རིམ་ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ ཕྱི་ཁར་འགྱུར་བཅོས་འགྱོ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། Iwabuchi དང་གཞན་མི་ཚུ་ རིངམོ་(C24)ཡོད་རུང་ ཐུང་ཀུ་མེད་པའི་སྐབས་ལུ་ GSL lactosylceramideལུ་མཐུད་དེ་ཡོད་མི་ multivalent ligandགིས་ ཆ་ཚན་སྦོམ་སྦེ་ཐོན་བཅུག་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས།
ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ anti-Golgi network(TGN)གི་ཆ་ཚད་འདི་གིས་ GPI-APདབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་དང་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་འདི་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིན་མས། འ་ནི་བསྡོམས་རྩིས་འདི་ GPI-AP oligomerization(36)གིས་ འདྲུད་བདའ་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ ཕབས་ནང་ལུ་མཐོང་མི་ ceramideགི་རིམ་སྒྲིག་གི་རིང་ཚད་ལུ་ཡང་ རག་ལསཔ་ཨིན་མས། ཨོམ་འཐུང་མི་ GPI-APལུ་ ether lipidལུ་གཞི་བཞག་པའི་ གཞི་རྟེན་ཡོད་རུང་ རྫས་སྦྱོར་གྱི་བཀོད་རིས་འདི་ acyl chain ceramideལས་ ཁྱད་པར་སྦོམ་སྦེ་རང་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ འཕྲལ་ཁམས་ཅིག་གི་ཞིབ་འཇུག་ནང་ལུ་ མར་ཁུ་གཉིས་ཆ་ར་ལུ་ འཕེལ་འགྱུར་གྱི་ཐད་ཁར་ གཟུགས་དང་རྫས་སྦྱོར་གྱི་ཁྱད་ཆོས་དང་ ལཱ་འགན་ཚུ་ ཅོག་རང་ཐདཔ་སྦེ་ཡོདཔ་སྦེ་ མཐོང་ནུག འདི་འབདཝ་ལས་ ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ ether lipidགི་ཆ་ཤེས་འདི་ ཕབས་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ C26 ceramideདང་ཅོག་རང་ཐདཔ་སྦེ་འོང་ནི་ཨིནམ་ལས་ འདི་གི་འགན་ཁུར་འདི་ GPI-APབསྡུ་སྒྲིག་དང་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་དོན་ལུ་ གྱིབ་མ་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ long-chain ceramideདང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་ནི་འདི་ཨིན་མས། འ་ནི་འོས་འབབ་འདི་ ད་ལྟོ་ཡང་ ཐད་ཀར་དུ་ བརྟག་དཔྱད་འབད་དགོཔ་ཡོད་རུང་ ཧེ་མའི་ཞིབ་འཇུག་གིས་ Golgiགི་གཟུགས་ནང་ལུ་ acyl chain ceramideརིངམོ་གི་སྐྱེལ་འདྲེན་འདི་ cytoplasmic transfer proteinsགིས་ འབད་མི་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་རུང་ ཕབས་བཟུམ་གྱི་ GPI anchorsགི་མཉམ་སྦྱོར་ལུ་རག་ལསཔ་ཨིན་མས། འདི་འབདཝ་ལས་ འཕེལ་འགྱུར་གྱི་ཐབས་ལམ་འདི་གིས་ སྐྱེལ་འདྲེན་གྱི་ཐབས་ལམ་གཅིག་ནང་ལུ་ acyl chain ceramideདང་ GPI-AP(13, 16, 20, 46, 47)ཚུ་ གདམ་ཁ་རྐྱབ་སྟེ་ སྐྱེལ་འདྲེན་འབད་ཚུགས་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས།
ཕབས་དང་ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ GPI-APབསྡུ་སྒྲིག་དང་ གཞན་མི་ཟས་བཅུད་ཚུ་ལས་ ཁ་ཕྱེ་འགྱོ་མི་འདི་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཁ་ཐོག་ལུ་མ་ལྷོད་པའི་ཧེ་མ་ལས་རང་ འབྱུང་དོ་ཡོདཔ་ཨིན་མས། Paladino དང་གཞན་ཡང་། ཨོམ་འཐུང་མི་གི་ཁམས་ཕྲན་ནང་ལུ་ GPI-APའདི་ GPI-APsགི་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་དོན་ལུ་ ཁག་ཆེཝ་ཅིག་ཨིནམ་མ་ཚད་ GPI-APsདང་ སྐྱེ་ལྡན་ལས་སྣ་ཚུ་ཡང་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིན་མས། ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཁ་ངོས། ཕབས་ནང་ལུ་ ཞིབ་འཇུག་འདི་གིས་ ERགུ་ཡོད་པའི་ C26 ceramideལུ་བརྟེན་པའི་ GPI-APསྡེ་ཚན་གྱིས་ plasma membraneགུ་ཡོད་པའི་ GPI-APགི་སྡེ་ཚན་ལས་སྡེ་དང་ ལཱ་འགན་ཚུ་ ཚད་འཛིན་འབད་ཚུགསཔ་སྦེ་སྟོན་ནུག(24, 49) དཔེ་ཚད་འདི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ GhLag1ཁམས་ཕྲན་འདི་ GPIབཀག་ཆ་འབད་མི་དང་ ཡང་ན་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་གྱང་གཅིག་ལུ་ཐོ་ཕོག་མི་སྨན་རིགས་ལུ་ ཚ་རིམས་ཡོདཔ་སྦེ་ཨིན་མས། ཇི་པི་ཨའི་-ཨེ་པི་འཛོལ་བ། ཨིན་རུང་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཁ་ཐོག་ལུ་ ལཱ་འགན་ལས་སྡེ་འདི་ མར་ཁུ་གི་རིང་ཚད་ལུ་གཞི་བཞག་སྟེ་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་ཐབས་ལམ་ཐོག་ལས་ ER ལས་ ལས་རིམ་བཟོ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ བརྟག་དཔྱད་འབད་ནི་འདི་ ང་བཅས་ཀྱི་མ་འོངས་པའི་ཞིབ་འཚོལ་གྱི་དོན་ཚན་ཅིག་ཨིན།
ལཱ་འདི་ནང་ལུ་ལག་ལེན་འཐབ་མི་ Saccharomyces cerevisiae གི་རིགས་འདི་ ཐིག་ཁྲམ་S1ནང་ལུ་ ཐོ་བཀོད་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན། ཁམས་ཕྲན་པར་བཏབ་ནི་གི་དོན་ལས་ SCLIM གི་ MMY1583 དང་ MMY1635 གི་རིགས་ཚུ་ W303 གི་རྒྱབ་ཁུངས་ནང་ལུ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འ་ནི་རིགས་མཚན་ཚུ་གིས་ Sec13-mCherry འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ཀྱི་རྟགས་བཀོད་མི་འདི་ pFA6a plasmid གི་ཐོག་ལས་ polymerase chain reaction (PCR) གི་ཐབས་ལམ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། GAL1 གོང་འཕེལ་བཏང་མི་གི་ཚད་འཛིན་འོག་ལུ་ འོད་མདངས་ཅན་གྱི་ཟས་བཅུད་ཡོད་མི་ Mid2-iRFP བཏོན་མི་གི་རིགས་འདི་ གཤམ་གསལ་ལྟར་དུ་བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། pKTiRFP-KAN vector ལས་ iRFP-KanMx གོ་རིམ་གྱི་ PCR རྒྱ་སྐྱེད་འབད་ནི། Mid2-iRFP རིགས་མཚན་གྱི་རིམ་པ་འདི་ རྒྱ་སྐྱེད་འབད་དེ་ GAL1 གོང་འཕེལ་བཏང་མི་ནང་ལུ་ རིགས་མཚུངས་བཟོ་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ འ་ནི་འདི་ གཅིག་ཁར་བསྡོམ་གྱི་པཱལསི་མིདྲ་ pRS306 གི་ Not I-Sac I ས་ཁོངས་ནང་ལུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམ་ཡོདཔ་ཨིན། གྲུབ་འབྲས་ཐོན་མི་ plasmid pRGS7འདི་ Pst Iདང་ཅིག་ཁར་ URA3གི་ས་སྒོ་ནང་ལུ་ གཅིག་ཁར་བསྡོམ་ནི་གི་དོན་ལས་ རིམ་སྒྲིག་འབད་ནུག
Gas1-GFPབསྲེ་སྦྱོར་གྱི་རིགས་མཚན་འདི་ centromere (CEN) plasmidནང་ལུ་ GAL1གོང་འཕེལ་བཏང་མི་གི་ཚད་འཛིན་འོག་ལུ་བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་ཡང་ གཤམ་གསལ་ལྟར་དུ་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP གོ་རིམ་འདི་ pRS416-GAS1-GFP པཱལསི་མིདྲ་ ༼༢༤༽ ༼ཨེལ་པོ་པོ་ལོ་གི་གསོལ་རས་༽ ལས་ པི་སི་ཨར་གྱི་ཐོག་ལས་ རྒྱ་སྐྱེད་འབད་དེ་ སི་ཨི་ཨེན་པཱལསི་མིདྲ་ pBEVY-GL LEU2 ༼སི་གི་གསོལ་རས་༽ གི་ Xma I–Xho I ས་ཁོངས་ནང་ལུ་ རིགས་མཚུངས་བཟོ་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མི་ལར་; Addgene པཱལསི་མིཌ་ཨང་ ༥༡༢༢༥; 51225; RRID: ཨེ་ཌི་ཇིན་_༥༡༢༢༥). གྲུབ་འབྲས་ཐོན་མི་ plasmid འདི་ pRGS6 ཟེར་ མིང་བཏགས་ཡོདཔ་ཨིན། Axl2-GFP གི་རིགས་མཚན་འདི་ pBEVY-GL LEU2 vector གི་ GAL1 ཁྱབ་སྤེལ་འབད་མི་གི་ཚད་འཛིན་འོག་ལུ་ཡང་ བཀོད་དེ་ཡོདཔ་ད་ འདི་གི་བཟོ་བཀོད་འདི་ གཤམ་གསལ་ལྟར་ཨིན་མས། Axl2-GFP གོ་རིམ་འདི་ pRS304-p2HSE-Axl2-GFP པཱལསི་མིདྲ་ ༼༢༣༽ ལས་ པི་སི་ཨར་གྱི་ཐོག་ལས་ རྒྱ་སྐྱེད་འབད་དེ་ pBEVY-GL LEU2 vector གི་ Bam HI-Pst I ས་ཁོངས་ནང་ལུ་ རིགས་མཚུངས་བཟོ་བཅོས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། གྲུབ་འབྲས་ཐོན་མི་ plasmid འདི་ pRGS12 ཟེར་ མིང་བཏགས་ཡོདཔ་ཨིན། ཞིབ་འཇུག་འདི་ནང་ལུ་ལག་ལེན་འཐབ་མི་ oligonucleotides གི་རིམ་པ་འདི་ ཐིག་ཁྲམ་S2ནང་ལུ་ ཐོ་བཀོད་འབད་དེ་ཡོདཔ་ཨིན།
རིགས་འདི་ ༠.༢% ཨེ་ཌི་ནིན་དང་ ༢% གུ་རུ་ [YP-dextrose (YPD)] ༢% ར་ཕི་ནོ་སི་ [YP-raffinose] ཕྱུགཔོ་ཕབས་བཏོན་པའི་ཟས་བཅུད་ p (YP) བརྒྱུད་ལམ་ (༡ % ཕབས་བཏོན་པའི་ཟས་བཅུད་དང་ ༢% ཟས་བཅུད་ ept) ཚུ་ ལྷན་ཐབས་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ༼YPR༽] ཡང་ན་ 2% galactose [YP-galactose (YPG)] ནག་རྫས་འབྱུང་ཁུངས་ལྟར་ ཡང་ན་ བཅོས་མའི་ཉུང་མཐའི་བརྒྱུད་ལམ་ (0.15% ཕབས་ནའི་ཊོ་ཇེན་གཞི་བརྟེན་དང་ 0.5% ཨེམ་མོ་ནིཡམ་སལ་ཕེཊ་) འཚོ་བཅུད་ཀྱི་ཆེད་དུ་དགོས་མཁོའི་ཨེ་མིན་ཨོ་ཨེ་སིཌ་དང་གཞི་འགྱམ་འོས་འཚམ་དང་ 2% ཉུང་མཐའི་གུ་ལུའོ་སི། ༼བཅོས་མའི་གཱ་ལག་ཊོ་སི་ཉུང་མཐའ་བརྒྱུད་ལམ་༽ ནག་རྫས་ཀྱི་ཐོན་ཁུངས་ཅིག་སྦེ་ཨིན།
དུས་ཚོད་ངོ་མའི་པར་རིས་ཚུ་གི་དོན་ལས་ དྲོད་ཤུགས་ལུ་ཚོར་ཤུགས་ཅན་གྱི་ sec31-1 རིགས་འགྱུར་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ GAL1 གོང་འཕེལ་བཏང་མི་གི་འོག་ལུ་ བཟོ་བཀོད་འདི་ YPR བརྒྱུད་ལམ་ནང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༢༤°C ལུ་ མཚན་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ འཕེལ་འགྱུར་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། YPG ནང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༢༤ ལུ་ ཆུ་ཚོད་༡ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་པའི་ཤུལ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ SG ནང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༣༧ ལུ་ སྐར་མ་༣༠ གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ ཕྱི་ཁར་བཏོན་ནིའི་དོན་ལུ་ དྲོད་ཚད་༢༤ ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། Concanavalin A འདི་ ཤེལ་གྱི་བཤུད་ཤོག་གུར་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ བརྟན་ཏོག་ཏོ་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་དང་ SCLIM གིས་ པར་བཏབ་ཡོདཔ་ཨིན། SCLIM འདི་ Olympus IX-71 གཡོ་སྒྱུ་ཅན་གྱི་འོད་མདངས་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་དང་ UPlanSApo 100×1.4 ཨང་གྲངས་ཀྱི་འོད་མདངས་མར་ཁུ་མཐོང་ཤེལ་ ༼Olympus༽ མགྱོགས་ཚད་མཐོ་དྲགས་དང་ བརྡ་མཚོན་མཐོ་དྲགས་ལས་ སྐད་ཀྱི་ཆ་ཚད་བསྒྱིར་མི་ ཌིསིཀ་ཀོན་ཕོ་ཀཱལ་པར་འཕྲུལ་ ༼Yokogawa Electric དང་ སྲོལ་སྒྲིག་པར་རིས་༽ (Hamamatsu Photonics) གིས་ མཐའ་མཇུག་ཆེར་བསྐྱེད་འབད་མི་ ×266.7 དང་ གློག་རྫས་ཚུ་ བསྒྱུར་བཅོས་འབད་མི་ གློག་རྫས་མཉམ་སྦྱོར་འབད་མི་ པར་ཆས་ཚུ་ ཆེར་བསྐྱེད་འབད་ཚུགས་པའི་ འོད་ཤེལ་ལམ་ལུགས་ཅིག་ བྱིན་ཚུགས། (Hamamatsu Photonics) (༢༡) པར་རིས་བསྡུ་ལེན་འདི་ སྲོལ་སྒྲིག་མཉེན་ཆས་ (Yokogawa Electric) གིས་འབདཝ་ཨིན། ༣ཌི་པར་རིས་ཚུ་གི་དོན་ལས་ ང་བཅས་ཀྱིས་ དམིགས་གཏད་ཀྱི་མིག་ཤེལ་འདི་ ཀེར་ལངས་སྦེ་ དར་ཁྱབ་བཏང་ནི་གི་དོན་ལས་ རང་བཞིན་བཟོ་མི་ པི་ཛོ་ཨི་ལེག་ཀྲིག་ བཀོལ་སྤྱོད་འབད་མི་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འོད་ཀྱི་ཆ་ཤས་ཚུ་ ༡༠༠ ཨེན་ཨེམ་གྱི་ས་ཁར་ བང་རིམ་ཅིག་ནང་ བསྡུ་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། Z-stack པར་རིས་འདི་ 3D voxel data ལུ་བསྒྱུར་བཅོས་འབད་དེ་ཡོདཔ་དང་ བསྒྱིར་བའི་སྲབ་འཁོར་ཀོན་ཕོ་ཀཱལ་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་གྱི་དོན་ལས་ གྲུབ་མཐའི་གནས་ཚད་ཁྱབ་སྤེལ་གྱི་ལཱ་འགན་འདི་ Volocity software ༼PerkinElmer༽ གིས་ ཌི་ཀོན་བོ་ལུ་ཤཱན་བྱ་རིམ་གྱི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། མཉམ་འབྲེལ་ས་གནས་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ Volocity མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ སྐྱེལ་འདྲེན་རྩིས་ཏེ་ ERES འཇལ་ཡོདཔ་ཨིན། ཐིག་པར་བཤུས་དབྱེ་དཔྱད་འདི་ MetaMorph མཉེན་ཆས་ ༼རྡུལ་རྟེན་ཐབས་འཕྲུལ་༽ ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་གལ་གནད་གཏན་འབེབས་བཟོ་ནི་ལུ་ GraphPad Prism མཉེན་ཆས་ལག་ལེན་འཐབ། མཇུག་གཉིས་ཀྱི་སློབ་ཕྲུག་གི་ t-test དང་ སྤྱིར་བཏང་གི་ ཕྱོགས་གཅིག་གི་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་ ཁྱད་པར་ (ANOVA) བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ སྡེ་ཚན་ཚུ་གི་བར་ན་ ཁྱད་པར་འདི་གིས་ P <0.05 (*) ལུ་ གལ་གནད་ཅན་གྱི་ ཕན་གནོད་ཡོདཔ་སྦེ་ བརྩི་དོ་ཡོདཔ་ཨིན།
Gas1-GFP གི་འོད་མདངས་ཕྲ་མཐོང་ཆེ་ཤེལ་གྱི་དོན་ལས་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ YPD ནང་ལུ་ ནུབ་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ འཛུགས་སྐྱོང་འབད་དེ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ བསྡུ་ལེན་འབད་དེ་ ཕོསི་ཕེཊ་གི་ཚྭ་ཆུ་གིས་ ཚར་གཉིས་བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ འཁྱེག་གུ་ལུ་ སྐར་མ་༡༥དེ་ཅིག་གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ ཕྲ་གཟུགས་མཐོང་ཆས་ཀྱི་འོག་ལུ་ ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མཁོ་སྒྲུབ་ཀྱི་དོན་ལུ་ དམིགས་གཏད་མཐོང་ཤེལ་དང་ L5 (GFP) ཚགས་མ་ ཧ་མ་མཱ་ཙུ་པར་ཆས་ དེ་ལས་ ལག་ལེན་སུའུཊ་ཨེགསི་ (LAS X) མཉེན་ཆས་ཚུ་ བཙུགས་ཏེ་ཡོད་མི་ Leica DMi8 ཕྲ་གཟུགས་མཐོང་ཆས་ (HCX PL APO 1003/1.40 oil PH3 CS) འདི་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། .
དཔེ་ཚད་ཚུ་ སྐར་མ་༡༠གི་རིང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༦༥གི་ནང་ལུ་ ཨེསི་ཌི་ཨེསི་དཔེ་ཚད་ཀྱི་བཱ་ཕར་དང་གཅིག་ཁར་ རང་བཞིན་བཟོ་བཅོས་འབད་ཞིནམ་ལས་ ཨེསི་ཌི་ཨེསི་-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) གི་ཐོག་ལས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོདཔ་ཨིན། immunoblotting དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལུ་ དཔེ་ཚད་ ༡༠ μl འདི་ ལམ་རེ་ལུ་ བཀལ་ཡོདཔ་ཨིན། ནུས་གཟུགས་གཙོ་བོ་ རི་བོང་གི་ རིགས་མཚུངས་ནུས་གཟུགས་ ༡:༣༠༠༠ གི་ནང་ལུ་ རི་བོང་གི་རིགས་མཚུངས་ནུས་གཟུགས་ Emp24 འདི་ ༡:༥༠༠ གི་ནང་ལུ་ དེ་ལས་ རི་བོང་གི་རིགས་མཚུངས་ནུས་གཟུགས་ GFP ༼ཨེཆ་རིཛ་མེན་ལས་ གསོལ་རས་༽ ༡:༣༠༠ གི་ནང་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ། བྱི་ཙི་གི་རིགས་མཚན་གཅིག་པའི་ནུས་གཟུགས་ Pgk1 ནུས་གཟུགས་འདི་ ༡:༥༠༠༠ གི་བཞུ་ཚད་ནང་ལུ་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། ༼J. de la Cruz ལས་ གསོལ་རས་ཅིག་ཨིན།༽ གཉིས་པ་ ནུས་གཟུགས་: ཧོར་སེར་ཌིཤ་པེ་རོ་ཨོག་སི་ཌེསི་ (HRP) མཉམ་སྦྱོར་གྱི་ ར་གི་ རི་བོང་ནད་འབུཔ་ ཇི་ (IgG) འདི་ ༡:༣༠༠༠ གི་ ཆུ་ཚད་ནང་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། (Pierce) HRP-conjugated goat anti-mouse IgG འདི་ ༡:༣༠༠༠ གི་ ཆུ་ཚད་ནང་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། (Pierce) ནད་ཐུབ་ལན་འདེབས་ས་ཁོངས་འདི་ རྫས་ཁམས་འོད་མདངས་ཐབས་ལམ་གྱི་ཐོག་ལས་ བལྟ་བརྟོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ༼Thermo Fisher Scientific༽
༼༣༡༽ ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་འབད་ རང་བཞིན་གྱི་ནད་རིགས་བཀག་ཐབས་ཀྱི་ བརྟག་དཔྱད་འདི་ མཐུན་རྐྱེན་ཅན་གྱི་ ER དཔྱ་རྩིས་གུར་ལུ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུས་ན་ ཕབས་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ TNE བཱ་ཕར་ [50 mM tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1 mM ཕིན་ནཱལ་མི་ཐིལ་སུལ་ཕོ་ནཱལ་ཕུ་ལོ་རཱའིཌ་དང་ ཟས་བཅུད་བཀག་ཆ་སླ་བསྲེ་) དང་ཅིག་ཁར་ 600 nm ( OD600) གིས་ ཌི་ཨོཔ་༡༠༠ ལུ་ བཀྲུ་དགོ། འདི་ཡང་ ཤེལ་གྱི་ཕྱེངམ་ཚུ་གིས་ བཅག་ཞིནམ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་རྡོ་རོ་དང་ ཤེལ་གྱི་ཕྱེངམ་ཚུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ ཆུ་ནང་ལུ་ཡོད་པའི་ཆུ་འདི་ དྲོད་ཚད་༤གི་ནང་ལུ་ སྐར་མ་༡༥གི་རིང་ལུ་ ཇི་༡༧༠༠༠གི་ནང་ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཕྲ་འབུཔ་འདི་ TNE ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཀག་བཞག་སྟེ་ མཐའ་མཇུག་གི་ ཆ་ཚད་བརྒྱ་ཆ་༡ ལུ་ digitalis saponin ཁ་སྐོང་བཀལ་ཡོདཔ་ཨིན། འཕྱེལ་འགྱོ་མི་འདི་ ཆུ་ཚོད་༡གི་རིང་ལུ་ དྲོད་ཚད་༤ལུ་ བསྒྱིར་ཞིནམ་ལས་ བཞུ་མ་ཚུགས་པའི་ཆ་ཤས་ཚུ་ དྲོད་ཚད་༤ལུ་ སྐར་མ་༦༠གི་རིང་ལུ་ གྷ་རམ་༡༣༠༠༠ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP immunoprecipitation གི་དོན་ལས་ དང་པ་རང་ དཔེ་ཚད་འདི་ agarose beads ༼ChromoTek༽ སྟོངམ་ཅིག་དང་གཅིག་ཁར་ དྲོད་ཚད་༤གི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་༡གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཞིནམ་ལས་ GFP-Trap_A ༼ChromoTek༽ དང་ཅིག་ཁར་ དྲོད་ཚད་༤གི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་༣གི་རིང་ལུ་བཙུགས་དགོཔ་ཨིན། ནད་འབུཔ་བཀག་ཐབས་འབད་མི་ ཕྱེངམ་ཚུ་ བརྒྱ་ཆ་༠.༢གི་ digoxigenin ཡོད་མི་ TNE དང་ཅིག་ཁར་ ཚར་ལྔ་བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ SDS དཔེ་ཚད་ཀྱི་བཱ་ཕར་དང་གཅིག་ཁར་ བཏོན་ཞིནམ་ལས་ SDS-PAGE གུ་ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ ནད་རིགས་བཀག་ཐབས་བརྟག་དཔྱད་ཀྱི་ཐོག་ལས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན།
(༣༡) ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ འབྲེལ་མཐུད་ཀྱི་ཐག་བཅད་འདི་ ERདཔྱ་རྩིས་ནང་ལུ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུ་བ་ཅིན་ མཐོ་དྲགས་སྦེ་ཡོད་མི་ ER དཔྱ་རྩིས་འདི་ ༠.༥ mM dithiobis(succinimidyl propionate) དང་ཅིག་ཁར་ བཙུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན། འབྲེལ་མཐུད་ཀྱི་འགྱུར་ལྡོག་འདི་ glycine ཁ་སྐོང་བཀོད་དེ་ བསད་ཡོདཔ་ཨིན། (50 mM མཐའ་མའི་ཆ་ཚད་ སྐར་མ་ ༥ དང་ ༢༠°C)
ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ (༥༠) རི་དྭགས་ཀྱི་དབྱེ་བ་དང་ GhLag1 གི་རིགས་མཚན་ནང་ལུ་ ceramide གི་ MS དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། མདོར་བསྡུས་ན་ ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ ༣༠°C ལུ་ YPD ནང་ མགྱོགས་ཚད་ཀྱི་གནས་རིམ་ (༣ ལས་ ༤ OD600 units/ml) ལུ་ འཕེལ་འགྱུར་འབད་དེ་ ཁམས་ཕྲན་ ༢༥×༡༠༧ བསྡུ་བསྒྱོམ་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཁོང་གི་བཅུད་བསྒྱུར་འདི་ trichloroacetic acidགིས་ བསད་བཏངམ་ཨིན། བཏོན་པའི་བཞུ་རྫས་ [ཨི་ཐ་ནོལ་དང་ཆུ་ ཨི་ཐར་ པའི་རི་ཌིན་དང་ ༤.༢ ཨེན་ཨེམ་མོ་ནིཡམ་ཧའི་ཌོ་ཨོག་སའིཌ་ (༡༥:༡༥:༥:༡:༠.༠༡༨ v/v)] དང་ ནང་འཁོད་ཚད་གཞི་ C17 སེ་ར་མའིཌ་ (༨༦༠༥༡༧, Avanti polar lipid) སྤུས་ཚད་ ༡.༢ nmol ལག་ལེན་འཐབ། མོ་ནོ་མེ་ཐི་ལ་མིན་གྱི་རྫས་སྦྱོར་ [མེ་ཐ་ནོལ་དང་ཆུ་ ཨེན་-བུ་ཊ་ནོལ་དང་ མེ་ཐི་ལ་མིན་གྱི་ཐབས་ཤེས་ (༤:༣:༡:༥ v/v)] ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཆུ་བཏོན་པའི་ སྐྱུར་རྫས་ཆུ་བསྲེས་སྦྱོར་གྱི་ལཱ་འབད་ཞིནམ་ལས་ ཆུ་ཚངམ་སྦེ་ཡོད་པའི་ ཨེན་-བུ་ཊ་ནོལ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཚྭ་མེདཔ་བཟོ། མཐའ་མཇུག་ཁར་ བཏོན་ཐངས་འདི་ བཞུ་རྫས་ [chloroform/methanol/water (2:7:1) + 5 mM ammonium acetate] ནང་ལུ་ ལོག་སྟེ་རང་ བཞུ་བཅུག་སྟེ་ མང་ཚོགས་འོད་རླབས་ཚད་འཇལ་ཆས་ནང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། སྣ་མང་འགྱུར་ལྡོག་ལྟ་རྟོག་ (MRM) འདི་ sphingolipid རྡུལ་རྟེན་ངོས་འཛིན་དང་ འབོར་ཚད་ཀྱི་དོན་ལུ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཀྲི་ཨེསི་ཀིའུ་ཝེན་ཀྲེཇ་ ཀྲར་ཀྲི་རི་ ཀོ་གྲུ་པོལ་མཱསི་ཨིསི་པེག་ཀྲོ་མི་ཀྲར་ ༼ཐར་མོ་ཕི་ཤར་མཚོན་རིག་༽ འདི་ མར་ཁུ་དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་དོན་ལས་ འཕྲུལ་གྱི་ནེ་ནོ་ཕོལོ་གློག་རྡུལ་འབྱུང་ཁུངས་ ནེ་ནོ་མེ་ཀྲི་ཨེཆ་གྲི་ ༼ཨེ་ཌི་ཝིའོན་སྐྱེ་ལྡན་མཚོན་རིག་ ཨི་ཐ་ཀ་ ནིའུ་ཡོག་༽ བཙུགས་ཏེ་ཡོདཔ་ཨིན། ཁ་ཐུག་རྐྱབ་པའི་ནུས་ཤུགས་འདི་ སེ་ར་མའིཌ་དབྱེ་ཁག་རེ་རེ་གི་དོན་ལུ་ ཡར་དྲག་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། MS གནས་སྡུད་འདི་ ངེས་གཏན་ཐབས་ལམ་ནང་ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། སྐྱེ་ལྡན་རིག་པའི་འདྲ་དཔེ་རེ་ལུ་ མར་ཁུ་གི་བརྡ་མཚོན་འདི་ རང་དབང་ཅན་གྱི་འཇལ་ཚད་གསུམ་གྱི་བར་ན་ཨིན་མས།
(༣༡) ནང་ལུ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ ཁམས་ཕྲན་ (༨༠༠×༡༠༧) གིས་ Gas1-GFP བཏོན་མི་འདི་ རང་བཞིན་གྱི་ནད་འབུཔ་བཀག་ཐབས་ལུ་ བརྟེན་ཏེ་ཨིན་མས། གཙང་མ་བཟོ་ཡོད་པའི་ Gas1-GFP འདི་ SDS-PAGE གིས་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ polyvinylidene fluoride (PVDF) གི་གདོང་ཕྱོགས་ལུ་སྤོ་བཤུད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། འཚོ་བཅུད་འདི་ PVDF ལུ་ amide black དང་ཅིག་ཁར་ ཚོས་གཞི་བཏང་སྟེ་ མཐོང་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP band འདི་ PVDF ལས་བཏོག་ཞིནམ་ལས་ མི་ཐ་ནོལ་གྱི་ཐོག་ལས་ ཚར་༥ དང་ ཚར་གཅིག་ ཁུ་བ་ཅན་གྱི་ chromatography-MS (LC-MS) གི་ཆུ་གིས་ བཀྲུ་དགོཔ་ཨིན། 500μl 0.3 M inoAc (pH 4.0) དང་ བཱ་ཕར་དང་ 500μl 1 M sodium nitrite སླ་བསྲེ་བསྲེ་སྟེ་ 37°C ལུ་ ཆུ་ཚོད་3 གི་རིང་ལུ་ མར་ཁུ་གི་ཆ་ཤེས་འདི་ Gas1-GFP དང་ inocosamine གི་བར་ན་ བཏོན་བཏངམ་ཨིན། (༥༡)། དེ་གི་ཤུལ་ལས་ གྱིབ་མ་འདི་ LC-MS གི་ཆུ་གིས་ ཚར་བཞི་བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ ཁང་མིག་གི་དྲོད་ཚད་ནང་ སྐམ་བཏང་ཞིནམ་ལས་ དབྱེ་དཔྱད་མ་འབད་ཚུན་ཚོད་ -༨༠°C ལུ་ ནཱའི་ཊོ་ཇེན་གནས་སྟངས་ནང་ གསོག་འཇོག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཚད་འཛིན་གྱི་དོན་ལས་ བརྟག་དཔྱད་རེ་རེ་གི་དོན་ལས་ PVDF གྱིབ་མ་གི་དཔེ་ཚད་སྟོངམ་ཅིག་ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP ལས་བཏོན་པའི་མར་ཁུ་འདི་ MS གིས་ འགྲེལ་བཤད་རྐྱབ་ཡོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། (50) མདོར་བསྡུས་ན་ GPI-lipid ཡོད་པའི་ PVDF strips ཚུ་ 75μl གི་ ངན་པའི་ བརྡུངས་རྫས་ [chloroform/methanol (1:2) + 5 mM ammonium acetate] ནང་ ལོག་སྟེ་ བཀག་བཞག་སྟེ་ གློག་རྡུལ་སྤྲིན་བཏང་བའི་ གློག་རྫས་ (ESI)-MRM/MS དབྱེ་དཔྱད་ཀྱི་ sphingolipid རིགས་སྣ་ (TSQ Vantage) བརྒྱུད་དེ་ འགྱོ་ཡོདཔ་ཨིན། གནད་དོན་འདི་ནང་ MS གནས་སྡུད་འདི་ ལོག་པའི་གློག་རྡུལ་ཐབས་ལམ་ནང་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན།
ཧེ་མ་བཀོད་དོ་བཟུམ་སྦེ་ GPI གི་གཞི་བཙུགས་ཀྱི་མར་ཁུ་ཆ་ཤས་འདི་ [3H]-inositol-labeled GPI-AP (16) ལས་སོ་སོ་སྦེ་བཏོན་ཡོདཔ་ཨིན། མར་ཁུ་ཚུ་ བཞུ་རྫས་ལམ་ལུགས་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བང་རིམ་སྲབ་ཤོག་ཤོ་གི་ཐོག་ལས་ དབྱེ་བ་ཕྱེ་སྟེ་ FLA-7000 (Fujifilm) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ མཐོང་སྣང་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན།
Gas1-GFP (600×107) བཏོན་མི་ཁམས་ཕྲན་ཚུ་ TNE buffer དང་ཅིག་ཁར་ TNE buffer གི་ཐོག་ལས་ ཚར་གཉིས་བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ ཤེལ་གྱི་ཕྱེངམ་ཚུ་གིས་ བཅག་ཞིནམ་ལས་ ཁམས་ཕྲན་གྱི་ཕྱགས་སྙིགས་དང་ ཤེལ་གྱི་ཕྱེམ་ཚུ་བཏོན་བཏང་ནི་གི་དོན་ལས་ དབུགས་གཏོང་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ ཆུ་འདི་ དྲོད་ཚད་༤གི་ནང་ལུ་ ཆུ་ཚོད་༡གི་རིང་ལུ་ ཇི་༡༧༠༠༠ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། ཕྲ་ཕུང་འདི་ TNE ནང་ལུ་བཀྲུ་ཞིནམ་ལས་ 1 U PI-PLC (Invitrogen) དང་གཅིག་ཁར་ TNE ནང་ལུ་ ༠.༢% digitalis saponin ཡོད་མི་འདི་ ཆུ་ཚོད་༡ གི་རིང་ལུ་ ༣༧°C ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། བཞུ་ཁུ་སྨན་བཅོས་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ གྱིབ་མ་འདི་ ཆུ་ཚོད་༡ གི་རིང་ལུ་ ༤°C ལུ་ ༡༧༠༠༠ g ལུ་ དབུགས་གཏོང་ལེན་གྱི་ཐོག་ལས་ བཏོན་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP འདི་ ནད་འབུཔ་བཀག་ཐབས་ལུ་ ཆུ་འདི་ GFP-Trap_A ༼ChromoTek༽ དང་ཅིག་ཁར་ དྲོད་ཚད་༤°C ལུ་ ནུབ་མོ་གཅིག་གི་རིང་ལུ་ བཙུགས་ཡོདཔ་ཨིན། SDS-PAGE གིས་ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོད་མི་ Gas1-GFP འདི་ Coomassie གི་འོད་མདངས་སྔོན་པོ་གིས་ ཚོས་གཞི་བཏང་ཡོདཔ་ཨིན། Gas1-GFP གི་ཚོས་གཞི་འདི་ ཆུ་གཡུར་གྱི་མཐའ་འཁོར་ལུ་ཡོད་པའི་ ཐལཝ་ལས་བཏོག་བཏང་ཞིནམ་ལས་ iodoacetamide དང་ dithiothreitol གི་ཐོག་ལས་ མར་ཕབ་འབད་བའི་ཤུལ་ལས་ trypsin གི་ཐོག་ལས་ བཞུ་བཅུག་ནུག བཏོན་ཞིནམ་ལས་ ཊི་རིཔ་ཊིག་པེཔ་ཊའིཌ་དང་ པེཔ་ཊའིཌ་ཚུ་ ཇི་པི་ཨའི་-གཱལའི་ཀཱན་དང་གཅིག་ཁར་ སྐམ་བཏང་། སྐམ་པའི་པེབ་ཊའིཌ་འདི་ཆུ་ ༢༠ μl ནང་བཞུ་བཅུག་ཡོད། LC ནང་ལུ་ཆ་ཤས་ (8μl) བཙུགས་དགོ། དམིགས་བསལ་གྱི་གནས་སྟངས་ནང་ལུ་ པེབ་ཀྲའིཌ་ཚུ་ སོ་སོ་སྦེ་བཏོན་ནི་གི་དོན་ལས་ octadecylsilane (ODS) ཀ་ཆེན་ (Develosil 300ODS-HG-5; ནང་ནའི་རྒྱ་ཚད་ ༡༥༠mm×༡.༠mm; Nomura Chemical, Aichi Prefecture, Japan) འགྲུལ་འཕྲིན་གྱི་གནས་རིམ་འདི་ བཞུ་རྫས་ཨེ་ (༠.༠༨% ཕོར་མིག་ཨེ་སིཌ་) དང་ བཞུ་རྫས་བི་ (༠.༡༥% ཕོར་མིག་ཨེ་སིཌ་ ༨༠% ཨེ་སི་ཊོ་ནི་ཊི་རིལ་ནང་) ཨིན། Accela HPLC ལམ་ལུགས་ (Thermo Fisher Scientific, Boston, Massachusetts) འདི་ སྐར་མ་༥ གི་ནང་འཁོད་ལུ་ བཞུ་རྫས་ A དང་ཅིག་ཁར་ སྐར་མ་༥ གི་རིང་ལུ་ ༥༠ μl min-1 གི་རྒྱུན་འགྲུལ་གྱི་ཚད་གཞི་ནང་ ཀ་ཆེན་འདི་ བཏོན་བཏང་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་དང་ དེ་ལས་ བཞུ་རྫས་ B གི་ཆ་ཚད་འདི་ བརྒྱ་ཆ་༤༠ ལུ་ཡར་སེང་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། , ཡུ་ནའི་ཊེཊ་ཨི་སི་ཊེཊ།). འདི་ཡང་ འཕྲོ་མཐུད་དེ་རང་ ESI གློག་རྡུལ་གྱི་ཐོན་ཁུངས་ནང་ལུ་ འགོ་བཙུགས་ཡོདཔ་ད་ tryptic peptides དང་ GPI-glycans ཚུ་ LTQ Orbitrap XL གིས་ དབྱེ་དཔྱད་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། MS གཞི་སྒྲིག་ནང་ མཆིནམ་གྱི་འབྱུང་ཁུངས་ཀྱི་ གློག་ཤུགས་དེ་ ༤.༥ kV ལུ་གཞི་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་ད་ བརྗེ་སོར་གྱི་མཆིནམ་གྱི་དྲོད་ཚད་དེ་ ༣༠༠°C ལུ་བཞག་ཡོདཔ་ཨིན་པས། མཆིན་པའི་གློག་ཤུགས་དང་ དུང་ཅུང་མཐོང་ཤེལ་གྱི་གློག་ཤུགས་འདི་ ༡༥ ཝི་དང་ ༥༠ ཝི་ལུ་ གཞི་སྒྲིག་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། MS གནས་སྡུད་འདི་ གློག་རྡུལ་ཐབས་ལམ་ནང་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། (60,000 གི་ཐག་གཅོད་དང་། ས་ཡ་རེ་ལུ་ ཆ་ཤས་༡༠ གི་ བརྡ་རྟགས་གཏན་གཏན་) བརྡ་རྟགས་ཁྱབ་ཚད་ 300/m/z བརྡ་རྟགས་/གློག་ཤུགས་ཆ་ཚད་ (m/z) 3000 ནང་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། ཁ་ཐུག་རྐྱབ་མི་འདི་གིས་ འབྲེལ་བ་འཐབ་མི་ (CID)].
MD བརྡ་སྟོན་ཚུ་ GROMACS (52) མཉེན་ཆས་དང་ MARTINI 2 ཤུགས་ས་སྒོ་ (53-55) ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ CHARMM GUI Membrane Builder (༥༦, ༥༧) འདི་ dioleoylphosphatidylcholine (DOPC) དང་ Cer C18 ཡང་ན་ DOPC དང་ Cer C26 ཡོད་པའི་ བང་རིམ་གཉིས་ལྡན་བཟོ་ནི་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། Cer C26 གི་ས་སྒོ་དང་མཉམ་འབྲེལ་ཚུ་ DXCE ལས་ sphingosine གི་མཇུག་ལས་ ཕྱེངམ་ཁ་སྐོང་བཏོན་ཞིནམ་ལས་ ཐོབ་ཡོདཔ་ཨིན། བང་རིམ་གཉིས་ལྡན་འདི་ཚད་སྙོམས་བཟོ་ནི་དང་གཡོག་བཀོལ་ནིའི་དོན་ལུ་ འོག་ལུ་གསལ་བཀོད་འབད་ཡོད་པའི་བྱ་རིམ་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ དེ་ལས་ Emp24 ཡོད་པའི་རིམ་ལུགས་ཅིག་བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ནི་ལུ་ རིམ་ལུགས་ཀྱི་མཇུག་གི་མཉམ་འབྲེལ་ཚུ་ལག་ལེན་འཐབ། ཕབས་Emp24གི་ transmembrane domain ༼ལྷག་ལུས་༡༧༣ལས་༡༩༣༽ འདི་ མཐོང་སྣང་MD(VMD)ལག་ཆས་རྡུལ་རྟེན་གྱི་བཟོ་བཀོད་(༥༨)ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ α-helixསྦེ་བཟོ་བསྐྲུན་འབད་ཡོདཔ་ཨིན། དེ་ལས་ མར་ཁུ་གི་རིགས་ཚུ་ བཏོན་བཏང་པའི་ཤུལ་ལས་ འཚོ་བཅུད་འདི་ རྡོག་མ་སྦེ་བཟོ་སྟེ་ CHARMM GUI ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ བང་རིམ་གཉིས་ཀྱི་ནང་ལུ་བཙུགས་ནུག མཐའ་མའི་ལམ་ལུགས་ནང་ ༡༢༠༢ ཌི་ཨོ་པི་སི་དང་ ༣༠༢ སེར་སི་༢༦ ཡང་ན་ ༡༡༩༧ ཌི་ཨོ་པི་སི་དང་ ༢༩༥ སེར་སི་༡༨ དང་ ཨེམ་པི་༢༤ ཡོདཔ་ཨིན། ལམ་ལུགས་འདི་ 0.150M གི་ཆ་ཚད་ལུ་ Ionize འབད། བང་རིམ་གཉིས་ཀྱི་གྲུབ་ཚུལ་གྱི་དོན་ལས་ རང་དབང་ཅན་གྱི་འདྲ་དཔེ་བཞི་བཟོ་ཡོདཔ་ཨིན།
lipid bilayer འདི་ CHARMM GUI བྱ་རིམ་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ འདྲ་མཉམ་བཟོཝ་ཨིནམ་ད་ དེ་ནང་ གོ་རིམ་༤༠༥༠༠༠ མར་ཕབ་འབད་དེ་ འདྲ་མཉམ་བཟོ་སྟེ་ གནས་ཚད་ཀྱི་ བཀག་ཆ་ཚུ་ རིམ་གྱི་སྦེ་ མར་ཕབ་འབད་དེ་ རྩ་མེད་བཏང་ཞིནམ་ལས་ དུས་ཚོད་ཀྱི་གོ་རིམ་འདི་ ༠.༠༠༥ ps ལས་ ༠.༠༢ ps ལུ་ ཡར་སེང་འབདཝ་ཨིན། འདྲ་མཉམ་གྱི་ཤུལ་ལས་ དུས་ཚོད་ཀྱི་གོ་རིམ་ ༠.༠༢ ps དང་ཅིག་ཁར་ ༦ μs ཐོན་སྐྱེད་འབདཝ་ཨིན། Emp24 བཙུགས་པའི་ཤུལ་ལས་ རིམ་ལུགས་འདི་མར་ཕབ་འབད་ནི་དང་ ཚད་སྙོམས་བཟོ་ནི་ལུ་ CHARMM GUI བྱ་རིམ་གཅིགཔོ་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཐོན་སྐྱེད་ནང་ ༨ s གི་དོན་ལུ་གཡོག་བཀོལ།
ལམ་ལུགས་ཆ་མཉམ་གྱི་དོན་ལུ་ འདྲ་མཉམ་གྱི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ གནོན་ཤུགས་འདི་ Berendsen barostat (༥༩) གིས་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིནམ་དང་ བཟོ་བསྐྲུན་གྱི་བྱ་རིམ་ནང་ལུ་ གནོན་ཤུགས་འདི་ Parrinello-Rahman barostat (༦༠) གིས་ ཚད་འཛིན་འབདཝ་ཨིན། གནད་དོན་ཆ་མཉམ་ནང་ སྤྱིར་སྙོམས་གནོན་ཤུགས་འདི་ བཱར་༡ ཨིནམ་དང་ ཕྱེད་ཀ་ཨའི་སོ་ཊོཔ་གནོན་ཤུགས་མཉམ་སྦྱོར་གྱི་འཆར་གཞི་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། འདྲ་མཉམ་དང་བཟོ་བསྐྲུན་གྱི་བྱ་རིམ་ནང་ མགྱོགས་ཚད་བསྐྱར་ཚད་འཇལ་མི་ ཚ་དྲོད་ཚད་འཇལ་ཆས་ (༦༡) འདི་ ཟས་བཅུད་དང་ མར་ཁུ་ དེ་ལས་ བཞུ་རྫས་རྡུལ་ཕྲན་གྱི་དྲོད་ཚད་ཚུ་ གོ་རིམ་བཞིན་དུ་ མཉམ་སྦྲགས་འབད་ནི་གི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། བཀོལ་སྤྱོད་ཆ་མཉམ་གྱི་སྐབས་ལུ་ དམིགས་ཚད་དྲོད་ཚད་འདི་ ༣༡༠K ཨིན། མཐུད་མ་ཚུགས་པའི་འབྲེལ་བ་འདི་ ༠.༠༠༥ བཱ་ཕར་བཟོད་སྒོམ་དང་གཅིག་ཁར་ ཝར་ལེཊི་འཆར་གཞི་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ ཆ་སྒྲིག་ཐོ་ཡིག་བཟོ་བཏོན་འབད་ཐོག་ལས་ རྩིས་སྟོནམ་ཨིན། ཀོ་ལོམ་གྱི་ཐ་སྙད་འདི་ འགྱུར་ལྡོག་ས་སྒོ་དང་ ༡.༡ ཨེན་ཨེམ་གྱི་ བཏོག་ཐག་ཐག་རིང་ཚད་ལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ རྩིས་རྐྱབ་ཨིན། Vander Waals ཟེར་མི་མིང་ཚིག་འདི་གིས་ ཐག་རིང་ཚད་༡.༡ nm གི་ཐོག་ལས་ བཏོག་བཏང་ནི་གི་འཆར་གཞི་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིནམ་དང་ Verlet གི་བཏོག་བཏང་ནི་གི་འཆར་གཞི་འདི་ འོས་འབབ་ཅན་གྱི་འགྱུར་བ་གི་དོན་ལས་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན། ༼༦༢༽
VMDལག་ལེན་འཐབ་སྟེ་ DOPC phosphate beads ཡང་ན་ ceramide AM1 beads དང་ཟས་བཅུད་ཀྱི་བར་ན་ རླབས་ཀྱི་ཐག་ཚད་འདི་ ༠.༧ nm ཨིནམ་དང་ ཟས་བཅུད་དང་གཅིག་ཁར་ འབྲེལ་བ་འཐབ་མི་ lipids གི་གྱངས་ཁ་འདི་ རྩིས་རྐྱབ་ཨིན། གཤམ་གསལ་གྱི་ཐབས་གཞི་དང་འཁྲིལ་ཏེ་ ༼༦༣༽ ནང་བཟུམ་སྦེ་ མར་ཕབ་-ཕྱུགཔོ་(DE) ཆ་རྐྱེན་རྩིས་རྐྱབ་དགོ། DE factor = (ཟས་བཅུད་ནང་ མར་ཁུ་ཡོངས་བསྡོམས་ ༠.༧) ཟས་བཅུད་ ༠.༧ ནང་ (མར་ཁུ་ཡོངས་བསྡོམས་ནང་ Cer བསྡོམས་འབོར་)
སྙན་ཞུ་འབད་ཡོད་པའི་གནས་གོང་འདི་ སྤྱིར་སྙོམས་སྦེ་ཐོབ་ཡོདཔ་དང་ འཛོལ་བ་ཕྲ་རིང་ཚུ་ ཨེསི་ཨི་གི་རང་དབང་འདྲ་བཤུས་བཞི་ཨིན། DE ཆ་རྐྱེན་གྱི་རྩིས་དཔྱད་ཀྱི་གལ་གནད་འདི་ t བརྟག་དཔྱད་ [(averageDE-factor-1)/SE] གིས་རྩིས་རྐྱབ་ཨིན། མཇུག་གཅིག་བགོ་བཀྲམ་ལས་ P གནས་གོང་རྩིས་སྟོན།
GROMACS ལག་ཆས་འདི་ མཐའ་མའི་ 250 ns གི་ནང་འཁོད་ལུ་ Emp24 ཡོད་པའི་ ལམ་ལུགས་ཀྱི་ 2D ཕྱོགས་མཐུག་ཚད་ཀྱི་སབ་ཁྲ་རྩིས་རྐྱབ་ནིའི་དོན་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཡོདཔ་ཨིན། སེ་ར་མའི་ཌི་གི་ཕྱུགཔོ་/ཉམས་ཆག་སབ་ཁྲ་ཐོབ་ནིའི་དོན་ལུ་ སེར་གྱི་མཐུག་ཚད་སབ་ཁྲ་འདི་ སེར་དང་ཌི་ཨོ་པི་སི་གི་སབ་ཁྲ་གི་བསྡོམས་རྩིས་ལས་བགོ་བཤའ་རྐྱབ་སྟེ་ དེ་ལས་ གཟུགས་ནང་ལུ་ སེར་གྱི་ཆ་ཚད་ལས་བགོ་བཤའ་རྐྱབ་ཨིན། ཚོས་གཞི་ས་ཁྲའི་ཚད་འཇལ་ཅོག་འཐདཔ་འདི་ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན།
རྩོམ་ཡིག་འདི་གི་དོན་ལུ་ ལྷན་ཐབས་ཀྱི་རྒྱུ་ཆ་ཚུ་གི་དོན་ལུ་ ཁ་བྱང་འདི་ནང་ལུ་གཟིགས་གནང་།
འདི་ཡང་ མཐའ་མཇུག་ལག་ལེན་འདི་ ཚོང་འབྲེལ་གྱི་ཁེ་ཕན་གྱི་དོན་ལུ་མེན་པར་ ལཱ་ངོ་མ་འདི་ བདེན་པ་ཨིན་པ་ཅིན་ བརྒྱུད་ལམ་གང་རུང་ཅིག་ནང་ ལག་ལེན་འཐབ་ནི་དང་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ནི་ དེ་ལས་ བསྐྱར་བཟོ་འབད་ཆོག་པའི་ གསར་གཏོད་སྤྱིར་བཏང་གི་ ཆོག་ཐམ་གྱི་ གནས་ཚིག་ཚུ་གི་འོག་ལུ་ བཀྲམ་སྤེལ་འབད་ཡོད་པའི་ ཁ་ཕྱེ་སྟེ་ཡོད་པའི་ རྩོམ་བྲིས་ཅིག་ཨིན། རྒྱབ་རྟེན།
དྲན་འཛིན་: ཁྱོད་ཀྱིས་ ཤོག་ལེབ་ལུ་ གྲོས་འཆར་བཀོད་མི་ མི་ངོམ་འདི་གིས་ ཁྱོད་ཀྱིས་ གློག་འཕྲིན་འདི་ བལྟ་དགོཔ་སྦེ་ ཤེས་ཚུགས་ནིའི་དོན་ལུ་ ང་བཅས་ཀྱིས་ ཁྱོད་རའི་གློག་འཕྲིན་ཁ་བྱང་འདི་ ཨིས་པམ་མེན་ཟེར་ ཤེས་ཚུགསཔ་སྦེ་ དྲིཝ་ཨིན། ང་བཅས་ཀྱིས་ གློག་འཕྲིན་ཁ་བྱང་གང་རུང་ཅིག་ བཟུང་མི་བཏུབ།
དྲི་བ་འདི་ ཁྱོད་ལྟ་བཤལཔ་ཨིན་ན་མེན་ན་ བརྟག་ཞིབ་འབད་ནི་དང་ རང་བཞིན་གྱིས་ ཨིས་པམ་གཏང་ནི་བཀག་ཐབས་ལུ་ ལག་ལེན་འཐབ་ཨིན།
སོ་ཕི་ཡ་རོ་ཌི་རི་གུ་ཟི་-གྷ་ལར་ཌོ་ ཀ་ཟུའོ་ཀུ་རོ་ཀ་ཝ་ སུ་ས་ན་སཱ་བི་ཌོ་-བོ་ཟོ་ ཨ་ལེ་ཇན་ཌོ་ཀོར་ཊེ་ཟི་ · གོ་མེཛ་ (ཨ་ལི་ཇན་ཌོ་ཀོར་ཊིས་-གོ་མེཛ) ཨ་ཙུ་ཀོ་ཨི་ཀེ་ཌ་ (ཨ་ཙུ་ཀོ་ཨི་ཀེ་ཌ) ཝ་ལེ་རི་ཡ་ཟོ་ནི་ (ཝ་ལེ་རི་ཡ་ཟོ་ནི་) ཨའུ་སི་ལི་ཡ་ཌོ་ར་ ཨ་གུའི་ལེ་ར་-རོ་མེ་རོ་ ཨ་ན་མ་རི་ཡ་པེ་རེ་ཛི་ལོ་ཧོ་པི་ -ལི་ནེ་རོ་ (Linero) ཝ་ག། མི་ས་ཀོ་ཨར་མན་ (མི་ས་ཀོ་ཨར་མན་) མི་ཡ་ཀོ་རི་མན་ (མི་ཡ་ཀོ་རི་མན་) པྲོ་ཨ་ཀི་ར་ ཨིསི་ཊེ་ཕ་ནོ་ཕེ་ནི་ ཨ་ཀི་ཧི་ཀོ་ནཱ་ཀ་ནོ་ མན་ནུའེལ་མུ་ནིཛ།
3D མཐོ་དྲགས་ཀྱི་ དུས་ཚོད་ངོ་མའི་པར་རིས་ཚུ་གིས་ གདམ་ཁ་ཅན་གྱི་ཐོན་འབྲས་ས་ཁོངས་ཚུ་ནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་དོན་ལས་ ceramide རིམ་སྒྲིག་གི་རིང་ཚད་འདི་ ཁག་ཆེཝ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན།
སོ་ཕི་ཡ་རོ་ཌི་རི་གུ་ཟི་-གྷ་ལར་ཌོ་ ཀ་ཟུའོ་ཀུ་རོ་ཀ་ཝ་ སུ་ས་ན་སཱ་བི་ཌོ་-བོ་ཟོ་ ཨ་ལེ་ཇན་ཌོ་ཀོར་ཊེ་ཟི་ · གོ་མེཛ་ (ཨ་ལི་ཇན་ཌོ་ཀོར་ཊིས་-གོ་མེཛ) ཨ་ཙུ་ཀོ་ཨི་ཀེ་ཌ་ (ཨ་ཙུ་ཀོ་ཨི་ཀེ་ཌ) ཝ་ལེ་རི་ཡ་ཟོ་ནི་ (ཝ་ལེ་རི་ཡ་ཟོ་ནི་) ཨའུ་སི་ལི་ཡ་ཌོ་ར་ ཨ་གུའི་ལེ་ར་-རོ་མེ་རོ་ ཨ་ན་མ་རི་ཡ་པེ་རེ་ཛི་ལོ་ཧོ་པི་ -ལི་ནེ་རོ་ (Linero) ཝ་ག། མི་ས་ཀོ་ཨར་མན་ (མི་ས་ཀོ་ཨར་མན་) མི་ཡ་ཀོ་རི་མན་ (མི་ཡ་ཀོ་རི་མན་) པྲོ་ཨ་ཀི་ར་ ཨིསི་ཊེ་ཕ་ནོ་ཕེ་ནི་ ཨ་ཀི་ཧི་ཀོ་ནཱ་ཀ་ནོ་ མན་ནུའེལ་མུ་ནིཛ།
3D མཐོ་དྲགས་ཀྱི་ དུས་ཚོད་ངོ་མའི་པར་རིས་ཚུ་གིས་ གདམ་ཁ་ཅན་གྱི་ཐོན་འབྲས་ས་ཁོངས་ཚུ་ནང་ལུ་ ཟས་བཅུད་དབྱེ་བ་ཕྱེ་ནི་གི་དོན་ལས་ ceramide རིམ་སྒྲིག་གི་རིང་ཚད་འདི་ ཁག་ཆེཝ་སྦེ་སྟོནམ་ཨིན།
©2020 ཨ་མི་རི་ཀའི་ཚན་རིག་གོང་འཕེལ་ཚོགས་པ། ཐོབ་ཐང་ཆ་ཚང་ཉར་ཡོད། AAAS འདི་ HINARI དང་ AGORA OARE CHORUS CLOCKSS ཀོརསི་རིཕ་ དེ་ལས་ ཀའུན་ཊར་ཚུ་གི་མཉམ་འབྲེལ་པ་ཅིག་ཨིན། མཚོན་རིག་གོང་འཕེལ་ ISSN 2375-2548